5杂交育种

杂交育种 第1节 杂交育种的概念和成就 杂交（crossing, hybridization）:是指两个遗传组成不同的亲本之间的交配，所产生的后代称为杂种（hybrid）。对森林树种来说，杂交通常是指不同树种或同一树种不同品种或不同类型间的交配。 根据杂交亲本双方亲缘关系的远近，可分为种内杂交、种间杂交和属间杂交。 种内杂交是指同一树种不同品种、类型间的杂交，成为近缘杂交； 种间杂交和属间杂交称为远缘杂交。 有性杂交时引起生物体产生遗传变异的原因之一。通过杂交取得杂种，可能具有双亲特有的优良特性，或在生长势、生产力或抗逆性方面比亲本强，杂种出现的这种优势叫杂种优势（heterosis）。 实际上并非所有的杂种或杂种所有的特性都能表现出杂种优势，有时杂种可能表现劣势。因此杂交不等于杂交育种，杂交只是杂交育种的初步工作。杂交育种（hybridization breeding）是通过杂交取得杂种，并对杂种进行鉴定、选择，最终获得优良品种的过程。 在用有性杂交方法进行树木改良，是应用广泛而有效的方法。 树木杂交育种的历史较短，世界各国在人工杂交工作中，做得最多，成就最大的是杨树和松树。在杨树和松树杂交育种中，又多是以种间杂交为主。 英国早在1912年就选育出格氏杨（卡洛林杨×毛果杨）。美国从1924年起，进行了系统的杨树育种工作，包括种和变种，作了99个杂交组合，获得1．3万多株杂种苗。前苏联于1933～1941年间进行杂交组合123个，获得了苏维埃塔型杨、雅柏洛科杨、斯大林工作者杨等新品种。西欧各国进行了欧洲黑杨和美洲黑杨的杂交工作，从中选育出的健杨、五月杨等杨树杂种，已成为欧洲各国的主要造林树种。 我国杨树杂交工作开始较晚，但发展很快，北方各省（区）几乎都进行了杨树杂交工作，选育出不少优良品种。例如小黑杨（小叶杨×欧洲黑杨），在北京地区，15年生树平均高21m，平均胸径28cm，单株材积0．54m3，在河南封丘11年生树高16m．胸径26．6cm； 群众杨是以小叶杨为母本，钻天杨和旱柳的混合花粉为父本的人工杂种，较抗寒，耐干旱，抗病虫，适应性强。如河南把县的龙太公路两旁，8年生群众杨树高18cm，胸径36.1cm，单株材积0.97m3，群众杨的39和49号无性系为最好。小美12号（小叶杨和钻天杨的杂交种）具有较强的抗盐能力，在土壤含盐量达0．5％，常年地下水位处于l米以上的地区，如静海县杨家园村，6年生小美12号，平均高达12m，胸径9．6cm，发根力强，扦插成活率达80％以上。 北京杨（钻天杨×青杨）生长快，干形好。 早在 1845年德国人就做了欧洲赤松×欧洲黑松的杂交。其次是进干了海岸松×辐射松的杂交，杂种第一代具有母本的耐寒性和生长快的特性。美国从1925年起进行了大量的松属种间杂交试验，他们从世界各地收集了64种松属原始材料，进行了200多个杂交组合，效果良好。例如瘤果松×辐射松的杂种，提高了对不良立地条件的适应性；长叶松×辐射松的杂种，提高了对不良立地条件的适应性；长叶松×湿地松的杂种，抗松梭形干锈病和松褐班病，适于这两种病害严重感染地区造林；金牛松×（金牛松×大果松）的杂种，对松梢象甲有抗性；欧洲赤松×日本赤松的杂种，在10年生时可超过欧洲赤松30％～40％。 我国在60年代初开始了松树杂交试验工作，进行了油松派和南方松派之间的杂交，自1961年以来，先后选配了近30个派间和派内杂交组合，试验结果表明，刚松×火炬松、黑松×云南松、黑松×（湿地松十火炬松十云南松）的杂种第一代优势较强。 丹麦于1926年开始了欧洲落叶松×日本落叶松的杂交试验，10年生的Fl代比日本落叶松生长快18％。日本进行的日本落叶松×兴安落叶松的杂交，耐寒性超过亲本，且抗鼠害。我国进行的日本落叶松×长白落叶松试验，1年生杂种苗表现速生、抗霜冻特性。 除了杨树和松类外，我国还进行了杉木，泡桐，榆树，柳树，马挂木，竹类，橡胶，油桐等的杂交试验。 第2节 杂种优势的表现及其理论基础 1、 杂种优势的估算方法 杂种优势一般通过以下几种方法估算： （1） 平均优势法：以杂种F1代超出双亲平均值来表示。 （2） 超亲优势法：以杂种F1超出双亲中最优亲本来表示。 （3） 对照优势法：以杂种F1超出对照来表示。 2、 杂种优势的表现 假如两个随机交配群体（P1P2）作为亲代群体进行杂交，亲代群体杂交产生杂交第一代，杂交第一代的个体再随机交配产生第二代。其杂种优势估算如下： 设一个亲代群体某一位点的两个等位基因的频率是p和q, 另一个亲代群体的基因频率为p’和q’，两群体间的基因频率之差为y 。AA基因型值为 （+a）, Aa基因型值为（d），aa基因型值为 （-a）。于是 y = p – p = 1 – q – ( 1 – q’ ) = q’ – q 而 p’ = p – y q’ = q + y 亲本群体平均数 MP1＝a ( p – q ) + 2pqd MP2 = a (p’ – q’ ) + 2p’q’d = a ( p – y – q – y ) + 2d ( p – y ) ( q + y ) = a ( p – q – 2y ) + 2d [(pq + y ( p – q ) – y2 ] 中亲值（两个亲本的平均值）为 MP＝ 1/2 ( MP1 + MP2 ) = 1/2 {a ( p – q ) + 2pqd + a ( p – q – 2y ) + 2d [(pq + y ( p – q ) – y2 ] } = a ( p – q –y ) + d [2 pq + y ( p – q ) – y2 ] 两个亲本群体随机交配，P1×P2合子的频率 P1 P2 来自P1的配子 A ( p ) a ( q ) 来自P2的配子 A ( p – y ) p ( p – y ) q ( p – y ) a ( q + y) p ( q + y ) q ( q + y ) P1×P2第一代基因频率与基因型频率 基因型 AA Aa aa 频 率 p ( p – y ) 2pq + y ( p– q ) q ( q + y ) 基因型值 a d -a 杂种F1代的平均基因型值为： MF1 = ap ( p – y ) + 2pqd + dy ( p– q ) – aq ( q + y ) = a ( p2 – py – q2 – qy ) + d[ 2pq + y ( p – q )] = a (p – q – y ) + d [ 2pq + y ( p – q )] 根据杂种优势的概念，可得杂种优势： HF1＝ MF1－MP ＝ ｛a (p – q – y ) + d [ 2pq + y ( p – q )]｝－{ a ( p – q –y ) + d [2 pq + y ( p – q ) – y2 ]} ＝ dy2 综上所述，杂种优势的产生取决于显性度，没有显性的位点(d=0)，既不导致近交衰退，也不导致杂种优势，在群体间基因频率上没有差异也不会产生杂种优势。当一个等位基因固定于一个群体中，另一个基因固定与另一个群体中时，杂种优势将显得最大。 以上是以一个位点的效应来讨论的，如果归属于各个位点的基因型值可以加性地组合，那么可以将全部位点的分别分量累加起来作为全部位点的联合效应，及杂种第一代的杂种优势HF1＝∑dy2。 必须指出，假如有许多位点，有些位点在某一方向中为显性，另一些位点在另一方向为显性，则它们的效应将会相互抵消。所以在杂交中，杂种优势的产生，有赖于方向性的显性。 一般来说，杂种优势主要表现在F1代。根据性状遗传的基本规律，F2代群体内必然出现形状的分离和重组。因此，F2代与F1带相比较，优势的表现都将显著下降，既所谓衰退现象。并且，2个亲本的纯合度用高，性状差异愈大，F1代表现的杂种优势越大，则其F2代表现衰退现象也愈加明显。所以，在农业生产上，只利用F1带的杂种优势，F2代一般不再利用，必须重新制种，才能满足生产的需要。 3、 杂种优势的理论基础 杂种优势是一种普遍的生物学现象，杂种优势的利用已在生产实践中发挥巨大作用，杂种优势的遗传学基础问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 是近百年来几代科学家辛勤求索的重大科学问题。关于杂种优势的遗传解释和形成原因的理论探讨，许多学者从不同的研究结果提出了各种假说，主要是显性假说和超显性假说，以后又提出各种补充性假说，但对它们的实质及其规律，还没有十分明确的结论，还有许多地方尚待深入探讨。 （1） 显性假说 （dominance hypothesis ） 此假说最先由布鲁斯以数学形式提出，认为杂种优势是由F1综合了原来分别存在于2个亲本中有利的显性基因或部分显性基因，从而掩盖了不利的隐性基因的结果，既杂交亲本的基因频率和显性程度有差异。这是以前比较广泛接受的一种遗传假说，用以解释近交衰退和与之相反的杂种优势现象。 假如它们有5对基因互为显隐性的关系，分别位于2对染色体上。同时假定各隐性纯合基因（如aa ）对性状发育的作用为1，二个显性纯合和杂合基因如（AA和Aa）的作用为2。其杂种优势可表示如下， 这个假说认为，杂种优势的产生正是由于有利显性基因聚合积累，相互补充的结果。杂合个体进行自交或近交就会增加子代纯合体出现的机会，暴露出隐性基因所代表的有害性状，因而造成自交衰退。如果选用这些不同的自交系（纯系）来进行杂交，那么由一个亲本带入子代杂合体的隐性基因就会被另一亲本的显性等位基因所遮盖，从而产生杂种优势。 （2） 超显性假说 （over dominance hypothesis） 超显性假说也称“等位基因异质结合假说”。这个假说的概念最初是由沙尔（G．H．Shull）和伊斯特（E．M．East）于1908年分别提出的。他们认为，杂种优势是由于结合的配子差异的增加，而产生发育上的生理刺激作用。从遗传学上讲，在杂合体中许多基因位点处于杂合状态较任一纯合体为优，而且优势随着杂合性程度的增加而增加。按照他们的原始概念：“杂合性引起某些生理刺激，从而使杂种个体较大，优势更强和产量更高”，他们认为杂合性，即异质结合所引起的基因的互作，是产生杂种优势的根本原因。 根据这一假说，等位基因间没有显隐性的关系；杂合等位基因间的相互作用显然大于纯合等位基因间的作用。假定a1a1一对纯合等位基因能支配一种代谢功能，生长量为10个单位；a2a2另一对纯合基因能支配另一种代谢功能，生长量为 4个单位。杂种为杂合等位基因ala2时，将能同时支配al和a2所支配的2种代谢功能，于是可使生长量超过最优亲本而达到10个单位以上，这说明异质等位基因优于同质等位基因的作用，即a1a2＞a1a1；a1a2％＞a2a2。由于这一假说可以解释杂种远远大于最优亲本的现象，所以称为超显性假说。 现同样用基因型表达方式为例。假定2个亲本各有5对基因与生长势有关，各等位基因均无显隐性的关系。同时，假定 a1a1、b1b1等为同质等位基因时的生长量为1个单位，而a1a2、b1b2等为异质基因时的生长量为2个单位。这2个自交系杂交产生的杂种优势可表示如下: 由此可见，由于异质基因的互作，F1的杂种优势可以显著地超过双亲；如果非等位基因间也存在互作，则杂种优势更能大幅度地提高。 上述2个基本杂种优势遗传理论假说，都有它们各自的实验根据，并可以解释某些杂种优势现象，而又各自存在一些缺点，无法单独对所有杂种优势现象进行圆满解释。因此，杂种优势可能是由于某一个或几个遗传因素造成的，它们的交互作用非常复杂，即可能是由于双亲显性基因互补、异质等位基因互作和非等位基因互作的单一作用，也可能是由于这些因素的综合作用和累加作用。因而可以把这2种假说都看成是总的杂种优势理论中的组成部分，可以相互补充，而不是互相排斥。 关于杂种优势的遗传理论，还有遗传平衡假说、杂种生境假说等。总的说来，关于杂种优势的遗传机理，尚属假说的性质，迄今还没有比较满意的解释，需要通过生产实践和科学实验去探索和进一步完善。 第3节 人工杂交 1、 杂交方式 在一个杂交育种 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 中，参与杂交的亲本数目以及各亲本杂交的先后次序，称为杂交方式。 有性杂交中，供应花粉的植株，叫父本，以符号♂来表示；接受花粉，而发育成果实和粽子的植株较母本，以符号♀表示；×号表示有性杂交，母本写在前面，父本写在后边。 1、 单交 单交是指两个不同的树种或品种进行交配，由此法所得的杂种叫单交种。简单杂交时可采用正交和反交，正交和反交即两亲本可互为父母本，如A×B为正交，则B×A为反交。由于母本往往具有较强的遗传优势，正交和反交的结果往往不同。如小叶杨×钻天杨，与反交钻天杨×小叶杨，在生长及耐寒性上都是有差异的。 2、 三交 三交是单交所得F1再与第三者杂交，即（A×B）×C。如（旱柳×钻天柳）×垂柳。三交种可比单交种结合更多的特性，但在这类亲本中，亲本所占核遗传组成的比重不同，A、B亲本在杂种中各占1／4，而C为1／2。 3、 双交 是用两个不同的单交种进行杂交，即（A×B）×（C×D），如（毛白杨×新疆杨）×（银白杨×欧洲山杨）。在双交杂种中，A、B、C、D的遗传组成各占1／4。 4、 回交 回交指单交得到的F1再与其亲本之一进行杂交。用作回交的亲本叫回交亲本。采用回交的目的，是为了加强回交亲本优良性状的传递，从而获得育种上期望的类型。采用回交时，应当在杂种第一代就进行回交。优良性众多的品种先作母本，而在以后各次回交时作父本。 A×B F1×A F2×A 经过一代或几代的回交，可把回交亲本一方的优良性状在杂交后代中加强。回交的次数根据实际需要而定。 5、 多父本混合授粉杂交 多父本混合授粉杂交是选择两个以上的父本，把它们的花粉混合起来，对一个母本进行授粉，即A×（B＋C＋D＋… ）。如小叶杨×（钻天杨＋旱柳）。混合授粉方式一般是在克服远缘杂交困难时采用，所混合的花粉多为异属异种花粉。 2、 杂交亲本选择的原则和 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 亲本选择包括杂交组合的选择和杂交植株的选择。如为远缘杂交，前者指在那些树种间杂交，那个做父本，那个做母本，后者只挑选杂种的父母本植株。 确定杂交组合应遵循以下原则： 1、根据育种目标选择亲本。 如主要育种目标是速生丰产，就必须选择速生树种为亲本材料。如果主要目标是抗病，则应选用抗病的品种为亲本材料。若亲本双方都不具备速生或抗性，而指望在杂种后代中选出速生或抗性类型是非常困难的。 2、亲本应具有较多的优良性状，双方的优缺点应能够互相弥补。 选择亲本是要选优点多、缺点少的亲本，亲本双方的优缺点能够互相弥补，才能满足育种目标的要求。亲本双方可以有共同的优点，但不能有共同的缺点。如果两个亲本都是速生的，虽然其中有一个木材优良，另一个材质较差，还可以考虑作为一个杂交组合，如果两个亲本材质都差，就难以指望出现材质优良的杂种。 3、 选用当地优良品种及选用生态类型差异较大的树种作亲本 当地优良树种或品种对本地条件有较强的适应性，综合性状也比较优良，所以用它作杂交亲本育种成功的希望较大。用不同生态型、不同地理起源的品种和树种作亲本，可是杂种后代的遗传基础更为丰富，会出现更多的变异类型，甚至出现超亲的优良性状。 如不同纬度树种杂交，适应区域不同。 4、 根据亲本性状遗传传递能力大大小进行选配 亲本性状的遗传传递能力是不同的，了解其性状遗传传递能力，对于选育出理想的杂种具有重要意义。如杨树树干的通直度和冠形的广义遗传力，据研究是比较高的。如果育种目标为速生、树干通直、具有塔形树冠，则美洲黑杨、新疆杨、箭杆杨、窄冠毛白杨都是良好的亲本。 此外，在亲本选配时，应当着重考虑选择母本的问题，一般认为母本的性状遗传往往强与父本，特别在亲缘关系较远的组合中，表现更为明显。 杂交组合确定以后，要在适宜的地区选择具有优良特性的植株作为亲本。杂交植株的选择，也是杂交育种成败的关键。同一个杂交组合，往往由于母树个体的不同，杂交效果也不相同。如用同一种花粉，与50个不同的母本杂交，其子代高生长相差可达40.3％。因此必须选择优良个体作为亲本。用材树种亲本的选择，应注意生长量大，干形通直、分枝角细等优点。可参考优树选择标准。 3、 花粉技术 1、 树木的开花、授粉和结习性 要进行杂交，就需要了解树木的始花年龄。始花年龄在不同树种中，甚至在不同个体中有明显差别，但也受树木所在地条件，如土壤养分、水分条件、光照状况、温度等影响。一般来说，孤立木的开花树龄较林木早；贫瘠干旱地段上的较肥沃湿润地段上的早；分布区南部的较北部的早；嫁接植株较实生树早。 杂交前要了解杂交树种花的构造。泡桐、刺槐、榆树等在同一朵花中有雌蕊和雄蕊，属两性花；松、侧柏、落叶松、杉木、柳杉等树种的雌雄花分别着生在同一植株上，为雌雄同株异花；银杏、杨、柳、水曲柳等雌雄花分别着生在不同植株上，属雌雄异株。对花构造不同的树种，杂交操作难易不一，成功率也不一样。对两性花，杂交前需先去雄蕊，这既费事，又易损伤组织、影响杂交成功。 树木授粉方式主要分为风媒和虫媒两种。森林树种大部分为风媒花。花被不完全，或完全没有，柱头分叉多，便于接受花粉。松类等花粉粒，具有气囊，便于在空气中浮游。此外树木一般多在放叶前或放叶的同时开花。花粉的传播距离远。虫媒花常具有艳丽的花冠和香气，并分泌蜜汁招引昆虫传播。有些虫媒树种，如柳、锻、油茶等也可以借助风力传播。 按花粉的来源与母本的亲缘关系，可分为自花授粉和异花授粉。自花授粉是指同一朵花、同一植株不同朵花间、以及同一无性系的不同嫁接植株间的授粉。树木多数属异花授粉。自花授粉时常表现不孕，或子代表现不正常。雌雄同株的树木中，常有雌雄异熟现象，这可能是防止自花授粉的机制。 杂交前还要了解由授粉到种子成熟需要经历多少时间。以及由每个果实或球果能得到多少种子，以便正确确定工作进程和杂交规模。松类由传粉，花粉管萌发到受精约需1年，所以头年春天杂交到第二年秋末才能取得种子。 2、 花粉的采集 为保证杂交工作的顺利进行，必须在雌花开放前准备足够数量的花粉。花粉采集方式可分为三种。 （1） 树上采集 凡花粉量多，而且撒粉期较长者，如松、杉、油茶等树种可采用此方法。要掌握撒粉规律，一般风媒花于上午9时左右开始撒粉，11－14时，是雄花盛开的时间。在选好的父本植株上，预先把即将开放的花蕾或花序用亚硫酸酯袋或塑料袋套起来，以防花粉混杂，一旦花粉撒出时即落在袋中，或直接抖动花枝，使花粉直接撒落袋内，去袋收集。室外收集花粉的南易与树种、开花早迟和撒粉特性有一定关系。 （2） 摘下花枝收集 有些树种的花，撒粉的延续期较短，花粉容易飞散，又不便于上树收集，如杨、榆、板栗、核桃等，可直接采集即将散粉的花穗，铺在纸上阴干，使花药开裂，花粉散出，收集花粉。注意严防花粉相互污染。将收集的花粉，存放在小瓶内，贴上标签，注明品种，置于盛有氯化钙的干燥器中。 （3） 培养花枝收集 凡开花撒粉时间较短的树种，如杨、榆、柏树、水杉等树种，可在雄花开花前剪下花枝水培。一般在雄花开放前，采集带花苞的枝条，用清水培养，在瓶子下面铺一张干净白纸或塑料薄膜，待雄花开放，花药自然破裂时，花粉即可自行散落，或用干净毛笔去扫。注意不同树种划分要分开水培，隔离收集。防止相互污染。 提前切取花枝培养的时间因树种而异。如杨树在自然散粉前10—15周采条；尚能得到正常的花粉。对花芽发育至散粉过程长的云杉、松、冷杉、雪松等针叶树种，可分别在自然界散粉前8、4、4和3周采取花枝培养，采集花粉。 足够的花粉量是保证杂交成功的因素之一。由一株树上能采集的花粉量因树种而异，也因树木年龄、营养状况而异。同一棵树的不同部位，花序的产粉量有时也不一样，如着生在松树树冠中部外侧的雄球花产粉量高。一些树种花粉产量参见表6—1。 3、 花粉的储藏和运输 由于杂交树种花期不一致，为了顺利进行杂交应预先准备好花粉，或进行远距离杂交要长途运输花粉，都需预先储藏花粉。花粉寿命的长短因树种和储藏条件不同而异，一般风媒花花粉的生活力，在干燥、冷凉的室温下可保持1－2个星期。杉木、云杉、柳杉、松树的花粉储藏在适当的温度和湿度下，可以保存数年。杉木的花粉在低温下保持17年之久。杨树、柳树花粉一般只能保存1周左右。 温度和含水量是影响花粉生活力的主要因子。高温、高湿会使花粉很快丧失生命力，而极干燥的条件也不利于保存。人工储藏花粉，就在于创造低温、黑暗、干燥的条件，降低花粉呼吸作用和其它代谢过程，使花粉处于休眠状态，延长花粉寿命。 花粉收集后，首先要进行干燥。干燥方法可采用干燥器法，即把收集好的花粉装在玻璃皿中，不加盖，防止育盛有氯化钙或硅胶的干燥器中进行干燥，12－24小时后即可密封储藏。多数针叶树种最适宜储藏的含水量为8－10％以下。其标准是花粉能自由飞扬而不粘附在玻璃贮藏器壁上，干燥后的花粉应去除杂质，分别装在指形管或小玻璃瓶中，不易装满，以容器的4／5或更少为宜，瓶口用双层纱布包扎，贴上标签，注明品种和采集日期。放置于干燥器内，于低温下保存。一般划分可在0－5度的温度下储藏，也可储藏在－20度的冰箱中。采用低温储藏时，温度应逐渐升降。 许多风媒传粉树种的花粉，当干燥到含水量适于储藏时，可以放入小玻璃瓶中邮寄。瓶口塞以棉花，装入木匣子内快速寄运。少量的花粉可用光洁的半透明纸包好，放在信封内邮寄。有些树种可以剪取花枝寄运。 4、 花粉生活力测定 为保证杂交的成功，特别是经过储藏的花粉，授粉前必须测定发芽率。测定方法主要有直接授粉法、活体检验法、培养基法和染色法。 （1） 直接测定法 把花粉直接授到同种植物的雌蕊柱头上。用套袋隔离，然后观察结实情况，如果发育正常，收到种子，即证明花粉有生活力，否则就表示花粉没有生活力。 （2） 活体检验法 把花粉直接授到同种植物的雌蕊头上，并做好隔离工作。隔1～3天采集已授过粉的柱头，用FAA固定液或在60C温水中固定15分钟以上，将固定的花柱取出，用l％的苯胺兰水溶液或0．5％的苯胺兰乳酸酚染色数小时后，把花柱撕开，放在载玻璃片上，盖上盖玻片，用大拇指轻压，放在显微镜下观察，若花粉具有生命力，即可看到染成蓝色的花粉管伸入柱头组织，若花粉不具生命力，则看不到这种情况。此法适应于多数树种，特别是对阔叶树，效果良好，此法也为直接鉴定法。 （3） 培养基法 又称花粉发芽试验法，将100ml蒸馏水装入三角瓶中，加入 0．5～1g琼脂，把三角瓶加热，使至溶解，然后加入10～15克的蔗糖或葡萄糖。因各种树木花粉发芽的最适浓度不同，可多配几种浓度的培养基进行试验。将不同浓度的培养基分别滴入凹玻片的凹槽内，放置片刻，冷却凝固后，将供检验的花粉均匀地撒在培养基上，花粉不可过多，以免影响观察，把制备的片子放入预先消过毒的垫有滤纸的培养皿中，放在20～25 C的恒温箱内，24小时后镜检花粉发芽情况。 培养基中也可不用琼脂，而成为液体培养基，但糖的浓度要适当增高，有的试验高达5 0％，糖是花粉管伸长的能源，各树种最适浓度不同，一般在10%～15％之间。 许多试验表明，在培养基中加入适量的微量元素，如棚、锰、钙等，对花粉发芽有促进作用，用硼酸作硼源加入培养基中，以刺激发芽和花粉管生长，培养基中硼浓度以100～400ppm为宜。浓度过高则可以起抑制作用甚至成为毒害。 检查花粉发芽率时，为保证测定结果的代表性，可随机在低倍显微镜下，取4个视野计算花粉总数及其平均发芽数。以松树种子为例，花粉管的长度超过或等于短轴时，即算发芽花粉。 （4）染色法 是借助于测定花粉内酶活性的强弱来测定花粉生活力，凡有生活力的花粉均具有过氧化氢酶的存在，它可使过氧化物（如双氧水H2O2）放氧分解，被解放出来的原子氧很容易使还原剂氧化。还原剂（如联苯胺等）被氧化后表现出红色或玫瑰色。在给花粉染色时，如果花粉是活的，则花粉很快被染上色，如果花粉是死的，则染不上色。 也可先把花粉置于载玻片上，滴入0．025％的甲基兰溶液一滴，盖上玻片，数分钟后在显微镜下检查，凡无生活力者染成深蓝色，有生活力者退为不同程度的浅蓝色或灰色，退色能力的强弱与生活力的强弱呈正相关，次甲基兰的浓度可任意调节，以期获得最明晰的结果。 4、 杂交技术 有性杂交是在人为控制父本的条件下进行的授粉，所以称作控制授粉。控制授粉主要包括去雄、套袋隔离、授粉、去袋等步骤。控制授粉分树上杂交和切枝杂交。 1、 树上杂交 树上杂交是在自然条件下进行的，大多数树木都适合于用这种方法，一般松树、杉木、落叶松等开花结实过程长的用材树种，都采用这种杂交方式。步骤如下： （1）去雄 对于两性花树种，杂交之前需将花中心雄蕊去掉，以免自花授粉。去雄的时期，最好是一花朵微开，花药呈绿色还未成熟的时候。最适当的去雄方法是用镊子或尖头小剪刀直接剔除花中的雄蕊，操作要小心，彻底，不损伤雌蕊，更不可刺破花药。去雄时所用的镊子、剪刀等工具都需用酒精消毒干净。 （2）套袋隔离 两性花去雄后，为避免非目的花粉的侵入，必须立即套袋隔离。若为单性花，凡从外部形态能清楚识别雌花芽者，在雌球花突破芽鳞时，就可套袋隔离。凡是雌雄异株的树种，如果附近没有同种雄株，可不套袋。 套袋材料必须能防水，避光、透气。风媒花树种，可用亚硫酸纸或牛皮纸做袋子。袋子两端开口，顶端向下卷折，用圆形针别住，以方便重复授粉，下端口衬以棉花，用线缚扎在老枝上。虫媒花可用细纱布做袋子。 （3）授粉 待雌花开放，柱头分泌粘液时，即可授粉。授粉期的长短因树种而异。授粉的方法和工具，视不同情况灵活运用。风媒花树种的授粉时间最好是在无风的早晨，授粉时只打开袋子顶端，用毛笔或授粉器授粉。授粉后应随即挂牌登记。 （4）去袋 雌球花珠鳞增厚；闭合；柱头枯萎可去套装 到采种前，要细心观察，及时防治病虫害。杂种采种前，套上纱布或尼龙袋，防止种子飞散丢失或混杂。 2、 室内切枝杂交 种子小而成熟期短的某些树种，如杨树、柳树、榆树可从树上剪下枝条，在室内水培。这样可避免上大树杂交的困难，可克服亲本双方花期和产地不一的困难，便于隔离和管理，且可免受风、霜影响。 （1） 枝条的采取和修剪 从已选好的母树树冠的中上部，剪取1一2年生无病虫害，基部直径为1.5一2 cm、长70cm以上的雌花枝条，或雄花枝条。由于雌花枝内贮藏的营养物质需长期维持开花结实，应尽量选用粗壮枝条。采回来的枝条，或从远地寄来的枝条，入室前要剪去徒长枝、病虫害枝。杨树雄花枝，应尽量保留全部花芽，以收集大量花粉；雌花枝则每枝留1一2个叶芽和3一5个花芽。多余的去掉，以免过多消耗枝条养分，影响种子发育。杨树开花需要经历低温，采条不宜过早，一般约在自然开花前1个月。早采枝条可低温沙藏。 （2） 培养 修好的枝条，插在盛清水的瓦罐等容器中，每隔3—5天换水或修剪枝条基部。生很容易的杨树种也可用土培。土培比水培省工。培养花枝期间保持适宜的温、湿度。 （3） 去雄、隔离和授粉 原则上同树上杂交。如只作一个杂交组合，雌雄花枝可放在同一室内，不套袋。杨树同一花序中基部小花先开，基部和前端花期相差可达2—3天。因此，宜多次授粉。 （4）果实发育期管理 注意防治病虫害，温度保持在20度左右，湿度保持在60％左右。枝条顶芽开放后，保留叶片2—3枚。杨树经1—2个月，果实成熟，及时套袋，防止种子飞散。 3、 杂交技术要点 （1）要熟悉杂交树种的开花结实习性，了解花器官的构造，能识别雌雄植株和雌雄花芽。 （2）了解花粉的采集、寿命和贮藏方法，熟悉花粉生活力测定方法。 （3）隔离袋的大小要适合树种的开花习性；隔离袋和授粉工具原则上只能供一个杂交组合使用。如需再次利用，一定要消毒干净。 （4）去雄要彻底，但不能损伤其他花组织；套袋要及时。 （5）树上杂交宜在无风的清晨授粉，要防止隔离袋的破损。室内杂交，视条件可隔离而不套袋；套袋授粉前，要防止空气中飘浮花粉的污染。 （6）杂交中应设对照，以检验污染、自交的程度。 （7）做好标记和登记，杂交组合要在树上或枝条上挂标签，并对各项工作做详细记录。 （8）要保护杂交果实，以免人畜病虫的危害。成熟时要及时采摘。最好在采收前套纱袋，以防止飞散和混杂。 第四节 远缘杂交 在杂交育种中，将不同的种、属或亲缘关系更远的两个亲本进行杂交，称之为远缘杂交。通过远缘杂交，可以获得品种间杂交所得不到的变异类型，由远缘杂交所产生的杂种，叫做远缘杂种。远缘杂交存在很多困难，亲缘关系较近的远缘杂交比较容易成功，而距离太远的就不易成功。由于种间或属间，它们的亲缘关系较远，在形态结构上、生理生化和遗传组成上都存在着很大差异。因此，。一般来说，种属之间不象种内的变种或品种间那样容易进行杂交。当然，也并非绝对不能杂交，只不过比种内杂交较为困难一些，表现在杂交不易成功、杂种不易成活、杂种不育等。 1、 远缘杂交的特点 1．远缘杂交的不亲和性 种内杂交一般都比较容易成功，但种属间的远缘杂交首先遇到的障碍则是受精过程很难进行。主要表现为受孕率低或杂交不能正常结实和获得种子。原因是由于亲缘关系较远，在长期的进化过程中形成了各种隔离机制，致使受精前和受精后都可能发生障碍，杂交难于获得成功。 2．远缘杂种的不育性 远缘杂交除常出现杂交的不亲和性外，还常常表现杂种不育，杂种种子不能发芽成活，或虽然能成活，但又不能开花结实，或虽然开花，但配子败育，因而不能延续后代。 3．远缘杂种后代分离的广泛性和不规则性 远缘杂交由于亲本间的亲缘关系较远，遗传上存在较大差异，因此远缘杂交后代的分离是比较复杂的，一般难以预测，其结果有可能正好与愿望相反。比如，有个俄国人，曾设想用萝卜（2n=18）与白菜(2n=18）进行杂交，想育成一种地上长白菜，地下长萝卜的一举两得的类型。他先把萝卜与白菜杂交，并将得到的Fl加倍。其结果是，地上部分长的性状象萝卜地下部分象白菜，既没有得到萝卜也没有得到白菜。在多父本混合授粉的情况下，远缘杂种后代的变异更大，分离更为广泛。远缘杂种分离的广泛性，提供了更丰富的基因重组类型，因而有更广泛的选择机会，对育种工作极为有利。但是，对于杂种后代遗传规律性的预测和控制，以及对杂种性状的稳定性等，都带来困难。 2、 远缘杂交不亲和现象及其原因 远缘杂交在大多数情况下，存在着不亲和现象。无论是地理远缘还是亲缘关系上的远缘，其亲缘关系距离越大，困难越多。 1．地理上的隔离 由于远距离或地理条件的限制，使杂交的双方无法在自然条件下进行受精。这种障碍由于交通的发达和人工气候室的建立等条件，很易克服。 2．季节上的限制 不同种的生育期，特别是花期差别很大，无法进行交配。如柳杉2月开花，杉木3月才开花，花期相差一个月左右；白榆树和榔榆分别于春秋两季开花，难以进行杂交，如果要进行这类杂交，就要采取一定措施，调节它们的花期或贮存花粉，才能得以进行。 3．传播媒介的不同 某些植物是虫媒花，而另外一些则为风媒花，还有以鸟类或水等作媒介来传播花粉的。由于媒介之不同，发生杂交的机会也较小。 4．柱头与花粉形状不同 某些植物的柱头，有其特殊的形状和构造，只有本种植物的花粉才能被接纳，而其它的花粉，由于形状和大小的不同则不能授粉或受精。即由于异种植物的柱头环境和柱头分泌物差异太大，致使花粉不能在异种植物柱头上发芽。 5．花粉不发芽，花粉管生长受阻 某些植物虽然接受了异种花粉，但由于远缘的关系，花粉在柱头上不发芽，或者发芽而花粉管生长缓慢或花粉管太短，不能到达胚珠，因而不能受精。 6．杂种不成活 受精后的合子幼胚不发育，发育不正常，或在胚胎发育期中途夭亡，因而不能结实。 7．杂种不孕 虽然得到了杂种一代，但没有繁殖后代的能力。如驴和马的杂交，可以得到骡子，但骡子没有生育能力。植物中也有很多这样的例子，有些杂交种子的幼胚、胚乳和子房组织之间缺乏协调性，虽然形成皱缩的种子，但不能发芽或发芽后死亡。 其原因大致可归纳为：一是花器发育不全或不能形成花器。雌雄配子不能形成或败育，也可能因授粉受精受阻，不能形成后代。二是染色体组之间的差异很大，造成不亲和性，染色体不能配对因而不孕。如小麦和黑麦杂交，F1如果不加倍，染色体就不发生配对，导致配子败育，因而不能结实。三是染色体虽然有的可能配对，但由于基因之间差异过大，引起代谢失调而不能结实。 这些影响远缘杂交不亲和性的若干发育上和生理上的因素，都是物种间龄差异过大的反映，近些年的研究还表明，远缘杂交的不亲和性和各物种的氧化酶活性有关。S·A·Beach等从动物的免疫化学机制中得到启示，认为植物也可能存在着一种和动物免疫化学相似的特异抑制反应，控制着远缘种属间配子的不亲和性和性障碍，并取得了初步结果。 远缘杂交不亲和性的原因是极为复杂的，它的遗传机制并未完全揭开，为了进一步搞清这些原因，必须从遗传学、胚胎学、细胞学、生理学和生物化学等方面继续深入进行研究。 3、 常见树种杂交可配性 杨属分为 5个派，在我国栽植的杨树种有： （1）白杨派：分成两组，即白杨组，包括银白杨、新疆杨、毛白杨和灰杨；山杨组，包括河北杨、山杨、响叶杨。 （2）大叶杨派：大叶杨、椅杨。 （3）青杨派：小叶杨、青杨、川杨、滇杨、香杨、苦杨、大青杨。 （4）黑杨派：欧洲黑杨、美杨（钻天杨）、箭干杨、美洲黑杨、欧美杨。 （5）胡杨派：包括胡杨、粉叶杨等。 杨属同派不同种间杂交容易，而派间杂交有难有易。 青杨派与黑杨派杂交可配性很高，配合力也好。如小叶杨×黑杨；小叶杨×钻天杨；钻天杨×小叶杨；钻天杨×青杨。 黑杨派与白杨派杂交，杂交可配性一般比黑杨与青杨间杂交可配性低，配合力也较差。以黑杨派为母本时，可配性与配合力较好，如加杨×毛白杨。用白杨派作母本时，杂交困难，即使得到种子，杂种往往也表现不良。但用白杨派杂种为母本与黑杨派种或杂种杂交，效果较好。 青杨派与白杨派间杂交可配性与一般配合力也较差。白杨×青杨困难；青杨×白杨容易。 胡杨派与其他各派杂交一般可配性较低，配合力也较差。 柳属含有500多种。属内也分成不同派。柳树亲缘远近对杂交可配性影响显著。 种内杂交可配性高，可配率平均达89％。 派内不同种间杂交，可配率为78％； 不同派间杂交，平均可配率为64％； 乔木柳间杂交可配率较高，为78％； 乔木柳和灌木柳间杂交可配率为50％ 灌木柳间杂交可配率为51％。 4、 克服杂交不可配方法 有效的方法较少。 1． 正确选择亲本和组合 正确挑选亲本对杂交的成败关系很大。选配时除考虑亲缘等因素外，有一些试例证明杂种起源的亲本容易成功。杨属中胡杨是难以杂交的种，南京林业大学用响叶杨×毛白杨的杂种与胡杨杂交，得到了杂种苗。毛白杨不易交配、结实，特别当毛白杨作母本时尤为困难。北京林业大学用毛白杨与新疆杨的杂种作母本，用毛白杨回交，或的杂种。在一些试验中还发现虽同一对亲本，但正交和反交的结果却不一样。前述白杨派与杨树其他派正反交难易不一即为一例。在果树中，梨×苹果较苹果×梨杂交成功率大。 2．免疫抑制素 有人从动物免疫化学机制得到的启示，他在禾谷类的远缘杂交研究中，试验了几种化学药剂，包括氨基已酸、氯霉素、水杨酸、龙胆酸等，在杂交前将药剂注入幼穗叶鞘中，以打破母本物种在进化过程中所形成的遗传隔离，而后授以远缘物种的花粉，取得了一定效果。 3． 采用混合花粉和蒙导花粉授粉 把少量的母本花粉加入到大量的父本花粉中，进行授粉，这种虽然有少数的母本花粉参与受精，但也可以增加父本花粉受精的机会，从而得到或增加杂交种子。例如，米丘林在作苹果和梨杂交时，常在梨的花粉中加入极少量的苹果花粉，使在苹果花粉的诱导下，促使杂交成功。混合花粉所以能产生良好的效果，这是由于不同种类花粉间的相互影响，改变了授粉的生理环境，解除母本柱头上分泌的某些阻碍异种花粉发芽的特殊物质的影响，有助于花粉发芽和远缘杂交成功。 林业成功的例子：小叶杨＊（旱柳＋钻天杨）；银白杨＊（山杨＋小叶杨） 在授粉时，把以往用高温或其它因素杀死的母本花粉，加到父本花粉中去，进行混合授粉，已被杀死的母本花粉，可以起到刺激蒙导的作用。 4． 用DNA导入法，授粉是在柱头上加上目的树种的DNA，通过花粉管导入胚囊。 5． 胚培养 对于一些远缘杂种早期败育，可利用组织培养技术，即把受精后的幼胚取下来，置于培养基中进行人工培养。这已在果木杂交中广泛应用。 第五节 杂种的培育和选择 通过杂交取得杂交种子，是杂交育种的开始，而不是结束。杂种经过培育、鉴定和选择，最后选育出优良杂交品种，才能实现杂交育种的目的。 一、 杂种的培育方法 杂种培育的原则是采取各种栽培措施以达到拥有最多杂种苗的目的，因为杂种群体越大，选择具备所需性状的杂种的可能性也越大。其次，要保证培育条件的一致性。条件一致才有可能进行客观的评定和选择。注意防止混淆。 杂种种子的加工、贮藏、播种和育苗，在原则上是和常规育苗相同。但由于杂种种子数量少，组合多、可比性要求高，工作需特别仔细。为了提高杂种种子的出苗率，可采用营养杯及温室等进行育苗。苗期应加强水肥管理，并做好苗期的选择工作。在从杂交种子培育成苗的整个过程中，都应为杂种提供良好的培育条件，以使杂种很好地生长发育，性状特性得以充分表现，并保持培养条件的一致性，为正确选择提供依据。 二、杂种选择的方法 杂种的选择，包括对杂交种子、杂种实生苗、幼树以及成熟树各个阶段的选择。林木几乎都是基因杂合型，通过杂交后基因重组，就会在后代出现多种多样的类型，从而提供了选择的可能性。 1．选择应贯穿于杂种培育的全过程，即从种子开始，历经成苗，幼树，开花结果，直到确定的优良单株形成为新品种所经历过的各个阶段，都要根据育种目标进行选择。 2．侧重综合性状，结合重点性状进行选择。林木多是异花传粉植物，本身的遗传物质比较复杂，往往在杂种Fl代就出现分离，通过在分离后代中选择那些在综合性状上表现优良的单株，才有可能成为生产上有价值的品种。但对有些杂种虽然在综合性状上不符合要求，但具有特殊有利用价值的个别优良性状的单株，可作为进一步的育种用材料，也应选留，不能轻易淘汰。 3．直接选择与间接选择相结合。杂种实生苗生长的早期与晚期在速生丰产某些性状间如存在相关，而且这些相关性状能早期鉴定，这样就能在实生苗阶段进行间接的选择。间接选择在某些很明确而易于鉴定分析的性状上，当只有一个特性需要迅速改良时，应用起来最为方便，但间接选择有比较大的局限性，因此，对杂种主要应着重于直接选择。 4．经常观察与集中鉴定相结合。杂种在生长发育过程中，不同时期有特定的性状表现，因此，必须进行经常性的观察鉴定。而在病虫或冻害发生时，以及在起苗期和定植期等，就要根据具体情况进行集中鉴定，以提高选择效率。 杂种选择方法应根据树种、育种目标、性状特性表现的规律、早期选择的可靠性以及数量多少等方面来综合考虑。林木的杂交育种，主要是在种属间进行。通过杂交，基因重新组合，性状表现极为复杂，有的分离，有的不分离，有的杂种具有两个杂交亲本综合的性状，所以通过在分离后代中的选择，可寻到具有综合性状的优良个体。而有的杂种的性状则倾向于双亲之一，甚至与原始亲本完全一致。还有的杂种产生了新的性状，而成为另一种新的物种类型，可作为育种的好材料。 如北京杨的F1中，一年生苗中，约有1／3是侏儒。中国林科院选育北京杨的工作始于1956年，2年杂交共得到种子10538粒，育成苗木506株，这些苗木在1年生时高生长就有很大差别；也行分别倾向于父本或母本。苗木在苗圃中生长2年，进行第一次选择。选择高生长在平均值以上的苗木。第一次选中213株，平均选择率为42.1％。中选苗木在2年生时于秋天平茬，第二年秋作第二次选择。共选出苗木33株，选择率为15.5％。对中选的33个植株，分别编号，作插条繁殖。由33株苗木繁殖成的混合群体称北京杨。1963年起，由从这33株苗木中，根据生长、物候、抗叶部病害等特性选出了13株，作为原种繁殖成13个无性系。 林木的育种目标是速生、丰产、优质、抗性强等。然而，这些指标在杂种苗期开展直接选择是比较困难的，因为杂种的优良性状一般不会在幼年阶段全部表现出来，要经过一段生长过程才能逐步出现。但是，对于多年生林木来说，有些性状是可以通过幼年与成年期性状间的相关，来开展对杂种苗木的间接选择。据报道，核桃苗期的某些性状和特性与成年树的某些性状具有明显的相关性。例如，在1年生核桃苗中，如出现主副芽上下重叠生长，它们之间的距离越长，早实性也越强，如1年生苗就开始正常分枝，这也是早实性表现。杨树6年生高生长和成年树木生长达到显著相关。 对能无性繁殖的树种，从杂种圃中选出的单株繁殖成无性系，作无性系测定，对综合性状表现优良的无性系，选出一定株数定植于原种圃中，同时繁殖一定数量的苗木，投入不同生态区进行区域化栽培试验。 3、 区域化栽培试验 经过培育和选择所得到的杂种，由于不了解它们在各种自然条件下生长和发育情况，适应性以及经济性状表现等，因此，不能立即推广到生产中去。一个新选出来的品种类型具有地域性，在这个地区表现很好，在另一个地区可能表现不好，所以对培育出来的杂种，必须经过有 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 地区域化栽培试验，根据试验结果确定其适应范围。 1．选择区域化栽培试验点 考虑杂种推广地区的自然地理条件，按照自然地理条件的不同，划分为几个生态区，在 每个地区内设置若干试验点，各试验点的地段和栽培管理技术在本地区要有代表性。 2．按照田间试验 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 布置试验 试验的面积、重复次数不能小于一般表型测定，选用当地农家品种作为对照。试验的方法和观察记载标准应统一，整个试验的立地条件和耕作栽培技术一致，以利于对试验结果进行统计分析。 3．制定繁殖推广技术措施 根据区域化试验结果，对表现好的良种，积极向生产中进行推广，确定新品种推广栽培地区，采取措施，扩大繁殖系数。对凡能行无性繁殖的树种，通过扦插、嫁接、组织培养等方式扩大繁殖系数，对不能进行无性繁殖的树种，通过建立种子园的方式，来获取量多品质好的杂种种子。 四、人工杂种的利用 1．有性杂交和无性繁殖相结合，充分利用杂种优势 凡是能够无性繁殖的树种，经杂交取得优良杂种后，可通过扦插、嫁接等无性繁殖方法投入生产。如杨树杂种的繁殖。 2． 利用优势组合的亲本建立杂交种子园生产杂交种子应用于生产。如日本落叶松＊欧洲落叶松已利用这种形式。 3． 利用人工控制授粉法大量制种 在劳动力充足和廉价的地方，可用人工控制授粉法大量制种。如南朝鲜的刚松×火炬松就能经济地大量制种，其原因可能是刚松母树在幼龄即开花，所以在地上或利用短梯就可进行套袋收粉，同时结实率高，能在几年内生产数十万粒杂种种子。 4． 利用杂种第一代衍生的各种种子 包括F1×F1、F1与亲本的回交等方式获得的种子。 第六节 杨树杂交育种程序 杨树杂交育种在世界范围内是所有树种中研究较多的一种。整个育种工作进程，以意大利欧美杨育种程序为例，大致按以下程序进行。 一、 育种群体及育种群体的改良 首先是汇集研究基因资源。各种杨树种或类型、单株，在进化过程中形成了丰富的基因资源，将这些材料汇集起来，简称林分，形成育种群体，提供杂交育种。作为亲本利用或直接利用。意大利欧洲黑杨与美洲黑杨育种群体的创造与改良程序是：首先广泛搜集和选择欧洲黑杨与美洲黑杨的种源和优良单株，建立标本园。从这些原始材料中，通过研究分别从欧洲黑杨与美洲黑杨中，各选出120株雌株和雄株，组称原始育种群体。分别进行种内控制授粉。通过后代测定，从中选出40株雌株与雄株，组成改良的育种群体。然后，又从中分别进行种内控制授粉，通过后代测定，进行家系和家系内选择，在各选出120株雌株和雄株，作为进一步改良的育种群体，如此反复，使育种群体遗传品质不断得到提高。 二、杂交及杂种培育 在育种群体中进行杂交，获得杂交种子，由种子育出杂种苗木，在杂种圃培育杂种。 三、苗期选择及杂种无性繁殖 在杂种圃中的杂种个体，通过对无价值的组合和个体进行淘汰后，将每一中选杂种植株无性繁殖，形成各自的无性系。在繁殖同时，按田间设计设置苗期对比试验，进行苗期选择。杂种苗在苗期选择圃年需1－2年时间，用已进行必要的性状测定。中选的无性系，加速繁殖杂种苗，进入无性系测定林。 4、 无性比较测定与选择 经过初次选择，中选的组合、家系及植株，形成无性系，进一步营建无性比较测定林，作较长期的性状测定。无性比较选择年限一般要达到1／2轮伐期。 意大利欧美杨无性系选择分三个阶段进行：（1）初选阶段：将每株杂种苗繁殖成15株扦插苗，按50×200cm栽植，同时扦插2株I－214作对照，第二年按抗病程度和生长量选出25％的无性系。（2）复选阶段：将初选的无性系按5×5m定植，仍以当地主在无性系作对照，第二年至第三年，从中选出40％的无性系。中选的无性各繁殖500株，营造无性系对比林，第5年从中挑选出20％的无性系。（3）终选阶段：对上述20％中选无性系各繁殖2000－3000株扦插苗，分别在2－4个地点营造对比试验林，到第5年终选出速生、抗病无性系，然后通过鉴定，进行国家新品种登记。 5、 品种区域化栽培试验 经过复选的无性系，可以说这一新材料是适应本地区的，称之为“原种” 。将它们繁殖到一定数量（2000－3000），选择数个不同的生态区设置试验林，以测定其适应范围，并选择其最佳生态生产力。一般需5－8年时间。然后通过鉴定，申报国家品种审定委员会，进行新品种登记。 PAGE 1 _1073331319.unknown _1073331410.unknown _1073331135.unknown