石蜡切片冰冻切片超薄切片解读

石蜡切片冰冻切片超薄切片解读 石蜡切片技术 虽然21世纪医学高科技迅猛发展、日新月异，新的诊断方法层出不穷，但迄今为止，即使是世界上最发达国家，疾病的确诊主要还是通过病理诊断。病理诊断是所有其他诊断(包括临床诊断、影像诊断、实验室检查诊断乃至分子诊断)的金标准。因此学习相关病理诊断技术具有重要意义。病理技术不仅可以作为临床诊断的金标准，还可以帮助临床查明死因，对研究生来说还可以提供教学、科研的资料。 病理学科是一门基础与临床之间起着桥梁作用的重要学科，病理研究方法在技术工作上又是多方面的，有尸体解剖，大体标本的制作、制片技术(石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片、半薄切片、超薄切片)组织化学方法，免疫酶标技术、荧光技术、摄影技术等。 硕士研究生学习的课题研究阶段，往往需要自己设计并亲自动手操作，为满足研究生的实际需要，本章简要介绍常用的病理学有关技术，并注意尽量做到:?突出实用性:以行之有效的病理学常用技术为主线，围绕硕士研究生的实际需要，对病理学技术的原理、相关理论及具体操作方法、 步骤 新产品开发流程的步骤课题研究的五个步骤成本核算步骤微型课题研究步骤数控铣床操作步骤 等进行阐述。?反映进展性:充分反映病理学的时代性与进展性。 第一节 组织制片的概述 组织制片技术的应用，从1665年由HOOk发现细胞开始，已有300多年的历史。最早应用冰冻切片;随后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石腊切片;后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。 组织制片技术随着生物学和医学的发展而发展。切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。因此，组织制片技术是教学、医学和科研中不可缺少的一个组成部分。 第二节 制片的种类 一、组织切片法: 任何组织切片必须依靠切片机将组织切成薄片(厚度以μm计)，再进行染色而得到结果。在切成薄片以前必须设法使组织内部渗入足够的支持物质，使组织保持一定的硬度，然后使用切片机进行切片。渗透到组织中的支持剂(物质)有多种，如石腊、明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等。 病理学研究中最常用的组织切片技术是常规石蜡切片和冷冻切片。其要点是将研究的组织进行切片，然后进行各种染色。冰冻组织切片法是直接利用快速冷冻法进行切片。 二、组织非切片法 不用切片机，不经过切片手续而制成组织切片的方法，包括整体封藏法、浮片法、压碎法和组织直接印片法。这些方法操作简单而快，可根据制片的需要进行选择使用。 第三节 石蜡切片技术 石蜡切片法组织切片的主要程序: 一、取材 1 取材是根据实验目的及临床活检、尸解组织的病变程度而合理取得组织材 料。为了制作优质的切片，取材时组织愈新鲜愈好，并应及时固定。 (一)病理标本的来源及分类: 病理标本的来源有临床活检、尸体解剖、实验动物、培养细胞。 主要病理标本大致可分类如下: 1、手术标本 2、内镜取材标本 3、穿刺取材标本 4、细胞学标本 可分为:痰、尿、阴道分泌物、胸水腹水、穿刺细胞学标 本、内镜刷取标本、其它等。 (二)取材的一般原则 1、认真观察，取准标本病变部位，切勿漏取。 2、要能全面反映出器官有无病变，显示病变全貌(最大面积)，包括肿瘤转 移部位、切缘等。 3、根据临床或肉眼所见及病史提示对病变组织多取材，主要病变与相关组 织多取材，特殊病变要尽量多取材。 4、若取材大小受限，应尽量取包含病变周边相对正常组织。 5、应避免选取凝血块、坏死组织及粘液成分。 6、要全面描述病变状况，由表及里，测重量、部位、体积等。 (三)取材方法 常见标本取材方法如下: 1、阑尾炎标本 2、肿瘤标本 3、胃标本 4、肠标本 5、肺、肾脏标本 6、乳腺癌根治标本 7、子宫标本 8、卵巢与输卵管囊肿标本 9、淋巴结标本 10、一般小标本 (四)取材注意事项 1、新鲜 2、配合 3、目的 4、部位 5、避免挤压 6、大小 7、数量 8、方向 9、标记 10、手术 11、小标本 12、交叉污染 2 (五)临床病理取材注意事项 姓名、样本、件数 二、组织固定 (一)固定的作用: 1、保持细胞与生活时的形态相似。 2、保持细胞内特殊的成分转变成不溶性物质。 3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，以便染色后易于区别和观察。 4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬度，便于制片。 (二)原理:使组织及细胞内蛋白凝固;使有关成分沉淀、变性，成为不溶性物质。 (三)方法:浸泡、灌注(局部灌注、全身灌注)、蒸汽熏蒸 (四)固定时间: 一般固定液在24小时内不能穿透厚度大于2~3mm的实体组织或0.5cm的多孔疏松组织。 常规组织病理学:可长时间固定 细胞病理学:可长时间固定 细胞化学:不宜过长，约1小时为宜 (五)固定注意事项 1. 固定液有毒性，注意自身防护 2. 及时，尽可能新鲜。 3. 超微结构观察:低温固定 4. 注意不同研究目的对固定液的特殊需要 5. 固定液用量:足，必要时及时更换。一般应为组织块总体积的4~5倍，也可达15~20倍。 (六)常用的固定液: 1、单纯固定液:甲醛、乙醇、丙酮、戊二醛、醋酸、4%多聚甲醛 2、混合固定液:乙醇-甲醛液(AF液)、B5固定液(醋酸钠-升汞-甲醛)、Bouin氏液、Carnay氏液、Zenker固定液、氯化汞、苦味酸、重铬酸钾、AAF液、甲醛-生理盐水等。 三、固定后处理: (一)固定后处理的目的:及时洗去固定液，有利于脱水、切片和染色，并防止染色中甲醛色素的产生。 (二)固定后处理的注意事项:洗涤注意固定剂是否含乙醇或以水配制。 四、脱水: (一)脱水的目的:利用脱水剂置换及驱除组织中的水分，以利于透明和浸蜡。 (二)脱水的步骤: 一般大小约为1.5cm×l.8cm×0.2cm的组织，其脱水步骤和时间如下: 70,乙醇1,2h 80,乙醇2,4h 90,乙醇2,4h 95,乙醇2,4h 无水乙醇2,4h (三)脱水的注意事项: 1、浓度梯度 3 2、彻底干净 3、时间适度 4、有盖瓶子 5、达到无水 6、其它 五、透明 (一)透明的目的 组织块在浸蜡前，必须通过透明以便使石蜡浸入组织内，起充分支持硬化组织块的作用，以便完整切片。 通常根据透明时间与肉眼观察相结合判断透明程度。 (二)常用透明剂的种类和使用方法 最常用的是二甲苯，另外还有甲苯、苯、氯仿、香柏油、松节油、汽油等。 六、浸蜡 (一)浸蜡的目的 组织经过脱水、透明后要用石蜡、火棉胶、碳蜡等支持剂透入内部，使其变硬并将组织包埋进去以利于切片和观察，这个过程称为“透入(浸蜡)”或“包埋”。 (二)浸蜡的方法 将组织经过透明以后立即投入到液体石蜡中去。在浸蜡时组织必须经过数次纯石蜡(石蜡?、?、?)，这样可以使石蜡中剩余的透明剂完全除尽，以免影响切片质量。 (三)浸蜡剂的种类 1、石蜡 石蜡有高熔点和低熔点之分，一般普遍应用熔点为56?以上的石蜡。低熔点在54?以下，用于酶的显示和保存抗原活性。 2、火棉胶 目前使用火棉胶透入组织较少，用于染色前的覆盖液较多。 3、碳蜡 4、明胶 七、包埋 (一)包埋的目的:用石蜡将经过固定、脱水、透明、浸蜡后的组织包绕成长方体块状以便于切片。 石蜡是动物植物、人体组织制片技术中极重要且应用最广的包埋剂。包埋蜡须在温箱内经多次熔化沉淀后的干净蜡，包埋较为理想，其包埋蜡熔点为56?,58?。将经过固定、脱水、透明、浸蜡后的组织用石蜡埋入，待组织冷却、变硬，这样组织可以获得一定的硬度，以便切成薄片。 (二)石蜡包埋的注意点: 1、动作要迅速。 2、注意切面。 3、加温镊子。 4、组织不能重叠。 5、包埋用蜡一般为工业蜡。 八、切片 (一)切片前的准备工作 1、修块:石蜡切片前应先将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去，组织四周留2mm的石蜡边。 4 2、粘块 (二)切片操作 包括切片、展片和烤片。 1、切片:将包埋好的组织块用切片机切成一定的厚度(一般为4μm)的薄片称为切片。切片机多为轮转式切片机或平推式滑动切片机。 2、展片:将已切妥的切片在温水中铺展平整后，用载玻片捞起附贴其上称为展片。 3、烤片稍晾干后再用烤片机烤片，使其牢固附着，称为烤片。 冰冻切片技术 冰冻切片在组织学技术中应用范围较广，对病理学中的临床手术的快速诊断其意义更大。 冰冻切片多用于新鲜组织，甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。 一、冷冻切片的目的 1、在手术进行中的病理确定。 2、了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或转移的程度。 、了解恶性肿瘤手术范围。 3 4、诊断剖腹探查时所发现的异样组织。 5、显示组织中的脂肪和脂类物质。如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。 6、某些酶的显示。 7、神经病理学技术中的某些染色法。 8、免疫荧光的研究。 二、实验方法 1、准备:将仪器打开，样品台温度调至-40?。 2、取材:组织必须新鲜，尽可能不经水洗。取材时应避免组织挤压，防止人为假象 。样品大小5×5×3mm。 3、速冻:将样品放在样品台上，样品四周加水加固，冷冻5,10min。 4、切片:升高温度至- 15?(视样品而定)，约5min后开始切片，厚度6,15μm。 5、制片:将切片直接放在载玻片上。 6、固定液(丙酮)中固定1,2min。 7、染色观察 8、记录:将观察的结果记录实验 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 上。 切片温度的设定原则: 1、柔软、含水较多的组织设定温度高。 2、致密、富含脂肪的设定温度低。 冰冻切片的特点: 优点: 1、简便。 2、快速。 3、组织变化不大。 5 4、能很好保存脂肪，类脂等成分。 5、较完好地保存各种抗原活性及酶类。 不足: 1(不容易做连续切片。 2(切取的组织不能过大。 3(不容易制作较薄的切片。 4(组织结构不如石蜡切片清晰。 超薄切片的制作技术简介 一、透射电镜样品制作操作流程 取材——漂洗(生理盐水)——前固定(2.5%戊二醛，4ºC冰箱2小时以上)——漂洗(0.1M 磷酸缓冲液，3次，45分钟)——后固定(1%锇酸1小时左右)——漂洗(0.1M 磷酸缓冲液，3次，45分钟)——块染(1%醋酸铀2小时)——梯度脱水(50%、70%、80%、90%、100%丙酮各15分钟， 100% 2次，各10分钟)——浸透(丙酮:包埋液=1:1，37 ºC烘箱2小时;丙酮:包埋液=1:4， 37ºC烘箱过夜;纯包埋液45ºC烘箱2小时)——包埋聚合(45ºC烘箱3小时，65ºC烘箱48小时)。 二、扫描电镜样品制备操作流程 取材(做好样品观察面的标志)——漂洗(生理盐水或缓冲液)——固定(2.5%戊二醛2小时以上)——漂洗(0.1M磷酸缓冲液，3次，45分钟)——后固定(1%锇酸，2小时)——脱水( 50%、70%、80%、90%、95%各15分钟，换醋酸异戊酯15分钟或叔丁醇15分钟)——干燥(零界点干燥或冷冻干燥)——镀膜(真空镀膜仪或离子溅射仪) 古今名言 敏而好学，不耻下问——孔子 业精于勤，荒于嬉;行成于思，毁于随——韩愈 兴于《诗》，立于礼，成于乐——孔子 己所不欲，勿施于人——孔子 读 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 破万卷，下笔如有神——杜甫 读书有三到，谓心到，眼到，口到——朱熹 立身以立学为先，立学以读书为本——欧阳修 读万卷书，行万里路——刘彝 6 黑发不知勤学早，白首方悔读书迟——颜真卿 书卷多情似故人，晨昏忧乐每相亲——于谦 书犹药也，善读之可以医愚——刘向 莫等闲，白了少年头，空悲切——岳飞 发奋识遍天下字，立志读尽人间书——苏轼 鸟欲高飞先振翅，人求上进先读书——李苦禅 立志宜思真品格，读书须尽苦功夫——阮元 非淡泊无以明志，非宁静无以致远——诸葛亮 熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟——孙洙《唐诗三百首序》 书到用时方恨少，事非经过不知难——陆游 问渠那得清如许，为有源头活水来——朱熹 旧书不厌百回读，熟读精思子自知——苏轼 书痴者文必工，艺痴者技必良——蒲松龄 声明 访问者可将本资料提供的 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 用于个人学习、研究或欣赏，以及其他非商业性或非盈利性用途，但同时应遵守著作权法及其他相关法律的规定，不得侵犯本文档及相关权利人的合法权利。谢谢合作～ 7