槐米中芦丁的提取结晶与含量测定

槐米中芦丁的提取结晶与含量测定 槐米中芦丁的提取结晶与含量测定 1412陕西中医2011年第32卷第1O期 槐米中芦丁的提取结晶与含量测定 李慧王明明延安大学附属医院药剂科(延安716000) 摘要目的:探讨制备高纯度的芦丁方法.方法:采用酸提碱沉法从槐米中提取芦丁,并经过精 制分离得芦丁对照品,用化学法,薄层层析法,核磁共振法进行鉴定,高效液相色谱法测定 其含量.结果:经以上三种方法鉴定表明芦丁样品与标准品基本一致,高液相测得含量 98.O6%.结论:此种实验室制备芦丁对照品的方法操作简单易行,产品纯度较高可作为 对照品代替标准品用. 主 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 词中药/标准槐花/ 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 槐花/化学质量标准 【中图分类号】R282.5【文献标识码】A【文章编号11000—7369(2011)10—1412—02 芦丁,亦称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发 现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐米和荞麦叶 中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料.芦丁属于 黄酮类化合物,在心脑血管疾病的治疗上起到了举足 轻重的作用,具有VP样作用.有助于保持毛细血管 正常弹性,同时还有抗炎,抗病毒,抗氧化等作用.其 临床效果肯定,副作用少,同时也是一种植物原料 药[.本实验拟探究一种实验室制各高纯度芦丁的方 法,用作对照品或满足其他特殊需要的试剂. 1材料与仪器1.1试剂芦丁标准品(中 国药品生物制品鉴定所),甲醇为色谱醇,其它试剂均 为分析纯,水为重蒸水.芦丁购于延大医附院药房经 鉴定无误. 1.2仪器日本岛津高效液相色谱仪 (LC10ATvp溶剂输送泵,SPD10Avp紫外可见检测 器,CTOIOAsp柱温箱),HW2000色谱工作站(南京 千谱软件公司).电子分析天平(型号BS124S), JB202一电热恒温干燥箱(上海金忠科学仪器有限公司 制造),DL一360超声波清洗皿(浙江象山县石浦海天电 子仪器厂),TGL-16台式高速离心机(上海冠戈实业有 限公司制造),紫外分光光度计(2401PC-日本岛津). 2实验方法与结果 2.1芦丁的提取精制采用酸提碱沉法_2:称取 槐米粉,置500mL烧杯中,加沸水,硼砂搅拌,于石棉 网上加热至微沸,然后加入适量饱和石灰水溶液,保持 pH8~9之间,并不断地搅拌,微沸30min后,过滤,滤 液收集.以同法再次收集滤液并合并,待滤液温度降 至6O,70?之间时用浓盐酸调pH4,5之间,当温度 降至室温时放入冰箱静置12h,使沉淀完全,抽滤,沉 淀,用蒸馏水洗至中性,干燥得粗品芦丁,蒸馏水重结 晶,得精制芦丁. 2.2芦丁的纯化用葡聚糖凝胶柱进一步分离 纯化,称取精制芦丁0.25g,用少量甲醇使之溶解,加 入葡聚糖凝胶柱顶,用甲醇洗脱,试管收集,15mL/ 管,共收集22管,用聚酰胺膜鉴定芦丁并作如下合并 收集液.第1瓶1,10管,第2瓶11,22管;然后水 浴浓缩至原液的一半,冷置,仅第一瓶出现黄绿色微细 针状结晶,再继续浓缩,6O?干燥即得芦丁纯品. 2.3芦丁的鉴定 2.3.1化学法鉴定本品为黄色结晶粉末,熔程 为188,190?(梯勒熔点管法),盐酸镁粉反应呈阳 性;氨性氯化锶反应呈阳性显示有邻二酚羟基;锆盐枸 橼酸反应呈阳性显示有3及5一羟基存在.水解液用薄 层层析鉴定,显示有葡萄糖及鼠李糖存在. 2.3.2薄层层析鉴定用3cm×5cm的聚酰胺 膜,选3种展开剂:分别为A,丙酮:水(3:1);B,氯 仿:甲醇(5:4);C,醋酸乙酯:甲酸:水(8:1:1). 氨熏后喷显色剂3的三氯化铝显色,经重结晶的芦 丁样品在上述3种展开剂中均只显一个斑点. 2.3.3氢核磁共振法鉴定芦丁样品与芦丁标 准品图一致. 2.4芦丁含量测定(HPLC法)[33 2.4.1色谱条件流动相为甲醇4.3乙酸(55 :45),应用前经混合纤维素酯微孔滤膜过滤,超声脱 气,流速为1.0mL/min,进样量为20l,检测波长为 254nm,芦丁的出峰时间为3,4min,该色谱条件下 对照品及样品的色谱一致. 2.4.2最大波长的选择配置芦丁标准品溶液 浓度为0.002.04mg/mL在紫外分光光度计中扫描, 结果显示最大吸收波长有214,254,360nm,由于在 214nm处干扰因素多,因此高效液相选择在254nm 处测定. 2.4.3供试品溶液的配制精密称取经变色硅 胶干燥的芦丁标准品0.0l005g,芦丁样品1号(为经 陕西中医2011年第32卷第1o期 过葡聚糖凝胶柱分离的)0.01005g,芦丁样品2号 (未经葡聚糖凝胶柱分离的)0.01002g,分别置于5O mL容量瓶内,用甲醇定容,在超声清洗皿中超声3 min,使之全部溶解,然后在分别倒少量入EP管中离 心10rain,12000r/rain.得芦丁标准品溶液浓度为0. 201mg/mL,芦样1号浓度为0.2001mg/mL,芦样2 号浓度为0.2004mg/mL. 2.4.4标准曲线的制备芦丁标准品溶液的浓 度为0.2001mg/mL,将其稀释成1,1/2,1/4,1/16,1/ 64,1/256系列浓度,编号为1,2,3,4,5,6,吸取2Ol 进样,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲 线如下,进行线性回归处理,求出回归方程:Y一4Eq- 07X一2660.2,r一0.9996,浓度单位是mg/mL,峰面 积的范围在228710.5V?s,2494036.5V?s 内l_4].结果表明芦丁的浓度在0.00628125,0.201 mg/mL范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系. 2.4.5样品的含量测定将配制好的芦丁样品 1号,2号进样,测得峰面积,然后代人标准曲线得浓 度.测得样品的含量为98.O5. 2.4.6加样回收实验分别取3份已知浓度的 样品1号溶液0.8mL放入EP管中,在分别加标准品 溶液0.1,0.2,0.3mL,甲醇0.2,0.1,0mL,定于1.1 mL,离心10min,12000r/min,结果见附表. 附表回收率测定结果 2.4.7芦丁样品精密度实验精密量取芦丁样 品1号溶液1mL放入EP管中,离心10min,12000 r/min.供试品5次测量结果RSD为0.33,小于2. ooA,说明本试验的精密度较好. 2.4.8芦丁样品重现性实验精密量取芦丁样 品1号溶液O.8mL于EP管中,在加O.2mL甲醇,分 别做5份,离心10min,12000r/min.RSD0.44,小 于2.0%,说明本实验的重现性较好. 3讨论用酸提碱沉法提取芦丁具有工艺简 单,效率高和较经济等优点,采用高效液相法测定芦丁 的含量,该法使用的试剂常见,方法精确,灵敏,线性范 围宽,稳定性和重现性均能满足要求_5].测得芦丁的含 量为98.O5%,可以代替对照品测定物质的含量和满 足其它特殊需要的试剂. 在芦丁的提取工艺中,由于用的是酸提碱沉法,所 以加入的石灰水的量和浓盐酸的量是本试验的关键, 当pH为1O时,产品质量为1.5g,当pH为9时,产品 质量为2.3g,当pH为8时,产品质量为1.97g,当 pH为7时,产品质量为1.1Og. 葡聚糖凝胶对分离黄酮类化合物效果很好,此方 法即简便,又适合实验室操作.实验产品纯度高,含量 达98.O5%,可代替芦丁标准品测定芦丁制剂中的芦 丁含量. 实验中笔者发现芦丁极易被氧化变色,要注意避 光干燥保存.选择沸水溶液提取以破坏酶,而且在槐 米中果胶和粘液质较多.提取液通常因含有大量粘稠 的杂质而难以过滤,所以本文直接用水加石灰乳提取 芦丁,方法更加有效,但应注意加硼砂以保护临二酚羟 基,而且整个过程对酸度控制要求较高. 柱温对含量测定的影响较小,随着柱温的增加,保 留时问有所缩短,峰的扩散有所改善,但对含量测定影 响较小. 参考文献 ,叶建阳,刘鸿云,等.从苦荞麦中提取芦丁的 [1]杨德全 研究EJ].延安大学(自然科学版),1997,16(4):67. [2]宋延生.天然防晒剂一芦丁rJ].13用化学工业杂志, 1991,5:47. [3]刘林艏,孙曾培.苦荞麦疗效粉中芦丁的含量测定 EJ].药物分析杂志,1991,11(1):49. [4]胥秀英.高效液相色谱法测定大枣中芦丁的含量 EJ].食品科学,2004,25(4)147—149. [5]何铭清.中草药有效成分理化与药理特性EM].长 沙:湖南科学技术出版社,1979:2o31. (收稿2011-05—13;修回2011-07—15) 欢迎投稿欢迎订阅