蛋白酶酶切位点

蛋白酶酶切位点 蛋白酶的分类及作用位点 蛋白酶 分类 作用位点 已知抑制物 氨基肽酶 金属蛋白酶 带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不分解由X-Pro、D或Q组成的肽键 2，2，双吡啶，1．1()-菲咯啉 菠萝蛋白酶 巯基蛋白酶 无特异性 α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化 羧肽酶A 锌金属蛋白酶 带有自由氨基酸的L-氨基酸羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸 EDTA，EGTA 羧肽酶B 锌金属蛋白酶 K- Lys，R- Arg羧基端 EDTA，EGTA，碱性氨基酸 羧肽酶Y 丝氨酸羧肽酶 氨基酸羧基端 PMSF 组织蛋白酶C 琉基蛋白酶 氨基端双肽，可通过K，R或P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭 醋酸碘， 甲醛 胰凝乳蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 在F- Phe,T- Thr或Y- Tyr之后 抑肽酶,PMSF,TPCK,α-巨球蛋白 胶原酶 金属蛋白酶 在P-X-G-P肽链中X之后 EDTA,EGTA,还原剂,但无血清存在 dispase 金属蛋白酶 无特异性 EDTA，EGTA，Hg2+，重金属 内肽酶Arg-C 丝氨酸蛋白酶 在R- Arg之后 α巨球蛋白，TLCK 内肽酶Asp-N 金属蛋白酶 在D- Asp和C-Cys半胱氨酸之前 EDTA，α菲咯啉 内肽酶Glu-C 丝氨酸蛋白酶 在E- Glu/Gln或D- Asp之后 α巨球蛋白，TLCK 内肽酶Lys-C 丝氨酸蛋白酶 在K- Lys之后 TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽 肠激酶 丝氨酸蛋白酶 在D-D-D-D-K-肽链中K之后 Xa因子 丝氨酸蛋白酶 在R- Arg之后 PMSF,APMS,大豆胰蛋白酶抑制物 无花果蛋白酶 琉基蛋白酶 无特异性 TPCK，TLCK，α-巨球蛋白 激肽释放酶 丝氨酸蛋白酶 在一些R- Arg之后 抑肽酶，抑蛋白酶醛肽 木瓜蛋白酶 巯基蛋白酶 长期孵育时具有广泛特异性arg、lys 、gly、L-Citrulline TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽α—巨球蛋白，烷化剂 胃蛋白酶 酸蛋白酶 广泛特异性phe、trp、tyr等疏水aa 胃蛋白酶抑制素 纤溶酶 丝氨酸蛋白酶 在K- Lys或R- Arg之后 PMSF,TLCK,抑肽酶,α-巨球蛋白 链霉蛋白酶 混合型 无特异性 B．M．完整药片 蛋白酶K 丝氨酸蛋白酶 广泛特异性 PMSF，PefablocSc 枯草杆菌蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 无特异性 PMSF，α巨球蛋白，苯甲脒 热溶素 锌金属蛋白酶 在非极性残基之前 EDTA 凝血酶 丝氨酸蛋白酶 在K- Lys之后 TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，α巨球蛋白，苯甲脒 胰蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 在K- Lys或R -Arg之后arg、lys TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，α巨球蛋白         蛋白酶          分类              作用位点                                已知抑制物 木瓜蛋白酶 巯基蛋白酶 具有广泛特异性 TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白,烷化剂 胃蛋白酶    酸蛋白酶    广泛特异性                胃蛋白酶抑制素 胰蛋白酶  丝氨酸蛋白酶  在K或R之后 TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽抑肽酶,α巨球蛋白 人体20种氨基酸及其英文缩写 名称    三字符号 单字符号 丙氨酸      Ala    A 精氨酸      Arg    R 天冬氨酸  Asp      D 半胱氨酸  Cys      C 谷氨酰胺  Gln      Q 谷氨酸    Glu/Gln  E 组氨酸    His      H 异亮氨酸  Ile        I 甘氨酸    Gly      G 天冬酰胺  Asn      N 亮氨酸    Leu      L 赖氨酸    Lys      K 甲硫氨酸  Met      M 苯丙氨酸  Phe      F 脯氨酸    Pro      P 丝氨酸    Ser      S 苏氨酸    Thr      T 色氨酸    Trp      W 酪氨酸    Tyr      Y 缬氨酸    Val      V 【生化】特异性蛋白酶的酶切位点 胰蛋白酶arg、lys，得到以arg、lys为C末端残基的肽段。 胰凝乳蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。 胃蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。 木瓜蛋白酶arg、lys。 葡萄球菌蛋白酶，磷酸缓冲液ph7.8时断裂glu、asp。碳酸氢铵缓冲液ph7.8或醋酸铵缓冲液ph4.0时断裂glu。 梭菌蛋白酶arg，用于不溶性蛋白的长时间裂解。 CNBr断裂Met。 羟胺断裂asn—gly间的肽键。 二硫键可以用巯基化合物还原法或者过甲酸氧化法断裂.。 木瓜蛋白酶（Papain），又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。 木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。纯木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，约占可溶性蛋白质的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，约占可溶性蛋白质的45%；（3）溶菌酶，分子量25000，约占可溶性蛋白质的20%；及纤维素酶等不同的酶。 番木瓜未成熟果实中含有木瓜蛋白酶(Papain)、木瓜凝乳蛋白酶A(Chymopapain A )、木瓜凝乳蛋白酶B(Chym opapain B )、木瓜肽酶B (PapayaPeptidase B ) 等多种蛋白水解酶。且已知四种半胱氨酸蛋白酶的一级结构具有高度的同源性。其中，木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。 木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。此酶属内肽酶，能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO-NH—生成分子量较小的多肽类。 最适合pH值5.7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点I= 8.75；最适合温度55～60℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。 胃蛋白酶为什么不水解自身_百度文库 胃蛋白酶是一种酸性蛋白酶。由胃部中的胃粘膜主细胞释放出没有活性的胃蛋白酶原。酶原 在遇到由胃壁细胞所释放的胃酸中的盐酸后切去 44个氨基酸残基将被激活，其最适pH值约为 1.5～2.2，在中性或碱性pH值的溶液中，胃蛋白酶 会发生解链而丧失活性。胃蛋白酶在对蛋白质或 多肽进行水解时，具有一定的氨基酸序列特异性， 倾向于水解氨基端或羧基端为芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸）或亮氨酸的肽键。 胰蛋白酶和糜蛋白酶： 糜蛋白酶潜在切点太多了，你联合用的话会出好多峰，要控制好反应时间或者建议glu-C配合trypsin  切E + K + R 或glu-C + lysyl endopeptidase  切 E + K 都很特异，比较好的结果，顺便说一下 trypsin太猛 不要放太多。 搭配糜蛋白酶 反应要彻底点，主要的切点 W Y F T