超级实用的实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1MTris-HCl(pH7.4，7.6，8.0)组份浓度1MTris-HCl配制量1L配制方法1.称量121.1gTris置于lL烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 加入浓HCl量调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约70ml7.6约60ml8.0约42ml4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。1.5MTris-HCl(pH8.8)组份浓度1.5MTris-HCl配制量1L配制方法1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓HCl调节pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。10×TEBuffer(pH7.4,7.6，8.0)组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于lL烧杯中。1MTris-HClBuffer(pH7.4，7.6，8.0)100ml500mMEDTA(pH8.0)20ml2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。3M醋酸钠(pH5.2)组份浓度3M醋酸钠配制量100ml配制方法1.称量40.8gNaOAc·3H2O置于100~200ml烧杯中，加入约40ml的去离子水搅拌溶解。2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。3.加去离子水将溶液定容至100ml。4.高温高压灭菌后，室温保存。PBSBuffer组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于lL烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。10M醋酸铵组份浓度10M醋酸铵配制量100ml配制方法1.称量77.1g醋酸铵置于100~200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.使用0.22µm滤膜过滤除菌。4.密封瓶，室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。③加入等体积的1MTris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。④重复操作步骤③。⑤加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇配制方法l. 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 ：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。10%(W/V)SDS组份浓度10%(W/V)SDS配制量100ml配制方法1.称量10g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加热溶解。2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。3.将溶液定容至100ml后，室温保存。2NNaOH组份浓度2NNaOH配制量100ml配制方法1.量取80ml去离子水置于100~200ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。2.5NHCl组份浓度2.5NHCl配制量100ml配制方法1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓HCl(11.6N)，均匀混合。2.室温保存。5MNaCl组份浓度5MNaCl配制量1L配制方法1.称量292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。2加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4℃保存。20%(W/V)Glucose(葡萄糖)组份浓度20%(W/V)Glucose配制量100ml配制方法1.称取20gGlucose置于100~200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后。搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至l00ml。3.高温高压灭菌后，4℃保存。Solutionl(质粒提取用)组份浓度25mMTris-HCl(pH8.0)，10mMEDTA，50mMGlucose配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于lL烧杯中。1MTris-HCl(pH8.0)25m0.5MEDTA(pH8.0)20m20%Glucose(1.11M)45mdH2O910m2.高温高压灭菌后，4℃保存。3.使用前每50ml的Solutionl中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。SolutionⅡ(质粒提取用)组份浓度200mMNaOH，1%(W/V)SDS配制量500ml配制方法1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中。10%SDS50ml2NNa0H50ml2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀。3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。SolutionⅢ(质粒提取用)组份浓度3MKOAc，5MEthanoicacid(乙酸)配制量500ml配制方法1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。KOAc147gEthanoicacid57.5ml2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压灭菌后，4℃保存。0.5MEDTA(pH8.0)组份浓度0.5MEDTA配制量1L配制方法1.称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。1MDTT组份浓度1MDTT配制量20ml配制方法1.称取3.09gDTT，加入到50ml料离心管内。2.加20ml的0.01MNaOAc(pH5.2)，溶解后使用022µm滤膜过滤除菌。3.适量分成小份后，-20℃保存。10mMATP组份浓度10mMATP配制量20mL配制方法1.称取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的25mMTris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20℃保存。二、蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺)组份浓度30%(W/V)Acrylamide配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于lL烧杯中。Acrylamide290gBIS(双丙烯酰胺)10g2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至lL，用0.45µm滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中4℃保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。40%(W/V)Acrylamide组份浓度40%(W/V)Acrylamide配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于lL烧杯中。Acrylamide380gBIS20g2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至lL，用0.45µm滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中4℃保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。10%(W/V)AP(过硫酸铵)组份浓度10%(W/V)AP配制量10ml配制方法1.称取1gAP。2.加入10ml的去离子水后搅拌溶解。3.贮存于4℃。注意：10%过硫酸铵溶液在4℃保存时可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。5×Tris-GlyclneBuffer(SDS-PAGE电泳缓冲液)组份浓度0.125MTris，1.25MGlyclne(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于lL烧杯中。Tris15.1gGlyclne94gSDS5.0g2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。2×SDS-PAGELoadingBuffer组份浓度100mMTris-HCl(pH6.8)100mMβ-巯基乙醇(2-ME)4%(W/V)SDS0.2%(W/V)溴酚兰(BPB)20%(V/V)甘油配制量5ml配制方法1.量取下列试剂，置于10ml塑料离心管中。0.25MTris-HCl(pH6.8)0.25mlβ-巯基乙醇0.5mlSDS0.2g甘油1ml1%溴酚兰0.1ml，2.加去离子水溶解后定容至5ml。3.小份(500µl/份)分装后，于室温保存。4.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右5×SDS-PAGELoadingBuffer250mMTris-HCl(pH6.8)10%(W/V)SDS0.5%(W/V)BPB50%(V/V)甘油5%(W/V)2-ME组份浓度配制量5ml配制方法1.量取下列试剂，置于10ml塑料离心管中。1MTris-HCl(pH6.8)1.25mlSDS0.5gBPB25mg甘油2.5ml2.加去离子水溶解后定容至5ml。3.小份(500µl/份)分装后，于室温保存。4.使用前将25µl的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。考马斯亮蓝R-250染色液组份浓度0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250，25%(V/V)异丙醇，10%(V/V)冰醋酸配制量1L配制方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。2.量取250ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。3.加入100ml的冰醋酸，搅拌均匀。4.加入650ml的去离子水，搅拌均匀。5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度10%(V/V)Ethanoicacid，30%(V/V)乙醇配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于lL烧杯中。Ethanoicacid100ml乙醇300mldH2O600ml2.充分混合后使用。凝胶固定液(SDS-PAGE银氨染色用)组份浓度50%(V/V)甲醇，10%(V/V)Ethanoicacid配制量100ml配制方法1.量取下列试剂，加入100~200ml的试剂瓶中。甲醇500mlEthanoicacid100mldH2O400ml2.均匀混合后室温保存。凝胶处理液(SDS-PAGE银氨染色用)组份浓度50%(V/V)甲醇，10%(V/V)戊二醛配制量100ml配制方法1.量取下列试剂，加入100~200ml的试剂瓶中。甲醇50ml戊二醛10mldH2O40ml2.均匀混合后室温保存。显影液(SDS-PAGE银氨染色用)组份浓度0.005%(W/V)柠檬酸，0.02%(V/V)甲醛配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于lL试剂瓶中。柠檬酸50mg甲醛0.2ml2.加入1L去离子水后，摇动混合溶解。3.室温保存。