CKMB的活性测定和质量测定
方法
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目前检测CK-MB的检测方法分活性测定和质量测定法两大类。问
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单出现CKMB酶活性检测结果大于CK酶活性检测结果？现象：某客户反映在某某全自动生化
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仪个别临床标本其CK-MB检测结果与CK结果不相符，CK结果在正常范围内，而CK-MB结果却明显偏高，甚至出现CK-MB结果高于CK。分析：某某CK-MB检测试剂盒为选择抑制动力学法，检测的是CK-MB活性（CK-MBActivity）。该法检测原理为：利用人血清中几乎不含CK-BB的特点，采用抗CK-M单体的抗体将M亚基完全抑制，然后通过一系列反应来检测CK-B的活性，再将CK-B的活性结果乘2即得CK-MB的活性。分析该法检测CK-MB结果与CK不符的原因可能有：1、试剂因素，主要表现为试剂污染或使用已过有效期的试剂。一般医院的CK-MB检测标本量较小，因此一盒试剂往往长期、多次使用，从而有可能导致试剂污染。此外有极少数单位因为标本量太小，对已过有效期的试剂舍不得弃之，因而存在使用过期试剂的现象。当血液中CK含量很高时，试剂中抗体的量相对不足(可加大试剂的使用量解决)，导致抗体抑制作用不完全，使检测结果比实际结果高。2、仪器因素，主要表现为对仪器使用熟练程度不够，参数设置有误。CK与CK-MB不同，CK校准品和质控品在大多数的复合校准品或质控品血清中均提供有其参考值，而CK-MB则由于其本身的不稳定性，市面上CK-MB的校准品或质控品较少见，而且其价格也较其他酶类校准品高得多。因此，一般医院都未使用CK-MB校准品和质控品，而是采用厂家试剂盒使用说明书提供的理论因素，在理论因素设置时，不同仪器略有差异。大多仪器理论因素设置与测定结果的小数位数无关，因而可随便设置，而有些仪器则不然，如日立生化分析仪，其结果的小数位数与因素直接相关，存在10n（n为整数）倍数关系。因此，在该类仪器上凡是使用理论因素的检测项目其结果保留的小数位应与理论因素保持一致，否则将会出现检测结果缩小或放大10n倍。3、标本因素或方法学因素。从抑制法检测CK-MB活性原理中不难分析出当血清中存在多量可检测CK-BB或巨CK1、巨CK2（巨CK1、巨CK2其活性不受抗CK-M单体的抗体抑制）时，【CK-Mt(线粒体CK又称巨CK2)，巨CK1(CK-BB与自身免疫球蛋白的复合物)】，其B亚基活性同CK-MB中B亚基一起被检测后乘2，检测活性结果自然明显高于真实值，甚至出现CK-MB活性大于CK总活性的可能。电话联系客户得知其试剂盒为最近新开，CK-MB日标本检测量较大，绝大多数临床标本检测结果较好，极个别标本出现CK-MB占CK总活性偏高。其参数设置和试剂空白校准均无问题，因此可排除仪器试剂因素。综合上述情况，分析客户CK-MB活性检测结果异常多系临床标本本身因素所致，导致免疫抑制法不仅能检测出CK-MB真实活性，客户对此说法表示赞同。处理：建议在排除试剂、仪器因素外，对结果异常的标本应该引起重视，注意结合临床病史，必要时结合其他方法来确定CK同功酶的具体成分和质量含量。讨论：CK是由B、M两种不同亚基组成的二聚体，正常人组织中通常含有CK-BB（CK1）、CK-MB（CK2）、CK-MM（CK3）三种同功酶。CK-BB主要存在于脑组织、胃肠道及子宫平滑肌中，脑组织中几乎全为CK-BB，CK-MB主要存在于心肌组织中，CK-MM主要存在于骨骼肌组织中。在正常人血清中几乎无CK-BB或非常痕量。目前检测CK-MB的检测方法分活性测定和质量测定法两大类。活性测定（CK-MBActivity）多为选择抑制法，易受标本失活、CK-BB释放入血等影响。CK-MB质量法（CK-MBmass）又分电泳法（灵敏度较差）、ELISA（测定时间偏长）法和酶免法（易自动化，但仪器要求较高），其检测均不受CK-MB失活影响，有资料表明当发病4小时以后，质量法检测结果的可靠性明显优于CK-MB活性测定，在没有开展cTnI（肌钙蛋白I）或cTnT（肌钙蛋白T）的实验室，CK-MBmass的测定对于ACS（acutecoronarysyndrome,急性冠状动脉综合症）或AMI（急性心肌梗塞）在敏感性和特异性上都接近肌钙蛋白。但由于CK-MB质量法仪器要求、试剂成本等都相对较活性测定高，因此目前国内CK-MB活性测定仍然使用普遍。考虑到CK-MBActivity的使用广泛及其方法学本身的缺陷，笔者对该法的应用提供几点建议：1、注意采血时间，空腹是否达到8到12小时；2、采血时避免溶血的干扰，红细胞中的腺苷酸激酶(AK)可直接参与CK-MB检测的第二步反应，对CK-MB的检测结果产生一定的影响导致假性增高。3、CK-MB项目标本应及时检测，以免活性下降，导致测定假性偏低；4、对CK正常而CK-MB活性异常与临床表现不符或者CK-MB结果大于总CK时的标本，应结合其他方法来确定CK同功酶的具体成分及其含量，同时检验报告单上要备注标记提示；5、结合临床情况。如脑组织、胃肠道及子宫平滑肌坏死可使血清中的CK-BB升高，体质较差的人群、妇女及老人等体内存在巨CK1（一种CK同功酶与其自身抗体的复合物，主要为CK-BB与IgG或IgA的复合物，亦有少量CK-MM与IgG或IgA的复合物），恶性肿瘤、肝硬变、心脏病等患者血清中可能存在巨CK2（一种低聚的线立体CK，又称CK-Mt，正常血清中不出现，心梗时也不出现，只有当组织严重损伤时，由于线粒体和细胞壁的重度破坏入血，才会在血清中检出），而CK-BB、巨CK1和巨CK2其活性均不受抗CK-M单体抗体的抑制，因此容易导致检测结果偏高。蛋白质的分子结构可划分为四级：一级结构是蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序，也是蛋白质最基本的结构。二级结构是指多肽链中主链原子的局部空间排布即构象，不涉及侧链部分的构象。超二级结构是指在多肽链内顺序上相互邻近的二级结构常常在空间折叠中靠近，彼此相互作用，形成
规则
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的二级结构聚集体，是蛋白质构象中二级结构与三级结构之间的一个层次，故称超二级结构。超二级结构有三种基本形式:α螺旋组合(αα);β折叠组合(βββ)和α螺旋β折叠组合(βαβ)，其中以βαβ组合最为常见。结构域也是蛋白质构象中二级结构与三级结构之间的一个层次。三级结构是多肽链在各种二级结构的基础上再进一步盘曲或折迭形成具有一定规律的三维空间结构，每个具有独立三级结构的多肽链单位称为亚基。可形成某些发挥生物学功能的特定区域，例如酶的活性中心。具有二条或二条以上独立三级结构的多肽链组成的蛋白质，其多肽链间通过次级键相互组合而形成的空间结构称为蛋白质的四级结构。四级结构实际上是指亚基的立体排布、相互作用及接触部位的布局，亚基之间不含共价键，亚基间次级键的结合比二、三级结构疏松，因此在一定的条件下，四级结构的蛋白质可分离为其组成的亚基，而亚基本身构象仍可不变。
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