蔷薇科植物果核油性提取物体外抗真菌细菌作用

* 基金项目: 浙江省教育厅科研项目( 20031346) ,浙江省卫生厅科研 项目( 2004A074) � 作者单位: 1� 杭州师范学院基础医学部,杭州 310018; 2� 浙江大 学医学院病原生物学教研室 � 作者简介: 罗冬娇( 1972- ) ,女,浙江杭州人,讲师,硕士,主要从事 病原生物学教学和科研工作。 � 通讯作者: 严杰 文章编号: 1001�0580( 2005) 12�1462�02 � � 中图分类号: Q 949�751�8 � � 文献标识码: A �论 � � 著 蔷薇科植物果核油性提取物体外抗真菌细菌作用* 罗冬娇1,田菊霞1,周金成1,李立伟2,严杰2 � � 摘 � 要: 目的 � 观察蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液体外抗病原真菌和细菌的作用。方法 � 以二性 霉素 B、阿莫西林、庆大霉素为对照, 分别采用二倍平皿稀释法和试管法测定油性提取物初提液和提纯液对假丝酵母 菌、毛癣菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌临床菌株的最低抑菌浓度( M IC)和最低杀菌浓度( MBC)。结果 � 初提液和 提纯液对 79 株假丝酵母菌菌株的 MIC90分别为 1� 25%和 2�5% ( V / V )、对 34 株毛癣菌的 MIC90分别为 0�62% ~ 1�25%和 1�25% ~ 2�5% ( V / V )。初提液和提纯液对 38 株金黄色葡萄球菌、20 株大肠埃希菌的 MIC90均分别为 0�31% 和 0� 62% ( V / V )。0� 31%初提液作用 15 min、0� 62%提纯液作用 30 min 可杀灭白假丝酵母菌 7 374 株和红色 毛癣菌6 180株。0� 16%初提液作用 5 min、0�31%提纯液作用 15 min 可杀灭金黄色葡萄球菌 ATCC25 923 株和大肠埃 希菌 ATCC25 922 株。结论 � 较低浓度的蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液即有体外抑制和杀灭常见皮肤 和粘膜感染病原真菌和细菌的作用,具有成为高效外用消杀剂的前景。 关键词: 蔷薇科植物果核; 油性提取物;抑菌作用;杀菌作用 Effects of oiliness extracts from rose family plant f ruit core against pathogenic fungi and bacteria in vitro � L UO Dongj iao , T IAN Jux ia, ZH OU Jincheng , et al . Depar tment of Basic Medicine, Hangzhou Teachers College ( Hangzhou 310018, China) Abstract: Objective � To determine the effects of orininal and pur ified oiliness extracts from rose family plant fruit core against pathogenic fung i and bacteria in v itr o. Methods� When using amphotericin B, amox icillin and gentamcin as the con� trol drugs, doubling agar dilution method and test tube method w ere applied to detect the M IC and MBC of the or iginal and pur ified oiliness extracts against the isolates of Candida spp, T richophyton spp, S . aureus and E. coli , respect ively. Results � MIC90 values of the original and pur ified oiliness ex tracts were 1�25% and 2�5% ( V / V ) against 79 strains of Candida spp, and w ere 0�62~ 1�25% and 1�25~ 2� 5% ( V / V ) against 38 strains of T r ichophyton spp, respectively . M IC90values of the orig inal and purified oiliness ex tracts were 0� 31% and 0�62% against bot h the 38 strains of S. aureus and 20 strains of E. coli, r espectively . C. albicans strain 7374 and T . rubrum strain 6 180 w ere killed after treated w ith 0�31% of the or iginal o iliness extract fo r 15 min and 0� 62% of the purified oiliness ex tract for 30 min. S . aureus strain ATCC25 923 and E . coli ATCC25 922 w ere killed after tr eated w ith 0�16% of the or iginal oiliness extr act for 5 min and 0� 31% of the purified o ili� ness extr act for 15 min.Conclusion � Relatively low concentrations of the or iginal and pur ified oiliness extr acts fr om rose fam� ily plant fruit core show remarkable activities to inhibit and kill the common pathogenic fungi and bacter ia causing skin and mucosa infection. T he o iliness ex tracts have a fine potential to develop a high effective medicinal disinfectant for ex ternal use. Key words: r ose family plant fruit core; oiliness ex tract ; bacter iostasis; terilization � � 假丝酵母菌尤其是白假丝酵母菌是多种临床标本中检出 率最高的真菌,毛癣菌则是皮肤癣病的主要病原体!1~ 3∀,目前 临床上使用的抗真菌药物一般毒副作用均较大, 通常仅能抑 制而无杀灭真菌的效果!4, 5∀;金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌 是皮肤、粘膜感染的常见病原菌, 且常对多种抗生素耐 药!6~ 8∀。本研究对蔷薇科植物可食用果核的油性提取物体外 抗真菌、细菌作用进行观察, 以期为开发新型抗菌外用药提供 依据。结果 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下。 1 � 材料与方法 1�1 � 样品来源 � ( 1)试验样品: 蔷薇科植物果核油性提取物 由北京中庆奇方生物科技有限公司提供, 包括一次蒸馏初提 液和二次蒸馏提纯液 2 种制剂。( 2)对照样品: 二性霉素 B (批号 020301)、阿莫西林(批号 030115)和庆大霉素( 021020) 分别由上海先锋药业公司、华北药业集团先泰药业有限公司 和南阳普康集团第二制药厂生产。 1�2 � 菌株来源及其培养 � ( 1)致病性真菌:从杭州 3 所医院 阴道感染、皮肤或粘膜感染、各种癣病患者病灶标本中分离鉴 定的白假丝酵母菌( C. albicans ) 66 株、热带假丝酵母菌( C. tr op icalis) 13 株、红色毛癣菌 ( T . r ubrum ) 25 株和须毛癣菌 ( T . mentagr ophy te) 9 株, 计 113 株; ( 2)致病性细菌 : 从患者 不同病灶标本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌 ( S . aur eus ) 38 株, 大肠埃希菌( E . coli) 20 株, 计 58 株。( 3)质控菌株:白假 丝酵母菌 7 374 株和红色毛癣菌 6 180 株由杭州市第三医院 皮肤病研究所提供; 金黄色葡萄球菌 ATCC25 923 和大肠埃 希菌 ATCC25 922 株为本实验室保存。( 4)菌株培养:真菌采 用沙堡培养基 ,接种后 28#C 培养 7 d;细菌采用 Mueller- H in� ton( MH)培养基,接种后 37#C 培养 24 h; 培养基均购自杭州 天和微生物试剂有限公司。 1�3� 体外抑菌试验 � 采用二倍平皿稀释法!3∀测定样品最低 抑菌浓度 ( M IC )。 ( 1) 抑菌试验培养基: 沙堡或 MH 琼脂 ( Mueller- Hinton agar)平板培养基经加热溶解后冷却至 55#C 左右, 分别定量加入提取物或对照药物, 使培养基中的 2 种油 性提取物终浓度分别为 20% , 10% , 5% , 2� 5% , 1�25% , 0�63% , 0� 31% , 0�16% , 0�08% , 0�04% , 0�02% , 0�01% ( V/ V) , 各对照样品终浓度分别为 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0� 5, 0�25, 0�12, 0� 06 mg/ L。( 2)抑菌试验:取经沙堡或 MH 琼脂 斜面培养的 115 株真菌和 60 株细菌新鲜菌落,用灭菌生理盐 1462 中国公共卫生 2005年 12月第 21卷第 12期 � � Chin J Publ ic Health Dec 2005 Vol . 21 No. 12 水配制成浓度为 2∃ 107 CFU / ml的菌液, 分别接种于抑菌试 验培养基, 每点接种 5 �l(每点菌数为 1 ∃ 105CFU / ml) ; 同时 等量接种空白的沙堡或 MH 琼脂平板作对照。真菌 28#C 培 养 7 d、细菌 37#C 培养 24 h 后观察结果,以 50%和 90%同种 菌株未见生长的样品最高稀释度为其 MIC50和 MIC90值。 1�4 � 体外杀菌试验 � 采用试管法测定样品最低杀菌浓度 ( MBC)。取白假丝酵母菌 7 374 株、红色毛癣菌 6 180 株、金 黄色葡萄球菌 ATCC25 923 株和大肠埃希菌 ATCC25 922 株 的菌悬液, 分别接种于与抑菌培养基各浓度相同的沙堡或 MH 液体培养基 ,使其终浓度为 1 ∃ 105 CFU / ml, 室温下分别 作用 5, 15, 30和 60 min; 同时等量接种空白的沙堡或 MH 液 体培养基作对照。于各作用时间结束时, 分别取 0�05 ml培 养物,涂布于不含任何药物的沙堡或 MH 琼脂平板上, 真菌 28#C 培养 7 d、细菌 37#C 培养 24 h 后观察结果, 以未见菌株 生长的样品最高稀释度为其 MBC 值。 2 � 结 � 果 2�1 � MIC 结果( 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1) � 对照组培养基中,真菌及细菌菌株均 生长良好;二性霉素 B 对质控菌株白假丝酵母菌 7 374 株和 红色毛癣菌 6 180 株的 MIC100分别为 4 和 8 mg/ L, 阿莫西林 对金黄色葡萄球菌 ATCC25 923 株的 MIC100为 2 mg / L , 庆大 霉素对大肠埃希菌 ATCC25 922 株的 MIC100为 4 mg / L , 均在 美国临床实验室 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 化委员会( NCCLS)规定的范围内。 表 1 � 蔷薇科植物果核油性提取物体外抑制真菌和细菌的作用( MIC, mg/ L,%) * 样品分类 白假丝酵母菌( n= 66) MIC50 MIC90 热带假丝酵母菌( n= 13) MIC50 MIC90 红色毛癣菌( n= 25) MIC50 M IC90 须毛癣菌( n= 9) MIC50 M IC90 金黄色葡萄球菌( n= 38) MIC50 M IC90 大肠埃希菌( n= 20) M IC50 M IC90 初提液 0� 62 1�25 0�62 1�25 0�16 0�62 0�62 1�25 0�16 0�31 0�16 0� 31 提纯液 1� 25 2�5 1�25 2�5 0�31 1�25 1�25 2�5 0�31 0�62 0�31 0� 62 二性霉素 B 8 64 8 128 16 128 32 128 - - - - 阿莫西林 - - - - - - - - 1 8 - - 庆大霉素 - - - - - - - - - - 2 16 � � 注: * 对照样品 MIC均以 mg/ L 表示; 2种试验样品 MIC均以% ( V/ V)表示 2�2� MBC 结果 � 对照组中, 真菌和细菌菌株均生长良好。 ( 1)杀灭真菌效果: 8 和 16 mg / L 二性霉素 B 作用于白假丝酵 母菌 7 374 株、16 mg/ L 二性霉素 B 作用于红色毛癣菌6 180 株 30 min 均可见到杀灭效果, 但 4 mg/ L 二性霉素 B 对白假 丝酵母菌、4 和 8 mg / L 二性霉素 B 对红色毛癣菌作用 60 min 均未显示杀菌效果。0�31% 和 0�62%样品油性提取物初提 液杀灭白假丝酵母菌 7 374 株和红色毛癣菌 6 180 株的作用 时间均为 5 min; 0�16% 样品油性提取物初提液作用 60 min 可杀灭红色毛癣菌, 但未能杀灭白假丝酵母菌。0�31% 和 0�62%样品油性提取物提纯液杀灭白假丝酵母菌 7 374 株的 作用时间分别为 60 和 30 min, 杀灭红色毛癣菌 6 180 株的作 用时间均为 30 min, 0�16% 样品油性提取物提纯液在 60 min 内均未能杀灭白假丝酵母菌和红色毛癣菌。( 2)杀灭细菌效 果: 2 和 4 mg / L 阿莫西林杀灭金黄色葡萄球菌 ATCC25 923 株作用时间分别为 30 和15 min, 1 mg / L 阿莫西林作用 60 min 未显示杀菌效果; 2, 4 和 8 mg/ L 庆大霉素杀灭大肠埃希菌 ATCC 25 922株作用时间分别为 60, 30 和 30 min。0� 08% , 0�16%和 0� 31%样品油性提取物初提液分别作用 30, 15 和 5 min 可杀灭金黄色葡萄球菌 ATCC25 923 株和大肠埃希菌 ATCC25 922 株。0�16%和 0� 31%样品油性提取物提纯液分 别作用 60 和 15 min 可杀灭金黄色葡萄球菌 ATCC25 923 株, 但 0� 08%油性提取物提纯液作用 60 min 未能显示杀菌效果; 0�08% , 0� 16%和 0� 31%油性提取物提纯液分别作用 60, 30 和 15 min 可杀灭大肠埃希菌 ATCC25 922株。 3 � 讨 � 论 本文结果可见,二性霉素 B 对 79 株假丝酵母菌、34 株毛 癣菌的 MIC90分别高达 64~ 128 和 128 mg/ L, 阿莫西林对 38 株金黄色葡萄球菌、庆大霉素对 20 株大肠埃希菌 M IC90分别 为8 和 16 mg/ L , 提示上述真菌和细菌菌株均有较高耐药 性!9∀。而蔷薇科植物果核的油性提取物初提液和提纯液对假 丝酵母菌菌株 MIC90分别为 1� 25% 和 2�5% ( V / V )、对毛癣 菌菌株 MIC90分别为 0� 62% ~ 1�25% 和 1�25% ~ 2�5% ( V / V)、对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌 MIC90均分别为 0�31% 和0�62% ( V/ V)。表明这 2 种提取物有较强的抗真菌和抗 细菌作用,其中初提液抗细菌作用略强于提纯液。 体外杀灭真菌试验结果显示, 8 和 16 mg/ L 二性霉素 B 作用 30 min, 4 mg/ L 二性霉素 B 作用 60 min 均不能杀灭白假 丝酵母菌 7 374株和红色毛癣菌 6 180株, 而 0� 31%蔷薇科植 物果核油性提取物初提液作用 15 min、0� 62%提纯液作用 30 min 即能杀灭该 2 株真菌。对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌 的杀灭作用较真菌更强, 0� 16%初提液作用 5 min、0�31% 提 纯液作用 15 min 即能杀灭上述 2 株细菌。 从植物中提取有抗菌作用的有效成分是研发新药途径之 一!5, 9, 10∀。本文结果提示, 蔷薇科植物果核油性提取物在较 低浓度时即有较强的抑制和杀灭真菌及细菌的作用, 因此具 有开发高效、安全无副作用、廉价的抗皮肤或粘膜真菌和细菌 感染外用消杀剂的良好前景。 参考文献 1 � Farage MA, Stadler A. 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