血凝仪测得Ⅷ因子百分活性与国际单位换算方法的探讨

血凝仪测得Ⅷ因子百分活性与国际单位换算方法的探讨 来源：本站原创 作者：杨海平（北京市红十字血液中心，北京100088） 发布时间：2009-12-4 新鲜冰冻血浆（FFP）是目前临床常用的一种血液成分，在治疗和预防出血性疾病及大剂量输血所致的凝血功能障碍方面起非常重要的作用。在FFP中，Ⅷ因子是非常不稳定又重要的一种凝血因子［1］。在目前采供血机构对血液质控检测中，常用Ⅷ因子效价（IU/ml）作为FFP的质量控制指标［2］。随着检测技术的自动化，全自动血凝仪也开始进入采供血机构。全自动血凝仪一般的输出结果是FFP中Ⅷ因子的百分活性，此活性单位适用于临床诊断，正常人血浆中Ⅷ因子参考值为（103±25 7）%［3］。采供血机构对FFP中Ⅷ因子效价的测量一般是通过测定已知国际单位的国家 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品来进行换算。笔者探讨了一个新的换算方法，可用于FFP质量控制指标中Ⅷ因子百分活性与国际单位的换算。 1  材料与方法 1．1  仪器及试剂  ACL7000全自动血凝仪（美国贝克曼库尔特公司）及配套进口试剂，包括：Ⅷ因子缺乏血浆，APTT试剂（含硅土），因子稀释液，校准血浆，正常质控物，CaCl2溶液。 1．2  样品稀释 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载   用含量为 7 3 IU/ml的Ⅷ因子浓制剂国家标准品（中国药品生物制品检定所，批号20010607）进行稀释（表1）。 表1  稀释方案 （μl）   1∶8 1∶10 1∶12 1∶14 1∶17 1∶20 1∶24 1∶30 因子稀释液 490 450 550 650 640 570 460 580 国家标准品 70 50 50 50 40 30 20 20                   1．3  测定方法  严格按照仪器操作说明和试剂要求进行。仪器配套正常质控物的靶值范围82%—122%，测定值：94%，以此作室内质控，监测仪器的工作状态。用全自动血凝仪分别测定稀释后国家标准品Ⅷ因子的凝固时间和百分活性，对每种样品测2次，取平均值。 2  结果 2．1  测定结果  不同稀释比例下国家标准品Ⅷ因子的凝固时间（用TC表示）和 百分活性（用V表示）的测定值见表2。从表2可以看出，不同的稀释比例，获得的N/V值不完全相同，这说明N/V值与稀释比例之间不是严格线性关系。另外采用Ⅷ因子国家标准品（中国药品生物制品检定所，批号20010606，含量为 3 8 IU/ml）试验，都得到相同的结论。 表2  国家标准品Ⅷ因子的百分活性（V）和凝固时间（TC）测定 稀释比例 1次测定 2次测定 测量均值 N/V 计算值 实际值   V（%） TC（s） V（%） TC（s） V（%） TC（s） （IU/%） N（IU/ml） N（IU/ml） 绝对偏差 1∶8 128 49 126 49 2 127 0 49 1 0 0072 0 91 0 91 0 00 1∶10 91 52 94 51 8 92 5 51 9 0 008 0 73 0 73 0 00 1∶12 72 54 2 75 53 8 73 5 54 0 0 0083 0 61 0 61 0 00 1∶14 59 56 1 60 56 59 5 56 1 0 0087 0 52 0 52 0 00 1∶17 47 58 2 47 58 2 47 0 58 2 0 0092 0 43 0 43 0 01 1∶20 36 60 9 39 60 2 37 5 60 6 0 0096 0 37 0 37 0 00 1∶24 26 64 3 29 63 2 27 5 63 8 0 0109 0 30 0 30 -0 02 1∶30 22 66 6 23 65 8 22 5 66 2 0 0109 0 24 0 24 0 00                       2．2  凝固时间（TC）与百分活性（V）的关系  由于ACL7000全自动血凝仪在高曲线时的最佳测量范围为15%—150%，因此，选取了8个稀释比例进行测定。 表2中，对每种样本，均测量2次，根据2次测量的平均值，取对数作图，得到的国家标准品Ⅷ因子的凝固时间（TC）和百分活性（V）的相关性见图1。图1中相关系数为r=0 99982，可见测量结果线性非常好。这说明，仪器工作正常，测量结果可靠。 2．3  百分活性与国际单位的换算新方法  根据表2数据以国际单位数N作为横坐标，百分活性V（取2次测量的平均值）为纵坐标，可得到不同稀释的标准品所含国际单位数N与百分活性V的关系图（图2）。从图2可见，所测数据点有近似的线性关系，当稀释比例低时，线性较好；在稀释比例高时，偏离线性较多。因此，仅做线性回归进行换算可能有较大的误差（图2中虚线，线性拟合相关系数r =0 9894），尤其是为求简单，仅作一种稀释（对应图2中一点）进行换算，误差可能更大。本文尝试作2次多项式拟合，发现效果非常好，拟合曲线相关系数r =0 9995，如图2中实线所示。 图1  凝固时间（TC）与百分活性（V）的关系 图2  不同稀释的标准品所含国际单位与测定 的百分活性的关系 通过2次多项式拟合得到的百分活性V与对应的国际单位数N的关系为V=-0 452+79 019×N+67 249×N2从上式，可得到不同百分活性V对应的国际单位数N的换算关系为：N=-79 019+79 0192+4×67 249×（V+0 452）134 498上式即为本文获得的计算公式，通过公式，就可以根据样品百分活性的测量值计算出其每毫升国际单位数。将表2中的样品数据利用公式进行计算，得到样品每毫升国际单位数，见表2“计算值”。与样品实际值进行比较，见表2“绝对偏差”，可见，计算公式得出的结果与实际值的一致性很好。 2．4  测量结果举例  表3给出了4个样品同时采用ACL7000型全自动血凝仪测出的百分活性，以及根据公式计算出的样品每毫升国际单位数含量。作为对比，表3还给出了用稀释比例1∶ 8获得的0 0072 IU/%作为换算系数或用稀释比例1∶ 30获得的0 0109 IU/%作为换算系数的换算结果。 表3  不同换算系数的结果比较 样品编号 V（%） 按公式N（IU/ml） 按1∶8N/VN（IU/ml） 按1∶30N/VN（IU/ml） 08074727 72 0 60 0 52 0 78 08067002 69 0 59 0 50 0 75 08071289 108 0 81 0 78 1 18 08066705 98 0 76 0 71 1 07           根据血液标准质控要求：N≥0 7（IU/ml）［4］，因此，表3中，如果按公式换算，则后2个样品属合格品；如果按稀释比例1∶ 8换算，则后两个样品也属合格品；但是，如果按稀释比例1∶ 30换算，则4个样品均属合格品。 3  讨论 在以往的测定中是用已知国际单位的国家标准品进行一次适当的稀释后测得百分活性，即国际单位（IU）/百分活性（%），作为百分活性的换算系数，但测量数据表明，采用这种方法，对国家标准品进行不同的稀释所得换算系数相差很大，换算得到的样品中Ⅷ因子含量相差也很大。因此，根据一个稀释结果进行换算，会因稀释方案的不同，可能得到互相矛盾的判定结论，质控结果也许是不可靠的。本文给出的换算方法，操作虽然复杂些（如每次均需获取国家标准品的换算公式），但是，换算结果与稀释方案无关，一致性好，可以避免出现相互矛盾的质控结论。 参考文献 ［1］杨江存，李芒会，于青，等．新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化．中国输血杂志，2005，18（2）：211 ［2］中华人民共和国卫生部．中国输血技术操作规程血站部分．天津：天津科学技术出版社，1997，44—45 ［3］中华人民共和国医政司编．全国临床检验操作规程．3版．南京：东南大学出版社，2006，212—213 ［4］中华人民共和国国家标准．全血及成分血质量要求．中华人民共和国国家质监督检验检疫总局．GB18469—2001 （2008 06 03收稿，11 02修回）本文编辑：刘晓明