去氢表雄酮对培养的人脐静脉血管内皮细胞抗氧化能力的影响

去氢表雄酮对培养的人脐静脉血管内皮细胞抗氧化能力的影响 去氢表雄酮对培养的人脐静脉血管内皮细 胞抗氧化能力的影响 76医学新知杂志2001年第l1卷第2期 去氢表雄酮对培养的人脐静脉血管内皮细胞抗氧化能力的影响 赵志明黄从新王晶郝亚荣李庚山 武汉大学人民医院心内科武汉430060 摘要为观察去氢表雄酮(D哑)对人脐静脉内皮细胞(}nJvBc)抗氧化能力的影响.分别检测经不同裱度 DttK,~(1/mlol/L,5脚L,L,50?L)处理的HuvEc培养液中过氧化脂质代谢产物丙二醛(^?)A)及超氧化物歧 化酶ts0D)的含量.结果显示:经肿瘤坏死园子n(TNF吨)干预后,培养液中SOD含量下降,NDA升高(P< 005);加用I~HEA后培养液中SOD含量回升,加)A下降.高浓度组作用最明显(P<0.01)结果表明,DttEA可 增加内皮细胞的抗氧化能力,可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一 美键词去氢表雄酮;内皮细胞;丙二醛;超氧化物歧化醇 TheEl~eetofDel叮d如q墙?ldros恤姗蚰Anti.exklaltolm ofOutlturetlIb蚴Um"l~llicalVdnB咖l0thdialC印 日laoZ}limingt}rIgc0Tn.WangJ.etal DepartmentofQ州{oIogy,RE帅Hospitalw锄Un临,Wuhan430060 AbstractTo嘴g岫tetheeffectofd咖I啦呻(D壬f队)?aonafeulm~1Ir岫l?nbilicaIveinen. dOthelia1.tttIIVEC),culturedHuVBc慨铡edto捌哪嘲m?oIIofD}队(1咖L,5~e,ol/L,50L) inmedium.The~elltaf加丑l叫Il【khyde(佃A)Budedi鼬t船e(soD)weme日.R嘟tII砒目中嘴uI? ofthecellsto肝ddeere~ed嘲锄t0fSOD删妇Itheoo删ofMDAc0n岫Io呲舯 up(P<0.05). Nxposuleoftheeell~tODHE^(1咖L.5脚L/L,50m/L)c聃即鳅lyinc工芒岫耐o0r岫 柏afSOD岫ddeere~ed conafMD.4.(P<0.05P<0.01).R协ifcathatDItF.~cB-I曲-1日t瓤da姐ofHuvEcw 瑚 c0I1sIdered??e?of.日lll田mclf柙d日. K碍删哪sI州r?pi蛐s鲫e;B幽d曲哪;地岫lddde;sl】慨di鲫I衄8e 临床流行病学研究发现血浆去氢表雄酮 (D旺A)水平与男性冠心病的发病呈负相关…,动 物实验证实D旺A可抑制高脂血症动物模型动脉 粥样硬化的发展L2l,本研究拟从细胞水平研究 I)I-~A对培养的人脐静脉内皮细胞(ttUVFA~)抗氧 化能力的影响,探讨其抗动脉粥样硬化机制. 1材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1主要材料与试剂III?EC株(由武汉大学物 种保存中心提供),DHEA(浙江仙居制药厂生产), 肿瘤坏死因子n(m)(北京帮定生物公司提 供),超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)检测 试剂盒(南京建成生物工程公司产品),10%小牛 血清和Medi?199培养基(均为美国Gib?公司产 赵志明.胃,博士(在读);武汉,武汉大学人民医院心内科 (d30叫Dj. 黄从新,男.主任医师,教授,博士导师(通讯地址同上) 品). 1.2实验方法将生长良好ttIJ~C细胞悬液以 1x1旷个/Inl的浓度接种于25Inl培养瓶中,37?, 5%OO2条件下培养,细胞70%80%融合时更换 培养基.A组为空白组,换无酚红,无血清培养基; B组为对照组,换含n40nInl的无酚红,无 血清培养基;c,D,E组为实验组.先分别加TNF 终浓度为40-ng/Inl的无酚红,无血清培养基, 37?,5%c培养24h后分别加终浓度为1rn/ ,5l,50InI的DHEA,37?,5%O继续 培养24h后吸出条件培养液离心,取上清液用于 检测. 1.3NDA含量测定采用试剂盒介绍的TBA 法,单位为fc-,I.;采用黄瞟呤氧化酶法测定 (SOD)活力,单位为u/L. 1.4统计学处理实验数据以;?表示,在 医学新知杂志2001年第11卷第2期 SPSS统计软件包中进行分析. 2结果 DHEA对HUVEC培养液中SOD,MDA含量的 对照组培养液中SOD 影响见表1.与空白组比较, 含量下降,MDA含量升高(P<0.05);加不同浓度 DHFA后,上述改变逆转,以高浓度组明显(P( 001). 表lVI)HEA对HU'qEC培养液中SOD,MDA含量的影响 与B组比较:*P(005;**P<0.01;**P(0001 3讨论 DHEA是存在于人体内的内源性性激素,具有 弱雄激素作用.近年来DHEA在抗衰老,抗动脉粥 样硬化及抗肿瘤中的作用受到人们的重视,研究发 现DHEA可通过抗细胞分裂,抑制细胞增殖达到抗 动脉粥样硬化的作用_3J.本研究则从DHEA对血管 内皮细胞的抗氧化能力的影响方面探讨其保护内皮 细胞,抗动脉粥样硬化的机制. MDA是细胞过氧化物脂质代谢的终产物,测定 MDA的含量可以反映细胞脂质过氧化水平,间接反 映细胞损伤的程度;而SOD对机体的氧化与抗氧化 平衡起着至关重要的作用,此酶能清除超氧阴离子 自由基保护细胞免受损伤,SOD活力的高低与多种 疾病包括动脉粥样硬化有着密切的联系,本实验除 空白组外,各组均用TNF.a40n处理,使培养的 HUVEC细胞过氧化损伤.大量研究证实TNF-ct可 引起内皮细胞损伤,使培养的人血管内皮细胞肿胀, 线粒体变性,髓样坏死,内皮细胞结构破坏;同时 TNF-~可降低血管内皮细胞一氧化氮水平,增加内 皮素.1的释放,使内皮细胞功能也受损.本研究 发现经加用不同浓度的DHEA后,随着培养液中 DHEA浓度的增加SOD水平升高.MDA含量下降, 向空白组接近,提示DHEA可减轻TNF—a引发的内 皮细胞过氧化损伤,增强血管内皮细胞的抗氧化能 力,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一. 参考文献 1HerIg?nDMDehydroepiandamem~eandco,maryathens- seler~s.AnnYAcadSei,1995.774(2):27l 2EichDM,Nesl/erJE,JohnsonDE,eta1.1rthibitmrtofflCC~- leratedc0HxIm8n日xkswithdehydroepJandrostero~e thelleter嘶rabbitmodelca妇transplartta~onCi~cula? dml,1993,84(1):261 3Funawaad,FtdmiR,Alllsk~twaM,etal[r~bifionofI?ion and出?ofvascularsm,x~mIlsdeceilsbyde- d卫0eDi舯dl?岫删mlfate.Bi0c}Ii_T.BiophysActa,1998,1403 (1):lo7 4沙志一,金惠铭.肿瘤坏死因子对fill-培养的血管内皮细 胞的的作用.中国病理生理杂志,1995,11(4):455 (2OOl一02—05收稿) (上接第75页)出血时间延长和它的出血素质有关. 因此,肝硬化患者血vWF虽高,但它与血小板结合 的受体却反而减少,故其vWF在止血方面起不了多 大作用. 参考文献 1徐萍.周民伟.肝硬化患者血浆血挂索与6_酮-前列 腺索测定的临床意义.临床肝胆杂志,1991,7(2):96 2张美洛.血浆6_酮.前列腺索,血挂素与糖尿病微血 管病变的关系.中华内科杂志,1989,28(3):142 3范宗涝.蔡息芬,施云松.病毒性肝炎血浆血管性假血友 病困子的检测及其临床意义.中华传染病杂志,l9897 (1):46 4黄智铭,韩清锅,胡滨.肝硬化患者血浆GMP-140及 vWF变化的初步探讨.中国实甩内科杂志,1999,19(1):34 5陆德源主编.现代免疫学上海上海科学技术出版社, l99548 6Ja自ch0I-ekK,F耐C.Phteletsewithlivercirr~ exhibitaddcctindmwl~ebrandfactor-~domain.Z- Gar州,1993,31(1)_8 7Sanc~RdgMJ,Rive~aJ.MoraledaJM,e【a1.Quantitative defect啪咖Ibinsevere血p朗扭AmJ i'/emat~l,1994,45(1):lO (2O00—12—17收耩) ?