(完整word版)免疫荧光染色实验步骤(完整word版)免疫荧光染色实验步骤(完整word版)免疫荧光染色实验步骤HYPERLINK”http://www。bio1000.com/zt/experiment/immune/"\t"_blank"免疫荧光染色的主要原理是利用HYPERLINK”http：//www。bio1000.com/zt/disease/kangyuan。html”\t"_blank"抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，HYPERLINK”http：//www.bio1000。com/zt/product/358198。html”\t"_blank”荧光显微镜下即可观察到荧光，下文主要列举了三种细胞HYPERLINK”http://www.bio1000.com/zt/experiment/immune/"\t”_blank”免疫荧光染色的实验步骤。zo-1的免疫荧光，步骤如下：1、细胞在盖片上生长融合到95%—100%时，从孵箱中取出。2、用预温的1×HYPERLINK”http://www。bio1000。com/zt/product/pbs。html”\t"_blank"PBS洗3次,每次10分钟3、4％的甲醛室温固定20—30分钟4、1×PBS洗3次，每次10分钟5、0。2%TritonX-100透化2—5分钟6、1×PBS洗3次，每次10分钟7、5%HYPERLINK”http://www。bio1000.com/zt/experiment/bsa。html"\t"_blank"BSA室温封闭30分钟8、加一抗(用1％BSA稀释）放在湿盒里,4度过夜9、1×PBS洗3次，每次10分钟10、加二抗(用1%BSA稀释)30分钟，闭光！!！11、1×PBS洗3次,每次10分钟12、95％甘油封片注：4%甲醛，0.2％Triton，5％BSA均用1×PBS稀释从大鼠分离的T细胞能否直接做细胞免疫荧光细胞爬片的免疫荧光步骤基本一致：1.取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的HYPERLINK"http://www。bio1000.com/zt/cell/426267。html"\t”_blank"细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意：有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心，注意反正面,放在皿里洗比较方便，避免了来回夹取,另外洗的时候加PBS不要太冲，不要细胞冲下来.洗的时候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，没有等5分钟或10分钟。2。4%冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3。0。2%TritonX-100通透10分钟,PBS洗三遍。4.与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。5。一抗4度湿盒内过夜,也可37度2小时,感觉前者效果好，PBS洗三遍。6。二抗室温2小时（避光)，或者37度1半小时,PBS洗三遍。7。最好用DAPI染核，然后直接照荧光片.8.蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周,因为甘油不象树脂那样会干，所以不用指甲油封的话会弄的一塌糊涂。建议：1.还是染完之后没有封片前直接照一些，因为有的时候可能封片会出现问题，再想照反而没有了，另外不要拖太长时间，荧光会崔灭的。2。荧光的片子一定要避光保存，保存的好的话，过一段时间仍然能照出很好的片子。3。二抗用之前一定离心，不然有的时候有那种沉淀，在片子上就是一个很大的非特异性荧光光点，非常难看.细胞免疫荧光简单实验步骤如下:1.漂洗血清蛋白H7.2—7.437度PBS2小时.2。—20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥10分钟3。PBS洗净:3min＊34.1%Triton:25min-30min。配成50ultriton+5mlpBS5.PBS洗净：2*5min6。羊血清封闭：37度，20分钟7。一抗，4度过夜,一般要大于18小时或者37度 1—2小时8.4度 PBS洗净,3min＊5次9.二抗 37度小于一小时10。37度 PBS洗净，3*5min凉干封片(封闭液PH8.5)不管采用何种
方法
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，在使用PBS缓冲液漂洗时,都要漂洗干净并且要测下pH值，可以使用PBS多清洗几次,也可以延长PBS清洗时间，如果结果背景较高可以延长漂洗的次数和时间。
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