吸附无细胞百白破联合疫苗

吸附无细胞百白破联合疫苗 Xifu Wuxibao Bai Bai Po Lianhe Yimiao Diphtheria，Tetanus and Acellular Pertussis Combined Vaccine，Adsorbed 本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加入氢氧化铝 佐剂制成。用于预防百日咳、白喉、破伤风。 生产、检定用设施、水、器具、动物等应符合“凡例”要求；生产用原辅材料应符合 现行《中国药典》的要求。 2.1混合前单价原液 2.1.1无细胞百日咳疫苗原液制造应符合本品种附录的规定。 2.1.2白喉类毒素原液制造应符合“吸附白喉疫苗”中2.1～2.2项的规定。 2.1.3破伤风类毒素原液制造应符合“吸附破伤风疫苗”中2.1～2.2项的规定。 2.1.4原液检定 2.1.4.1百日咳疫苗原液检定 按本品种附录中 2项进行。 2.1.4.2白喉类毒素原液检定 按“吸附白喉疫苗”中3.1项进行。 2.1.4.3破伤风类毒素原液检定 按“吸附破伤风疫苗”中3.1项进行。 2.2半成品 2.2.1配方 每1ml半成品中各种抗原成分含量如下： 无细胞百日咳疫苗原液 不高于18μg PN 白喉类毒素不高于25 Lf 破伤风类毒素不高于7 Lf 2.2.2佐剂配制 2.2.2.1配制氢氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或三氯化铝加氢氧化钠法。用氨水配 制者需透析除氨后使用，也可用其他适宜方法配制。 2.2.2.2配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，不应含有凝块或异 物。 2.2.2.3氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。 2.2.3合并及稀释 将白喉类毒素、破伤风类毒素及无细胞百日咳疫苗原液加入已稀释的佐剂内，调节pH 值至5.8～7.2。 2.2.4半成品检定 按3.1项进行。 2.3成品 2.3.1分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2.3.2分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.3.3规格 每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含无细胞百日咳疫苗效价应不低于4.0IU，白喉疫苗效价应不低于30IU，破伤风疫苗效价应不低于40IU。 2.3.4包装 应符合“生物制品包装规程”规定。 3.1半成品检定 无菌检查 依法检查（附录? A），应符合规定。 3.2成品检定 3.2.1鉴别试验 3.2.1.1无细胞百日咳疫苗 抽取本品按3.2.4.1进行，应产生相应抗体，或采用其他适宜的抗原抗体反应试验。 3.2.1.2白喉类毒素 可选择下列一种方法进行：（1）疫苗注射动物应产生抗体（附录? C）；（2）疫苗加枸橼酸钠或碳酸钠将佐剂溶解后，做絮状试验（附录? D），应出现絮状反应；（3）疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验（附录? C），应出现免疫沉淀反应。 3.2.1.3破伤风类毒素 可选择下列一种方法进行：（1）疫苗注射动物后应产生破伤风抗体（附录? B）；（2）疫苗加入枸橼酸钠或碳酸钠将吸附剂溶解后做絮状试验（附录? D），应出现絮状反应；（3）疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验（附录? C），出现免疫沉淀反应。 3.2.2物理检查 3.2.2.1外观检查 振摇后应呈均匀乳白色混悬液，无摇不散的凝块或异物。 3.3.2.2 装量 按附录?A中装量项进行，应不低于表示量。 3.2.3化学检定 3.2.3.1pH值 应为5.8～7.2（附录? A）。 3.2.3.2氯化钠含量 应为7.5～9.5g/L（附录? G）。 3.2.3.3氢氧化铝含量 应为1.0～1.5mg/ml（附录? F）。 3.2.3.4硫柳汞含量 应不高于0.1g/L（附录? B）。 3.2.3.5游离甲醛含量 应不高于0.2g/L（附录? L）。 3.2.3.6戊二醛含量 应小于0.01g/L（附录??） 3.2.4效价测定 3.2.4.1 无细胞百日咳疫苗 按“吸附百白破联合疫苗”中附录2进行。以适宜的稀释倍数稀释至第一个免疫剂量， 再按5倍系列稀释。免疫时间为21天。每1次人用剂量的免疫效价应不低于4.0IU；95% 可信限的低限应不低于2.0IU。如达不到上述要求时可进行复试，但所有的有效试验结果必 须以几何平均值（如用概率分析法时，应用加权几何平均）来计算。达到上述要求即判为合 格。 3.2.4.2白喉疫苗 每1次人用剂量中白喉类毒素的免疫效价应不低于30IU（附录? C）。 3.2.4.3破伤风疫苗 每1次人用剂量中破伤风类毒素的免疫效价应不低于40IU（附录? B）。 3.2.5无菌检查 依法检查（附录? A），应符合规定。 3.2.6特异性毒性检查 3.2.6.1无细胞百日咳疫苗 按本品种附录中2.5项进行。 3.2.6.2白喉、破伤风疫苗 用体重250～350g豚鼠，每批制品不少于4只，每只腹部皮下注射2.5ml，分两侧注 射，每侧1.25ml，观察30天。注射部位可有浸润，经5～10天变成硬结，可能30 天不完 全吸收。在第10天、第20天、第30天称体重，到期体重比注射前增加，局部无化脓、无 坏死、无破伤风症状及无晚期麻痹症者为合格。 3.2.7毒性逆转试验 每批供试品置37? 4周，按本品种附录中2.6项进行。 生产之日起有效期为2年，自百日咳原液脱毒之日起总于2～8?避光保存和运输。自有效期不得超过3年。 无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求 应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。 本品系由百日咳杆菌的培养物或其上清液，经硫酸铵盐析和密度梯度离心法提取百日 咳毒素（PT）和丝状血凝素（FHA）等有效组分，经脱毒制成。用于制备吸附无细胞百白破 联合疫苗。 1.1菌种 生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 1.1.1名称及来源 采用百日咳?相CS菌株或其他适宜菌株。 1.1.2种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 1.1.3种子批的传代 工作种子批菌种启开后传代不应超过10代用于生产。 1.1.4种子批菌种的检定 1.1.4.1培养特性 于包-姜（Bordet-Gengou）培养基或其他适宜培养基上培养，各菌株应具有典型的形 态及生化特性。 并同时1.1.4.2血清学试验 进行Fim2,Fim3的检测。 取经35～37?培养40～48小时的菌苔，混悬于生理氯化钠溶液或PBS内，制成适宜1.1.4.3皮肤坏死试验 浓度的菌悬液，与?相参考血清做定量凝集反应，凝集效价应达到血清原效价之半。 取经35～37?培养40～48小时的菌苔，混悬于PBS内，并稀释成不同浓度的菌液； 取家兔或豚鼠至少2只，分别用每一稀释度的菌液皮内注射0.1ml，经72小时观察注射部 7位的皮肤反应，如其中1只家兔或豚鼠在注射含菌4.0×10以下稀释度的部位出现出血性坏死者，为阳性反应，判为合格。 1.1.4.4毒力试验 用体重16～18g的小鼠至少3组，每组至少10只，在麻醉状态下从鼻腔滴入经培养 20～24小时、以PBS稀释的菌液0.05ml，观察14天，记录小鼠生死情况，按Reed-Muench 8法计算LD，1LD的菌数应不高于1.2×10。 5050 1.1.4.5效价测定 按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。 1.1.5菌种保存 种子批应冻干保存于8?以下。 1.2原液 1.2.1生产用种子 将工作种子批菌种启开后，接种于改良包-姜培养基或活性炭半综合培养基或其他适宜培养基上，于35～37?培养不超过72小时，以后各代不超过48小时。传代菌种保存不得超过14天，工作种子批启开后用于生产时不应超过10代。 1.2.2生产用培养基 应选用S-S（Stainer-Scholte）培养基或其他适宜培养基。 1.2.3培养 可采用静置培养法或发酵罐培养法，培养过程应取样做纯菌检查。 1.2.4收获和杀菌 培养物于对数生长期后期或静止期前期收获。在培养物中加入硫柳汞杀菌。 1.2.5纯化 采用硫酸铵盐析和蔗糖密度梯度离心去除内毒素，收集PT、FHA有效组分。 1.2.6蛋白氮含量测定 依法测定（附录? B第二法）。 1.2.7纯度测定 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳或SDSPT和FHA两种组分，且批间比例应保持一致。PT和FHA等有效组分应不低于总蛋白含量的85% 。 1.2.8脱毒和匀化 采用甲醛溶液或戊二醛溶液脱毒，然后用适宜方法除去脱毒剂，再经超声波匀化处理 即为原液。 2.1染色镜检 取供试品的沉淀物，涂片染色镜检，不应有百日咳杆菌和其他细菌。 2.2效价测定 按“吸附百白破联合疫苗”附录2 进行。即先将原液稀释至成品的浓度后，以适宜的 稀释倍数为第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释，免疫21天后攻击。 2.3无菌检查 依法检查（附录? A），应符合规定。 2.4不耐热毒素试验 用生理氯化钠溶液将供试品稀释至半成品浓度的2倍，用48～72小时龄的乳鼠至少4只，每只皮内注射0.025ml，或用体重2.5kg的家兔至少2只，每只皮内注射0.1ml，观察4日，受试动物不得出现不耐热毒素引起的任何局部反应。 2.5特异性毒性检查 毒性参考品按照每批标示进行稀释，将供试品稀释至与成品相同浓度。用体重14～16g NIH小鼠（雌性或雌雄各半），毒性参考品的每一稀释度和供试品各用一组，每组至少10只。每只小鼠腹腔注射0.5ml，分别进行2.5.1～2.5.3项试验。 2.5.1小鼠体重减轻试验 于注射前和注射后16～18小时分别称取小鼠体重，试验结果经统计学方法处理后， 注射供试品的小鼠体重减轻毒性的活性应不高于10 BWDU/ml。 2.5.2小鼠白细胞增多试验 于注射后3日分别取小鼠末梢血进行白细胞计数。试验结果经统计学方法处理后，注 射供试品的小鼠白细胞增多毒性的活性应不高于0.5LPU/ml。 2.5.3小鼠组胺致敏试验 于注射后4日，每只小鼠腹腔注射0.5ml溶液（含二盐酸组胺4mg或二磷酸组胺2mg），30分钟后分别测小鼠肛温。试验结果经统计学方法处理后，供试品的小鼠组胺致敏毒性的 活性应不高于0.8 HSU/ml，且无动物死亡。 2.6毒性逆转试验 每批供试品置37? 4周，然后按2.5.3项进行试验。 2.7热原检查 用生理氯化钠溶液将供试品稀释成半成品浓度的1/50，依法检查（附录? D），应符合规定。注射剂量按家兔体重每1kg注射1ml。 于2～8?避光保存和运输。原液自脱毒之日起总有效期为3年。 通用名：吸附无细胞百白破联合疫苗 英文名称： Diphtheria, Tetanus and Acellular Pertussis Combined Vaccine Adsorbed 汉语拼音：Xifu Wuxibao Baibaipo Lianhe Yimiao 本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加氢氧化铝佐 剂制成，为乳白色悬液，放置后佐剂下沉，摇动后即成均匀悬液，含防腐剂。 辅料：按批准的执行。 3个月～6周岁儿童。 接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防百日咳、白喉、破伤风。 每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含百日咳效价不低于4.0IU；白喉效价不低于30IU；破伤风效价不低于40IU（豚鼠法）。 (1) 臀部或上臂外侧三角肌肌内注射。 (2)基础免疫：共3针，自3月龄开始至12月龄，每针间隔4～6周，每次注射0.5ml。 加强免疫通常在基础免疫后18～24月龄内进行，注射剂量为0.5ml。 注射本品一般无不良反应，有的接种部位有轻度红晕、痒感或有低热，一般不须特殊处理， 即自行消退，如有严重反应及时诊治。 ? 注射部位可出现红肿、疼痛、发痒。 全身性反应可有低热、哭闹等，一般不需处理即可自行缓解。 ? 烦躁、厌食、呕吐、精神不振等。 ? 短暂发高热反应：应给予物理及药物方法进行对症处理，以防高热惊厥。 ? 局部硬结，1～2月即可吸收。严重者可伴有淋巴管或淋巴结炎，应及时就诊。 ? 局部无菌性化脓: 一般要用注射器反复抽出脓液，严重时（破溃）需扩创清除坏死组? 织，病程较长，最后可吸收愈合。 ? 过敏性皮疹：个别接种者在接种疫苗后72小时内出现荨麻疹病例，出现反应时，应 及时就诊，给予抗过敏治疗。 ? 过敏性休克：一般在注射疫苗后1小时内发生。应及时抢救，注射肾上腺素进行治疗。 ? 过敏性紫癜：极个别接种者可出现过敏性紫癜病例，出现过敏性紫癜反应时应及时就 诊，应用皮质固醇类药物给予抗过敏规范治疗，治疗不当或不及时有可能并发紫癜性肾炎。 ? 血管神经性水肿。 ? 神经系统反应，临床表现为抽搐、痉挛、惊厥、嗜睡及异常哭叫等症状，神经炎及神 经根炎，变态性脑脊髓膜炎。 (1) 有癫痫、神经系统疾病及惊厥史者； (2) 患急性传染病(包括恢复期)及发热者，暂缓注射； （3）有过敏史者。 ? 已知对该疫苗的任何组分过敏者。 患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。 ? 对脑病、未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。 ? 注射百日咳、白喉、破伤风类疫苗后发生神经系统反应者。 ? ? 以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者。 ? 使用时应充分摇匀，如出现摇不散之凝块、异物、疫苗曾经冻结、疫苗瓶有裂纹或标签 不清者，均不得使用。 ? 疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2～8?，并于1小时内用完，剩余均应废弃。 ? 注射后局部可能有硬结，1～2个月即可逐步吸收，注射第2针时应换另侧部位。 ? 接种本品和注射免疫球蛋白，应至少间隔1个月以上，以免影响免疫效果。 ? 应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应 在现场休息片刻观察至少30分钟。 ? 注射第1针后出现高热、惊厥等异常情况者，不再注射第2针。 ? 于2~8?避光保存和运输。 2年24个月 企业名称： 生产地址： 邮政编码： 电话号码： 传真号码： 网址： 本法系采用酶联免疫法测定无细胞百日咳疫苗有效组分百日咳毒素（PT）和丝状血凝素（FHA）。 （1）包被液（pH9.6 碳酸盐缓冲液）称取碳酸钠1.59g，碳酸氢钠2.93g，加水溶解，定容至1000ml。 （2） 磷酸盐缓冲液（pH7.4）称取氯化钠 8.0g、氯化钾 0.20g、磷酸氢二钠 1.44g、磷酸二氢钾 0.24g，加水溶解并稀释成1000ml，121?灭菌15分钟。 （3）洗涤液（PBS-Tween20） 取聚山梨酯20(Tween20) 0.5ml，加磷酸盐缓冲液至1000ml。 （4）封闭液 称取牛血清白蛋白 1.0g，加洗涤液溶解，并稀释至100ml。 （5）稀释液 称取牛血清白蛋白 0.5g，加洗涤液溶解，并稀释至100ml。 （6）底物缓冲液（0.005mol/L醋酸钠-枸橼酸缓冲液） 称取醋酸钠 0.68g、枸橼酸（CHO?HO）1.05g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至3.6。 6872 （7）底物液A 称取3, 3’,5, 5’-四甲基联苯胺（TMB）0.08g，加二甲基亚砜 40ml溶解，加甲醇 60ml，混匀，加底物缓冲液100ml，避光搅拌 2小时至完全溶解，室温静置 4小时后使用。 （8）底物液B 取 1.5%过氧化氢溶液 3.2ml，加底物缓冲液至 1000ml。 （9）底物液 取底物液A和底物液B等体积混匀，临用现配。 （10）终止液 2mol/L硫酸溶液。 用纯化的PT或FHA参考品作阳性对照（2-8 ,g/ml），用PBS或其他适宜的对照品作阴性对照。 取疫苗供试品适量，加枸橼酸纳或其他适宜的试剂进行疫苗解吸 附处理。 分别取抗PT或FHA抗体（2-5 ,g/ml）适量，以100μl/孔加至酶标板内，用封口膜封好，2~8? 放置16~20小时；用洗涤液洗板3次；用洗涤液制备的1%牛血清白蛋白溶液作为封闭液，以200μl/孔加至酶标板内，用封口膜封好，37?放置1小时；将封闭好的酶标板用洗涤液洗板3次；以100μl/孔加入PT或FHA阳性对照和供试品溶液，37?放置1小时后，洗板6次，稀释辣根过氧化物酶标记的抗PT抗体或抗FHA至适当浓度，以100μl/孔加至酶标板内，用封口膜封好，37?放置1小时；洗板6次；以100μl/孔加入底物液，室温避光放置5~15分钟；以50μl/孔加入终止液终止反应。用酶标仪在适宜波长处测定吸光度。 Cutoff值为阴性对照吸光度的2.1倍。 阳性对照和供试品溶液的吸光度大于Cutoff值者为阳性。