最新玉米淀粉检测作业指导书

玉米淀粉检测作业指导书精品好资料-如有侵权请联系网站删除精品好资料-如有侵权请联系网站删除精品好资料-如有侵权请联系网站删除精品好资料-如有侵权请联系网站删除精品好资料-如有侵权请联系网站删除精品好资料-如有侵权请联系网站删除天津市鸿禄食品有限公司玉米淀粉检测作业指导书目录第一章玉米淀粉水分的测定第二章玉米淀粉酸度的测定第三章玉米淀粉灰分的测定第四章玉米淀粉斑点的测定第五章玉米淀粉细度的测定第六章玉米淀粉脂肪的测定第七章玉米淀粉蛋白质的测定第八章玉米淀粉白度的测定第九章玉米淀粉大肠菌群的检测第十章玉米淀粉菌落总数的测定第一章玉米淀粉水分的测定执行标准：GB/T12087一2008代替GB/T12087-1989淀粉水分的测定烘箱法1.范围本标准规定了在常压条件下，采用烘箱在130℃烘干淀粉测定水分的方法。本标准适用于干燥的天然淀粉和变性淀粉的水分测定。本标准不适用于某些特殊淀粉的水分测定，如含有在130℃时不稳定物质的淀粉。2.原理将试样放在温度为130℃-133℃的恒温烘箱内,于常压下烘干90min，测定试样损失的质量。3.仪器实验室常用仪器和下列仪器。3.1分析天平:感量0.001g。3.2烘盒:用在测试条件下不受淀粉影响的金属(例如铝)制作，并有大小合适的盒盖。其有效表面能使试样均匀分布时质量不超过0.3g/cm2。适宜尺寸为直径55mm-65mm，高度15mm-30mm，壁厚约0.5mm。3.3恒温烘箱:配有适当的空气循环装置的电加热器，能够使得测试样品周围的空气温度均匀保持在130℃-133℃范围内。烘箱的热功率应能保证在烘箱温度调到131℃时，放入最大数量的试样后，在30min内烘箱温度回升到131℃，从而保证所有的样品同时干燥。3.4干燥器:内置有效的干燥剂和一个使烘盒快速冷却的多孔厚隔板。4.试验样品测试样品应没有任何结块、硬块，并应充分混匀后使用。样品应放在防潮、密闭的容器内，测试样品取出后，应将剩余样品储存在相同的容器中，以备下次测试时再用。5分析步骤5.1烘盒恒质取干净的空烘盒，放在130℃烘箱内烘30min-60min，取出烘盒置于干燥器内冷却至室温，取出称量;再烘30min，重复进行冷却、称量至前后两次质量差不超过0.005g，即为恒质(m0)。5.2样品及烘盒称量精确称取5g士0.25g充分混匀的试样，倒入恒质后的烘盒内，使试样均匀分布在盒底表面上，盖上盒盖，立即称量烘盒和试样的总质量（m1）。在整个过程中，应尽可能减少烘盒在空气中的暴露时间。5.3测定称量结束后，将盒盖打开斜靠在烘盒旁，迅速将盛有试样的烘盒和盒盖放入已预热到130℃的恒温烘箱内，当烘箱温度恢复到130℃时开始计时，样品在130℃-133℃的条件下烘90min，然后取出，并迅速盖上盒盖，放入干燥器中，在干燥器中，烘盒不可叠放。烘盒在干燥器中冷却30min-45min至室温，然后将烘盒从干燥器内取出，在2min内精确称量出样品和带盖烘盒的总质量(m2)。对同一样品应进行两次平行测定。6.结果计算按式计算:X=(m1-m2)100/(m1-m0）式中:X—试样水分含量，%;mO—恒质后的空烘盒和盖的总质量，单位为克(g)；ml—干燥前带有样品的烘盒和盖的总质量，单位为克(g)；m2—干燥后带有样品的烘盒和盖的总质量，单位为克(g)；如果两次平行测定结果的绝对差值没有超过8.1中给定的重复性的限度，则取两次测定结果的算术平均值为最终测定结果。第二章玉米淀粉酸度的测定执行标准：GB/T5009.53-2003淀粉类制品卫生标准的分析方法1淀粉酸度定义：淀粉酸度以10.0g试样消耗氧氧化钠溶液(0.1000mol/L)的体积(mL)表示。2试剂2.1 氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.1000mol/L]。2.2 酚酞指示液：称取0.50g酚酞溶解在乙醇(95%)中并定容至50.Oml。3分析步骤称取5.0g经研磨均匀的试样，置于250mL锥形瓶中。加30.0mL～40.0mL水，摇匀，使成糊状，加5滴酚酞指示液，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至初现粉红色，0.5min不褪色即为终点。4结果计算X=V×2×c/0.1000 式中：       X—一试祥酸度0T；   y——试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)；   c——氢氧化钠标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；   0.1000--氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)==O.1000mol/L]的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)。   计算结果保留三位有效数字。5精密度  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第三章玉米淀粉灰分的测定执行标准：GBT22427.1-2008淀粉灰分测定1.玉米淀粉灰分的测定根据本标准规定的方法，将样品进行灰化后得到的残留物。2.原理将样品在900℃高温下灰化，直到灰化样品的碳完全消失，得到样品的残留物。3.仪器3.1坩埚:由铂或在该测定条件下不受影响的材料制成，平底，容量为40mL，最小可用表面积为15cm2。3.2干燥器:内有有效充足的干燥剂和一个厚的多孔板。3.3灰化炉:有控制和调节温度的装置，可提供900℃±25℃的灰化温度。3.4分析天平:感量0.0001g。3.5电热板或本生灯。4.操作过程4.1坩埚预处理不管是新的或是使用过的坩埚，必须先用沸腾的稀盐酸洗涤，再用大量自来水洗涤，最后用蒸馏水冲洗。将洗净的坩埚置于灰化炉内，在900℃±25℃下灼烧30min，并在干燥器内冷却至室温，称重，精确至0.0001g。4.2称样根据对样品灰分含量的估计，迅速称取样品2g～10g，精确至0.0001g，将样品均匀分布在坩埚内，不要压紧。注:马铃薯淀粉、小麦淀粉以及大米淀粉至少称5g，而玉米淀粉和木薯淀粉需要称10g。4.3炭化将钳祸置于灰化炉口、电热板或者本生灯上，半盖坩埚盖，小心加热使样品在通气情况下完全炭化，直至无烟产生。燃烧会产生挥发性物质，耍避免自燃，自燃会使样品从坩埚中溅出而导致损失。4.4灰化炭化结束后，即刻将柑祸放人灰化炉内，将温度升高至900℃±25℃，保持此温度直至剩余的碳全部消失为止，一般1h可灰化完毕。打开炉门，将坩埚移至炉口冷却至200℃左右，然后将坩埚放入干燥器中使之冷却至室温，准确称重，精确至0.0001g。每次放入干燥器的坩埚不得超过四个。4.5测定次数应进行平行实验。5.结果计算5.1计算方法若灰分含量以样品残留物的质量占样品质量的百分比表示，计算公式见式(1)。X=m1/m0×100………………………（1）若灰分含量以样品残留物的质量占样品干基质量的百分比表示，计算公式见式(2)。X=m1×100×100/m0/（100-H）…………………（2）式中:X一一样品的灰分含量，%；m1一一灰化后残留物的质量，单位为克(g)；m0——样品质量，单位为克(g)；H一一样品按GB/T22427.2的规定方法测定的水分含量，%。取平行实验的算术平均值为结果。得到的结果之差应符合7.2对重复性的要求。实验结果保留两位小数。5.2重复性在灰分含量(质量分数)不大于1%时，平行实验结果的绝对差值不应超过0.02%;在灰分含量(质量分数)大于1%时，绝对差值则不应超过算术平均值的2%。若重复性超出上述两种限值，应再重新做两次测定。6.实验报告实验报告应列出:——实验方法;——实验得到的结果;——进行重复性实验得到的两种实验结果。还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节。实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息。第四章玉米淀粉斑点的测定执行GB/T22427.4-2008淀粉斑点检验方法1.范围本标准规定了肉眼观察测定淀粉斑点的方法。本标准适用于干燥的粉末状淀粉和变性淀粉。2.术语和定义下列术语和定义适用于本标准。斑点spot在规定条件下，用肉眼观察到的杂色点。3.原理通过肉眼观察样品，读出斑点的数量。4仪器4.1透明板:刻有10个方形格(1cm×1cm)的无色透明板口清洁，无污染。4.2平板:白色，清洁，无污染，可均匀分布样品。5操作过程5.1样品预处理样品应充分混匀。5.2称样称取样品10g，均匀分布在平板上。5.3计数将透明板盖到已均匀分布的样品上，并轻轻压平。在较好的光线下，眼与透明板的距离保持30cm，用肉眼观察样品中的斑点，并进行计数，记下10个空格内样品的斑点总数量。注:分析人员的裸眼视力或矫正视力应在1.0以上。5.4测定次数应进行平行实验。6.结果计算6.1计算方法结果以每平方厘米的斑点的数量表示，见式(1)。X=C/10……………………………（1）式中:X——样品的斑点，单位为个每平方厘米(个/cm2)；C——l0个空格内斑点的总数，单位为个。取平行实验的算术平均值为结果，结果保留一位有效数字。6.2重复性平行实验结果的绝对差值，不应超过1.0。若超出上述限值，应重新测定。7.实验报告实验报告应列出:———实验方法;一——实验得到的结果;———进行重复性实验而得到的两种实验结果。还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节。实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息。第五章玉米淀粉细度的测定执行GB/T22427.5-2008淀粉细度测定1.范围本标准规定了筛分法测定淀粉细度的方法。本标准适用于干燥的粉末状淀粉和变性淀粉。2.术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1细度fineness用分样筛筛分样品，通过分样筛得到的筛下物质量与样品总质量的比值。3.原理用分样筛进行筛分，通过分样筛得到样品质量的过程。4.仪器4.1天平:感量0.1g。4.2分样筛:金属丝编织筛网，根据产品要求选用规定的孔径。4.3检验筛:金属丝编织筛网，根据产品要求选用规定的孔径。振动频率:1420次/min;振幅:2mm～5mm。4.4橡皮球:直径5mm。5.操作过程5.1人工筛分法5.1.1样品预处理样品应充分混匀。5.1.2称样称取样品50g，精确至0.1g。5.1.3筛分均匀摇动分样筛，直至筛分不下为止。称量筛下物，精确至0.1g。5.2标准检验筛筛分法(仲裁法)5.2.1样品预处理样品应充分混匀。5.2.2称样称取样品50g，精确至0.1g。5.2.3筛分将样品均匀地倒入检验筛中，放入橡皮球5个，固定筛体，振摇10min后，称量筛下物，精确至0.1g。5.3测定次数应进行平行实验。6结果计算6.1计算方法细度以筛下物占样品总质量的百分比表示，计算公式见式(1)X=m1/m0×100………………………………（1）式中:X——样品细度，%；M——样品过筛的筛下物质量，单位为克(g)；m0——样品总质量，单位为克(g)。取平行实验的算术平均值为结果，结果保留一位小数。6.2重复性平行实验结果的绝对差值，不应超过质量分数的0.5%。若超出上述限值，应再重新测定。7实验报告实验报告应列出:——实验方法;——实验得到的结果;——进行重复性实验而得到的两种实验结果。还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节。实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息。第六章玉米淀粉脂肪的测定执行：GB/T12309—1990工业玉米淀粉1.原理用乙醚将样品中的脂肪抽提出来，干燥后，得到徉品的总脂肪剩余物质量占原样品质量的百分率。2.仪器a.索氏提取器(Soxhlet);b.电水浴锅;c.烘箱。3.试剂与材料a.无水乙醚;b.滤纸筒及脱脂滤纸。4.试验程序精确称取绝十样品5g(精确至0.0001g)，用经过干燥的脱脂滤纸将样品包好，置于滤纸筒中，放入索氏提取器抽提筒内，将抽提筒与经过干燥的已知质量的抽提瓶连好，将乙醚倒入抽提筒内至虹吸管高度上边，使乙醚虹吸下去。两次后，再倒入乙醚至虹吸管高度2/3处，装上冷凝管，在65℃蒸馏水的水浴上回流抽提4h。取出滤纸筒，回收乙醚，至抽提瓶中残留液为1～2mL时，取下抽提瓶，在水浴上驱除残余的乙醚，洗净瓶外部，置于105℃烘箱中，烘至恒重(前后两次称量之差不得超过0.2mg，取较小称量结果)。5.计算X7=（m1-m2）×100/m0式中:X7——样品的脂肪，%；m1——抽提瓶和残留物的质量g；m2一—抽提瓶的质量，g；m0一一绝干样品的质量，g。6.允许差同一样品两次测定值之差应小于0.5%，最终结果保留二位小数。第七章玉米淀粉蛋白质的测定执行标准：GB/T12309—1990工业玉米淀粉微量定氮法1.仪器设备微量定氮装置如图B1所示。2.蒸馏将消化好并冷却至室温的样品溶液全部转移到100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。向100mL接收瓶内加入20mL2%硼酸溶液和一滴混合指示液。将接收瓶置于冷凝管下口，使下口浸入硼酸溶液中。再取10mL定容后的样品液，沿小玻璃杯移入反应室，并用少量水冲洗小玻璃杯。塞紧棒状玻璃塞，向小玻璃杯(5)中加入40mL400。氢氧化钠溶液。提起玻璃塞，使氢氧化钠溶液缓慢流入反应室(6)，立即塞紧玻璃塞，并在小玻璃杯中加水，使之密封。通入蒸气蒸馏5min，降低接收瓶的位置，使冷凝管管口离开液面，继续蒸馏1min，用少量水冲洗冷凝管管口，洗液并入接收瓶中，取下接收瓶。3.滴定用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定收集液至刚刚出现紫红色为终点。同时做空白试验。4.计算X=(V1-V0)×0.014×C×6.25×100/(m×0.1)式中:X——食品中蛋白质含量，%；V1一一样品试验消耗盐酸标准溶液的体积，mL；V0——空白试验消耗盐酸标准溶液的体积，mL；C一一盐酸标准溶液的浓度，mol/L；0.014——1mLlmol/L盐酸溶液相当于氮的质量，g;m——样品质量，g;6.25——氮换算为蛋白质的系数。5.允许差同一样品两次滴定，消耗盐酸标准溶液体积之差应小于0.1mL，计算结果保留二位小数。第八章玉米淀粉白度的测定执行标准：GB/T22427.6-2008淀粉白度测定1.范围本标准规定了用光反射式白度仪测定淀粉白度的方法。本标准适用于干燥的粉末状淀粉和变性淀粉。2.术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1白度whiteness在规定条件下，样品表面蓝光反射率与标准白板表面光反射率的比值。3.原理通过样品对蓝光的反射率与标准白板对蓝光的反射率进行对比，得到样品的白度。4.仪器4.1白度仪:波长可调至457nm，有合适的样品盒及标准白板，读数须精确至0.1。4.2压样器。5操作过程5.1样品预处理样品应充分混匀。5.2样品白板的制作按白度仪所提供的样品盒装样，并根据白度仪所规定的方法制作样品白板。5.3白度仪操作按所规定的操作方法进行，用标有白度的优级纯氧化镁制成的标准白板进行校正。5.4测定用白度仪对样品白板进行测定，读取白度值。5.5测定次数应进行平行实验。6结果表示6.1表示方法白度以白度仪测得的样品白度值表示。取平行实验的算术平均值为结果，保留一位小数。6.2重复性平行实验结果的绝对差值，不应超过0.2。若超出上述限值，应重新测定。7.实验报告实验报告应列出：———实验方法；———实验得到的结果；———进行重复性实验而得到的两种实验结果。还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节。实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息。第九章玉米淀粉大肠菌群的检测执行标准：GB4789.3—2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱（36℃±1℃）、冰箱（2℃～5℃）、恒温水浴箱（46±1℃）、天平（感量0.1g）、均质器、振荡器、无菌吸管[1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头]、无菌锥形瓶（容量500mL）、无菌培养皿（直径90mm）、pH计或pH比色管或精密pH试纸、菌落计数器2培养基和试剂2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：见附录A中A.1。2.2煌绿乳糖胆盐（BrilliantGreenLactoseBile，BGLB）肉汤：见附录A中A.2。2.3结晶紫中性红胆盐琼脂（VioletRedBileAgar，VRBA）：见附录A中A.3。2.4磷酸盐缓冲液：见附录A中A.4。2.5无菌生理盐水：见附录A中A.5。2.6无菌1mol/LNaOH：见附录A中A.6。2.7无菌1mol/LHCl：见附录A中A.7。第一法大肠菌群MPN计数法3检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。图1大肠菌群MPN计数法检验程序6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。6.1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。6.1.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.1.5根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。6.2初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。6.3复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。6.4大肠菌群最可能数（MPN）的报告按6.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。第二法大肠菌群平板计数法7检验程序大肠菌群平板计数法的检验程序见图2。8操作步骤8.1样品的稀释按6.1进行。8.2平板计数图2大肠菌群平板计数法检验程序8.2.1选取2个～3个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL。同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。8.2.2及时将15mL～20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL～4mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±1℃培养18h～24h。8.3平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。8.4证实试验从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h～48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。8.5大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。附录A（ 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 性附录）培养基和试剂A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤A.1.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g月桂基硫酸钠0.1g蒸馏水1000mLpH6.8±0.2A.1.2制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。A.2煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤A.2.1成分蛋白胨10.0g乳糖10.0g牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200mL0.1%煌绿水溶液13.3mL蒸馏水800mLpH7.2±0.1A.2.2制法将蛋白胨、乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL（将20.0g脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3mL，用蒸馏水补足到1000mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。A.3结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）A.3.1成分蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化钠5.0g胆盐或3号胆盐1.5g中性红0.03g结晶紫0.002g琼脂15g～18g蒸馏水1000mLpH7.4±0.1A.3.2制法将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH。煮沸2min，将培养基冷却至45℃～50℃倾注平板。使用前临时制备，不得超过3h。A.4磷酸盐缓冲液A.4.1成分磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mLpH7.2A.4.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。A.5无菌生理盐水A.5.1成分氯化钠8.5g蒸馏水1000mLA.5.2制法称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。A.61mol/LNaOHA.6.1成分NaOH40.0g蒸馏水1000mLA.6.2制法称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。A.71mol/LHClA.7.1成分HCl90mL蒸馏水1000mLA.7.2制法移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL，121℃高压灭菌15min。附录B（规范性附录）大肠菌群最可能数（MPN）检索表B.1大肠菌群最可能数（MPN）检索表每g（mL）检样中大肠菌群最可能数（MPN）的检索见表B.1。表B.1大肠菌群最可能数（MPN）检索表第十章玉米淀粉菌落总数的测定执行标准：GB4789.2—2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱（36℃±1℃，30℃±1℃）、冰箱（2℃～5℃）、恒温水浴箱（46±1℃）、天平（感量为0.1g）、均质器、振荡器、无菌吸管[1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头]、无菌锥形瓶（容量250mL、500mL）、无菌培养皿（直径90mm）、pH计或pH比色管或精密pH试纸、放大镜或/和菌落计数器2培养基和试剂2.1平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。2.2磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。2.3无菌生理盐水：见附录A中A.3。3检验程序菌落总数的检验程序见图1。图1菌落总数的检验程序4操作步骤4.1样品的稀释4.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。4.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。4.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。4.1.4按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。4.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。4.1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46±1℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。4.2培养4.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃℃培养48h±2h。水产品30±1℃℃培养72h±3h。4.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。4.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。4.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。4.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。4.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。5结果与报告5.1菌落总数的计算方法5.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：式中：N——样品中菌落数；∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。5.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。5.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。5.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.2菌落总数的报告5.2.1菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。5.2.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。5.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。5.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。5.2.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。附录A（规范性附录）培养基和试剂A.1平板计数琼脂（platecountagar，PCA）培养基A.1.1成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mLpH7.0±0.2A.1.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。A.2磷酸盐缓冲液A.2.1成分磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mLpH7.2A.2.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。A.2磷酸盐缓冲液A.2.1成分磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mLpH7.2A.2.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。A.3无菌生理盐水A.3.1成分氯化钠8.5g蒸馏水1000mLA.3.2制法称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。