DPPH法
药桑椹花青素对DPPH自由基清除作用的测定DPPH自由基是一种稳定的有机自由基，其乙醇溶液呈紫色，在波长517nm 处有强烈吸收。在有自由基清除剂存在时，DPPH 的孤对电子被配对，从而使其褪色，褪色程度与其接受电子呈定量关系，因而可用比色法进行定量分析[10-13]。将AMAL、AMALV、AMNL及VC 用蒸馏水配制成溶液，芦丁用甲醇配制成溶液，质量浓度如下:1、5、10、20、30、40、50mg/L。DPPH用无水乙醇配制成2×10-4
mol/L的溶液。准确吸取样品待测溶液、DPPH溶液各2mL，混匀后室温下放置30min，于波长517nm处测定吸光度，每个样品平行测定 3 次，取其均值。
按式(1)计算各待测样品对DPPH自由基的清除率。
Ai,Aj
清除率/%= (1,————)×100
Ac
式中: Ai为2mL样品溶液+2mL DPPH试剂混合液的吸光度;Aj为2mL样品溶液+2mL空白溶剂(无水乙醇)混合液的吸光度;Ac为2mL DPPH溶液+2mL空白溶剂混合液的吸光度。
DPPH?
标准
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曲线的制作
准确称取[DPPH?]2.5mg,用甲醇定容到100 mL,配制成质量浓度为
-22?5×10mg/mL的标准溶液,置冰箱中备用(现用现配)。分别取0、2、4、6、8、
10 mL标准溶液,用甲醇定容至10 mL,最终质量浓度分别为
0,5,10,15,20,25μg/mL。测定上述标准溶液在515 nm波长处的吸光度,制作标
准曲线(见图3-2)。
测定方法和清除率的计算:
[19]对DPPH?自由基清除方法的测定参阅Brand-William(1995)。分别取供试品
-1溶液各20μL，40μL，60μL，80μL，100μL，量取浓度为1.01×10 mol/L的DPPH?溶液相应的体积至4mL。立即混匀，用比色皿在515 nm波长处进行测定,在一定时间间隔内测定吸光度，直到读数稳定。
通过公式:清除率=[1-A/A]×100%来计算自由基抑制率. 10
式中A为溶剂的DPPH?在515 nm处的吸光度,A为抗氧化性物质与01
DPPH?反应后的515 nm处的吸光度.
[20]清除50%自由基时样品浓度(IC)的计算 50
将加入体积与其自由基清除率进行线性回归,得线性回归方程,再由该方程
计算清除50%自由基时所需的样品浓度,即IC值。 50
IC=供试浓度*加入体积/反应体系总体积 50
3.1.2宁夏鹅绒藤水提物各组分对DPPH自由基的清除作用:
3.1.2.1宁夏鹅绒藤水提物浸膏对DPPH自由基的清除作用:
供试品溶液的制备:
取一定的水提取浸膏，用水溶解，配制成浓度为10mg/mL的溶液，备用; 测定方法:
分别取以上制备的水提浸膏部分溶液各20μL，40μL，60μL，80μL，100μL，
-1量取浓度为1.01×10 mol/L的DPPH?溶液相应的体积至4mL。立即混匀，用比色皿在515 nm波长处进行测定,在一定时间间隔内测定吸光度，直到读数稳定。
通过公式:清除率=[1-A/A]×100%来计算自由基抑制率. 10
式中A为加入水为对照的DPPH?在515 nm处的吸光度,A为抗氧化性物质10
与DPPH?反应后的515 nm处的吸光度.
3.1.2.2石油醚部分对DPPH自由基的清除作用:
供试品溶液的制备:
取一定的石油醚部分浸膏，用石油醚溶解，配制成浓度为10mg/mL的溶液，备用;
测定方法:
分别取以上制备的鹅绒藤石油醚部分溶液各20μL，40μL，60μL，80μL，
-1100μL，量取浓度为1.01×10 mol/L的DPPH?溶液相应的体积至4mL。立即混匀，用比色皿在515 nm波长处进行测定,在一定时间间隔内测定吸光度，直到读数稳定。
通过公式:清除率=[1-A/A]×100%来计算自由基抑制率. 10
式中A为加入石油醚为对照的DPPH?在515 nm处的吸光度,A为抗氧化性01物质与DPPH?反应后的515 nm处的吸光度.
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