月季组培快繁技术研究

月季组培快繁技术研究Ξ莫磊兴　牟海飞　邹　瑜　李小泉　林贵美(广西农科院植物组培苗有限公司/南宁530007)摘　要　通过对5个切花月季品种组培快繁技术的研究,探讨了品种、植物生长调节剂、温度和光照强度等对外植体腋芽萌发、嫩茎增殖和生根的影响。茎段腋芽诱导适宜的条件是:MS+BA310mg/L+NAA0115mg/L,温度26℃左右。在MS+BA310mg/L+IAA0115mg/L培养基上,嫩茎增殖达4倍以上。3000lux左右的自然散射光对增殖阶段形成健壮嫩芽有利。小苗移植到沙子与椰糠混合的基质上,成活率达80%以上。关键词　月季组培快繁　品种　植物生长调节剂　温度　光照强度中图分类号　Q945.52;S685.12近年,随着切花种植业的发展,对切花月季种苗的需求量越来越大,传统的扦插或芽接法繁殖种苗,已无法满足生产的需要。1996年开始,我们对目前生产上流行的切花月季品种进行组培快繁技术研究,现已批量化生产种苗供农户种植。1　材料与方法1.1　供试品种供试的切花月季品种共5个,分别是:“萨蔓莎”、黄金时代”、“金奖章”、“特尼克”和“索尼亚”。除品种试验外,其余试验均以“萨蔓莎”作试材。1.2　外植体的选取、消毒处理及启动培养从田间选取生长旺盛、腋芽饱满、无病虫害的嫩茎,剥去叶子和皮剌,先用肥皂水泡洗,再用自来水冲洗干净。将嫩茎剪成约2cm长的小段,每段有一个腋芽,在超净工作台上用75%酒精处理30s,然后用无菌水浸泡3～5min,接着用011%HgCl2溶液处理15min,再用无菌水冲洗4～5次,接种于预先准备好的培养基中,置于相应的条件下培养,2周后统计腋芽萌发情况。1.3　继代增殖培养将启动培养萌发的嫩芽切下,接种于继代增殖培养基上,置于试验要求的条件下培养,每个处理接种不少于10瓶,每瓶接种8个单芽,30d后统计增殖等情况。1.4　生根培养及小苗移植将继代培养形成的嫩芽切下,接种到生根培养基上,置于室温及自然散射光下(4000lux～6000lux)培养,20d后调查发根和小苗生长情况,35d再次调查,并将已长根或已形成根原基的小苗移植到育苗盆上,基质为沙子与椰糠按不同的比例混合。移植后浇水使基质保持湿润但不积水,并用遮阳网、薄膜覆盖,1周后逐渐打开薄膜,2周后调查成活率。第16卷　第4期　　　　　　　　　　四川农业大学学报　　　　　　　　　　　　　Vol.16No.41998年12月　　　　　　JournalofSichuanAgriculturalUniversity　　　　　　　　　　Dec.1998Ξ1998-06-10收稿。由德霖公司陈明煌先生提供试验材料,特此致谢。2　结果与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 2.1　启动培养2.1.1　BA浓度对外植体腋芽萌动的影响在MS+NAA0115mg/L+白糖30g/L+琼脂410g/L的基本培养基上进行不同浓度BA试验。结果表明:高浓度BA对外植体腋芽的萌动及嫩芽的生长均产生了一定的抑制作用,相对低的BA浓度对腋芽的萌动生长有利。在BA3.0mg/L的浓度水平下,不仅外植体腋芽萌动率高,而且形成丛芽的比例较大(表1),被认为是腋芽诱导较适宜的浓度。在后面的两个腋芽诱导试验中,我们均采用这一配方。表1　BA浓度对外植体腋芽萌动的影响Table1　InfluenceofBAconcentrationsongerminationofexplantBA浓度(mg/L)ConcentrationofBA接种茎段数No.ofexplant污染茎段数No.ofcontamination无菌茎段数No.ofasepticexplcnt萌动茎段数No.ofgermination萌动率(%)Germinatingrate嫩芽情况Descriptionofshoots2.05015352262.9大部份为单芽,芽能伸长。　3.05718392461.5约有一半萌动茎段形成丛芽,芽较长。4.04813351542.9嫩芽很短,易玻璃化。　　注:①试验时间(MonthofTest):1996-01,温度条件(Temp.condition):室温(roomtemp.)　②萌动率(Germinatingrate)=萌动茎段数(No.ofgerminationexplants)无菌茎段数(No.ofasepticexplant)×100%;表2、表3萌动计算方法与此表相同(Thesameformulainthenexttwotables)。2.1.2　温度对外植体腋芽萌动的影响试验于1996年6月份进行,供试品种萨蔓莎茎段腋芽在33℃左右室温的萌动率明显低于26℃(表2)。表明高温对腋芽的萌发有明显的抑制作用。表2　温度对外植体腋芽萌动的影响Table2　Influenceoftemperatureongerminationofexplant温度(℃)Temperature接种茎段数No.ofexplant污染茎段数No.ofcontamination无菌茎段数No.ofasepticexplant萌动茎段数No.ofgermination萌动率(%)Germinatingrate26±18421632844.433左右732944818.22.1.3　品种对外植体腋芽萌动的影响在两个不同月份条件下进行试验,两次试验结果都表明:品种间的腋芽萌动率有显著差别(表3)。这种差别可能是由品种的遗传基础所决定的。从表3还可看出,“金奖章”在两次试验中的腋芽萌动率也差别很大,5月份的试验,其萌动率明显降低。这可能与气温的升高有关,温度升高不仅对离体茎段培养过程的芽萌动产生抑制,而且对田间植株的生理状况产生影响,高温会诱导敏感品种进入休眠状态。但“索尼亚”在5月分的较高温度下,腋芽萌动力也很强,表明该品种对温度不敏感,对高温具有强的耐受力。2.2　继代增殖培养2.2.1　BA、NAA、IAA等对芽增殖的影响在试验的BA浓度范围内,嫩芽的增殖倍数随着BA浓度的增加而增加,芽的长度则相044　　　　　　　　　　　　　　　　　四川农业大学学报　　　　　　　　　　　　　　　第16卷应逐渐下降,芽的玻璃化现象也有逐渐加重的趋势。BA浓度在310mg/L以下,芽的长势较好。BA310mg/L与NAA0115mg/L配合,芽增殖倍数可达318,与IAA0115mg/L配合,增殖倍数可明显增加,而芽的长度不发生明显的变化(表4)。因此,芽增殖较适宜的培养基配方为:MS+BA310mg/L+IAA0115mg/L。表3　品种对外植体腋芽萌动的影响Table3　Influenceofvarietiesongerminationofexplant品种variety接种茎段数No.ofexplant污染茎段数No.ofcontamination无菌茎段数No.ofasepticcxplant萌动茎段数No.ofgermination萌动率(%)Germinatingrate备注Remark萨蔓莎Samantha1552313211385.6特尼克Tineke8246362775.0金奖章GoldMedal258175837185.5金奖章GoldMedal4423211152.4黄金时代GoldTimes495443375.0索尼亚Sonia48272121100试验时间(Monthoftest)为1996年3月试验时间(Monthoftest)为1996年5月表4　BA浓度及BA与IAA、NAA配合对芽增殖的影响Table4　InfluenceofconcentrationsandcombinationsofBA.IAAAandNAAonmultiplicationBA浓度(mg/L)ConcentrationofBANAA/IAA浓度(mg/L)ConcentrationofNAA/IAA增殖倍数multiplicatingcoefficient芽平均长度(cm)AverageLengthofshoots　　　芽　性　状　　　Descriptionofbud2.0NAA0.151.54.0芽均匀,节间稍长,基本无玻璃化。2.5NAA0.152.53.5芽较粗壮,轻度玻璃化。3.0NAA0.153.83.2芽较粗壮,轻度玻璃化4.0NAA0.155.11.1芽短、细,叶片卷曲、玻璃化较重。3.0IAA0.154.63.0芽较粗壮,轻度玻璃化。2.2.2　光照强度对继代培养的影响在月季继代培养过程中,光照强度与嫩芽的玻璃化程度有密切的关系,光照强度越低,玻璃化程度越重,在光照强度相近的自然散射光和日光灯照射下,自然散射光的玻璃化率也明显低于日光灯(表5)。月季继代培养较适宜的光照是:自然散射光3000lux左右。采用自然散射光,不仅玻璃化程度较轻,而且可以节省照明用电成本。表5　光源和光照强度对月季继代培养的影响Table5　Influenceoflightsourcesandintensitiesonmultiplication光源Lightsource光照强度(lux)Intensityoflight增殖率(%)Multiplicatingcoefficient玻璃化发生程度Vitrificatingdegree自然散射光Randomnaturallight2500～35003.8+自然散射光Randomnaturallight700～12003.9+++日光灯Fluoresentlight2800～32003.7++注:玻璃化程度表示方法(Vitrificatingdegree):“+”<5%,“++”5%～15%,“++”>15%。2.2.3　品种对继代苗玻璃化的影响144第4期　　　　　　　　　　　莫磊兴(等):月季组培快繁技术研究　　　　　　　　　　　　　　在试验中,我们发现月季继代苗玻璃化程度与品种有密切关系,供试的5个品种中,4个品种都有不同程度的玻璃化,唯独“黄金时代”没有发现玻璃化现象,即使在1000lux左右的光照强度下,其玻璃化发生率也为零(表6),品种之间玻璃化发生程度的差别,其原因和机理有待于深入研究。表6　月季品种与其嫩芽的玻璃化Table6　VarietiesandVitrificationofshoots品　　种Variety在700～1200lux光照下的玻璃化程度(Vitrificatingdegreeat700～1200lux)在2500～3500lux光照下玻璃化程度(Vitrficatingdegreeat2500～3500lux)萨萝莎(Samantha)++++黄金时代(GoldTimes)无无金奖章(GoldMedal)+++索尼亚(Sonia)+++特尼克(Tineke)+++　　注:玻璃化程度表示方法(Vitriicatingdegree):同表5(seetable5)。2.3　生根培养及小苗移植将月季嫩芽接种到①12MS+NAA015;②12MS+IBA015;③12MS+IAA110;④MS+NAA015等四种培养基上。经20d培养后,②号培养基生根率达25%,根长2～4cm,每株发根1～3根,其余培养基均不见长根。培养35d后调查的结果亦无明显改变,但小苗叶片生长正常。将有根或无根的小苗移植到沙子与椰糠混合的基质上,成活率均达到80%以上(表7)。成活的小苗根系十分发达,这可能是小苗在生根培养基上已形成了大量的根原基的缘故。小苗经30～40d假植后,苗高达6～10cm,即可移到大田种植。表7　基质对月季小苗移植的影响Table7　InfluenceofMatrixontransplantofPlantlets基　　质Matrix移植小苗数No.ofplantlet成活小苗数No.ofSurvival成活率%Survivalrate沙(sand):椰糠(Coconuthusk)　　1:120016884沙(sand):椰糠(Coconuthusk)　　2:120017889沙(sand):椰糠(Coconuthusk)　　1:220016180.53　讨　论大部分月季品种都喜欢凉爽的气候环境,但温度对月季组培的影响却未见报道。本研究结果表明高温对月季的腋芽及嫩芽增殖都有不利的影响。因此,在南方地区进行月季组培苗生产,夏季降温问题要引起重视。不同月季品种,即使在相同的培养基和培养条件下,腋芽萌动或嫩芽增殖和生长等情况会有很大差别,这与蔡军等[1]的研究结果相类似。在月季组培苗生产中,应根据品种的差别对培养基和培养条件进行合理调整,以降低生产成本。毕艳娟等[2]报道ZT诱导月季茎段出芽的效果明显优于BA。在本试验中,使用适当的BA浓度,也能达到较高的萌动出芽率,但BA浓度过高会抑制腋芽的萌发,这与李正平[3]的研究结果相一致。本研究的生根试验表明,即使没有形成肉眼可见的根,但小苗移植到适当的基质上,发根很快,根系发达,成活率高。朱鹿鸣等[4]也认为具根原基的试管苗比根系已长出的试管244　　　　　　　　　　　　　　　　　四川农业大学学报　　　　　　　　　　　　　　　第16卷苗移栽成活率高,并且耐贮藏,不易烂苗,可脱离培养基长途运输,实现了苗木运输“微型化”。参　考　文　献1　蔡　军等.月季多芽苗的诱导及其无性系快速繁殖.植物生理学通讯.1984,(5):37～382　毕艳娟等.植物生长调节剂对丰花月季茎段培养的影响.河北农业技术师范学院学报,1994,8(3):26～293　李正平.月季试管繁殖和移栽中几个因素的研究.园艺学报,1988,15(2):131～1344　朱鹿鸣等.名贵月季试管繁殖与试管苗移栽.园艺学报,1985,12(4):273～276STUDYONTECHNIQUEFORMICROPROPAGATIONOFROSEMoLeixing　MouHaifei　ZouYu　LiXiaoquan　LinGuimei(GuangxinginvitroplantCo.Ltd,GuangxiAcademyofAgriculturalSciences/Nanning,China530007)Abstract　Studiesoninfluencesofvarieties,plantgrowthregulators,temperatureandintensityofilluminationonbudgermination,mutiplicationandrootingwerecarriedoutthroughthemicropropagationof5varietiesofrose.Theresultsshowthatforgrowthinitia2tion,theoptimummediumisMS+BA310mg/L+NNA0115mg/L,andtemperatureisabout26℃.ShootsculturedonthemediumofMS+BA310mg/L+IAA0115mg/Lcouldbemulti2plicatedby4foldandabove.3000luxofrandomnaturallightisusefulforrobustbudforma2tion.80%ofsurvivalratecouldbeobtainedwhenplantletsaretransplantedtothematrixcon2sistingofsandandcoconuthusk.KeyWord　MICROPROPAGATIONOFROSE　　VARIETIES　　PLANTGROWTHREGU2LATORS　　TEMPERATURE　　INTENSITYOFILLUMINATION.(本文审稿王永清)344第4期　　　　　　　　　　　莫磊兴(等):月季组培快繁技术研究