清热解毒软胶囊抑菌抗炎作用实验研究

清热解毒软胶囊抑菌抗炎作用实验研究 清热解毒软胶囊抑菌抗炎作用实验研究 时珍国医国药2009年第20卷第3期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.3 卵巢和子宫内膜,但许多疾病如肿瘤,可出现持续的,不可控制的 血管生成.新血管生成是癌肿生长和扩散的必要条件,抗血管生 成可能是限制肿瘤生长和防止转移的良策.利用血管生成抑制 剂特异性地抑制血管内皮细胞的增生和鸡胚绒毛尿囊膜血管生 成的活性,可抑制肿瘤的生长和转移,开展抑制肿瘤血管的药物 筛选研究是抗肿瘤研究的热点. 目前国内外临床不乏有效的抗血管生成药物,但大多有效 药物在抑制血管生成的同时存在不可抵抗的副作用,如出/凝血 异常,加重心血管疾病,影响成年妇女卵泡发育和正常的月经周 期等J,因而限制了其临床应用.鉴于天然药物毒副作用小,人 们开始从天然药物中寻找有效的血管生成抑制剂. 本实验中以血管内皮细胞SRB实验和鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)实验为模型,从中药中筛选得到王不留行水提取具有较 强抑制血管生成的作用,进而采用树脂吸附,萃取,反相中压层析 等手段对王不留行进行系统提取分离纯化,得到王不留行环肽 A,E,二者均有较强的抑制HMEC增殖和鸡胚绒毛尿囊膜的血 管生成的生物活性,其中环肽E的作用强于环肽A,这是以往文 献未见报道的.因此可以将王不留行环肽A,E作为血管生成抑 制剂的药用先导化合物来研究,具有临床开发利用的价值. 参考文献: [1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海人民出版社, 1997:311. [2]SkehanP,StorcngR,ScudieroD,eta1.Newcolorlmetriccytotoxicity assayforanticancer—drugscreening[J].JNatlCancerInst,1990,82 (13):1107. [3]张树成,吴志奎,王蕾,等.研究中药血管生成活性和作用的鸡 胚绒毛尿囊膜试验模型的应用[J].中国中医基础医学杂志, 1999,5(5):16. [4]MoritaH,YunSK,TakeyaK,eta1.Acyclicheptapeptidefromvac— carlaStgetalis,1996,42:439. [5]MoritaH,YnuSK,hokawaH,eta1.Conformationalanalysisofa cyclicHexapeptide,SegetalinAfromVactariaSeget~is1995,51 (21):5987. [6]EpsteinSE,KornowskiR,FuchsS,eta1.Angiogenesistherapy:a— midstthehype,theneglectedpotentialforserioussideeffects[J].Cir— culation.2001,104(1):115. 清热解毒软胶囊抑茵抗炎作用实验研究 郭芹,杨光义 (1.浙江医药高等专科学校,浙江宁波315000; 2.广州中医药大学中药学院,广东广州510006) 摘要:目的研究清热解毒软胶囊的抑菌,抗炎作用.方法呼吸道常见致病菌用肉汤稀释法测定清热解毒软胶囊最低 抑菌浓度(MIC);用蛋清诱发大鼠足肿胀,二甲苯诱发小鼠耳肿胀等急性炎症模型和大鼠棉球肉芽肿慢性炎症模型研究 抗炎作用.结果清热解毒软胶囊具有体外抗菌作用,对引起呼吸道感染的9种常见病原茵和致病菌均有不同程度的抑 制作用;清热解毒软胶囊具有抗炎作用,对二甲苯致小鼠耳廓肿胀,大鼠蛋清性足肿胀及大鼠棉球肉芽肿均有不同程度 的抑制作用.结论本研究结果提示清热解毒软胶囊具有抑菌,抗炎作用,为清热解毒软胶囊临床用于治疗流感,上呼吸 道感染,咽喉肿痛等症提供了实验参考依据. 关键词:清热解毒软胶囊;抑菌;抗炎 中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1008-0805(2009)03—0700-02 ExperimentalStudyonBacteriostasisandAnti—inflammatoryEffectsofQingRenJeDuJi- aoNang GUOQin,YANGGuang.yl (1.PharmacologicalDepartmentofZhejiangPharmacologicalCollege,Ningbo,Zhefiang315000,China;2. TraditionalChineseMedicalAcademyofGuangzhouUniversityofTCM,Guangzhou,Guangdong510006,China) Abstract:ObjectiveToobservethebacteriostasisandanti— inflammatoryeffectasofQingReJeDuJiaoNang.MethodsThetest checkerboarddilutionwasusedtoexaminetheMICof9kindsofcommonbacteria.Theanti— inflammatoryeffectwasobservedby auricularedemamodelinducedbydimethv1benzeneinmice.granulationinducedbycottonballinrats,metatarsusswellingmodel inducedbyeggwhiteinrats.ResultsQingReJeDuJiaoNanghadbacteriostasiseffectto9kindsoffamiliarbacteriacausingrespira— torysysteminfection.Furthermore,QingReJeDuJiaoNangsignificantlyinhibitedauricularedemainducedbydimethylbenzenein mice,granulationinducedbycottonballinrats,andmetatarsusswellinginducedbyeggwhiteinrats.ConclusionQingReJeDu— JiaoNanghadbacteriostasisandanti—inflammatoryeffect. Key word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 s:QingRenJeDuJiaoNang;Bacteriostasis;Anti—inflammation 中药复方制剂清热解毒软胶囊由石膏,金银花,玄参,地黄, 连翘,栀子,甜地丁,黄芩,龙胆,板蓝根,知母,麦冬等组成,具有 清热解毒功效,临床上主要应用于咽喉肿痛,感冒发热,上呼吸道 收稿日期:2008-01—14;修订日期:2008-06—1O 作者简介:郭芹(1974.),女(汉族),江西上高人,现任浙江医药高等专 科学校药学系讲师,学士学位,主要从事医药基础课程教学及相关研究 工作. ? 700? 感染等病,该方多年应用于临床,疗效明显.为了进一步为临床 提供安全有效的实验依据,对清热解毒软胶囊的抑菌,抗炎作用 进行了实验研究. 1材料 1.1药物清热解毒软胶囊,石家庄欧意药业有限公司,批号 20040045;利咽灵片,吉林省天兴堂药业有限公司,批号: 20050608;阿司匹林(桂林南药股份有限公司提供,批号: 070201);二甲苯和醋酸均为北京长海化工厂产品,分析纯. LISHIZHENMEDICINEANDMATER1AMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.3 时珍国医国药2009年第20卷第3期 1.2动物NIH系小鼠,合格证号:2007A004,质量18,22g;SD 系大鼠,合格证号:2007A003,质量180—220g,均由广东省医学 实验动物中心提供. 1.3细菌试验所用细菌菌种均来自北京卫生部生物制品研究 所.包括金黄色葡萄球菌(26l12—5),乙型溶血性链球菌 (32210),肺炎球菌(31001),甲型溶血性链球菌(322090,卡他 (38101),白喉杆菌(38101),大肠杆菌(44113—5),绿脓杆菌 (10211),白色念珠菌(98001). 2方法与结果 2.1体外抑菌作用本实验菌种选用9种有代表性的,主要 是呼吸道和消化道感染的常见病原菌和条件致病菌,用肉膏汤将 清热解毒软胶囊和利咽灵片配制成每毫升含生药量0.20,0.05, 0.025g……共10个药物浓度,每管总量1ml,流通蒸气灭菌.对 链球菌的试验尚需在灭菌药液中添加1%葡萄糖,对肺炎球菌和 白喉杆菌则另加10%兔血清,对白色念珠菌的试验应用沙氏培 养液稀释药液.空白对照为不含药物的培养基.每排药液的各 个浓度管及空白对照管分别加入1:2000的试验菌液(8h培养 物)0.1ml,37?培养18h观察结果.对白色念珠菌的实验则用 24h培养物,药液加菌液后培养36h观察结果.判定最小抑菌 浓度(MIC),MIC是指完全抑制试验菌种生长所含的最小药物浓 度.结果见表1.实验结果表明,清热解毒软胶囊对所试菌种, 包括引起呼吸道和}肖化道感染的常见致病菌和条件致病菌均有 很强的抗菌作用,对各菌的最小抑菌浓度(MIC)介于3.05X10 , 4.77×10g/ml之间,其中对白色念珠菌没有抑制作用. 表1清热解毒软胶囊的抑菌作用g?ml 2.2抗炎作用 2.2.1对蛋清所致大鼠足肿胀的影响sD大鼠60只,雌雄各 半,体重为150,180g,随机分为空白组,阿司匹林组,利咽灵片 组,清热解毒软胶囊低,中,高剂量组.每组10只.给药1次/d, 连续3d.各组灌胃给药(10ml/kg体重),空白对照组给予等体 积生理盐水.实验前每鼠左后足踝关节处用记号笔作一清晰横 线,排水法测鼠足正常体积.末次给药1h后每鼠左后足跖皮下 注射100%鲜鸡蛋清0.05ml,分别于注射鲜鸡蛋清后1,2,3,4h 各测鼠足体积1次,计算鼠爪肿胀抑制百分率,结果见表2.实 验结果表明,清热解毒软胶囊高剂组可显着抑制1,2,3,4h的足 肿胀率(P<0.05或P<0.01);低,中剂组可显着抑制4h的足肿 胀率(P<0.01). 鼠爪肿胀抑制百分率(%)= 0%致炎前鼠爪体积…… 表2清热解毒软胶囊对大鼠蛋清性足肿胀的影响(?) 与空白组比较,P<0.05,一尸<0.01;n=10 2.2.2二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响NIH小鼠60只,体重 20,24g,雌雄各半,随机分为空白组,阿司匹林组,清热解毒软 胶囊低,中,高剂量组,利咽灵片组,每组10只.然后给药,1次/ d,连续3d.各组灌胃给药(20ml/kg体重),空白对照组给与等 体积生理盐水.末次给药1h后将二甲苯50l均匀滴于小鼠右 耳两面,左耳不涂作为对照.1.5h后将小鼠脱颈椎处死,用直径 8mm打孔器分别在左,右耳同一部位打下圆耳片,秤重,以左,右 耳片重量之差作为肿胀度.结果见表3.实验结果表明,清热解 毒中,高剂量均可显着抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P< 0.01). 表3清热解毒软胶囊对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(4-s) 与空白组比较,一P<0.01;n=l0 2.2.3对大鼠棉球肉芽肿的影响sD雄性大鼠60只,体重180 , 220g,随机分为对照组,阿司匹林组,利咽灵片组,清热解毒软 胶囊低,中,高剂量组.乙醚浅麻醉,剪除大鼠胸毛,碘酒消毒,切 开胸部皮肤,从切口向两前肢腋下分别塞入25mg无菌棉球各一 个(棉球经高压灭菌,并以青霉素和链霉素混合液浸泡后植入), 缝合皮肤.术后1h灌胃给药,正常对照组灌服等容积蒸馏水,1 次/d,连续7d,于第8日颈椎脱臼处死大鼠,剥离棉球肉芽组织, 于90?烘箱中干燥1h,于电子天平精密称重(1/1000g),将称 得的肉芽组织重量减去棉球原重即得肉芽肿重量.结果见表4. 实验结果表明,清热解毒软胶囊中,高剂量均可显着抑制大鼠棉 球肉芽肿形成(P<0.05或P<0.01). 表4清热解毒软胶囊对大鼠棉球肉芽肿的作用(i?s) 3讨论 清热解毒软胶囊具有清热解毒之功效,具有抑菌,抗炎作用. 临床上主要应用于咽喉肿痛,感冒发热,上呼吸道感染等.本研 ? 701? 时珍国医国药2009年第20卷第3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.3 究结果表明清热解毒软胶囊有明显的抑菌作用,在体外抑菌实验 中表现出良好的抑菌效果,对各菌的最小抑菌浓度(MIC)介于 3.05×10,,4.77×10g/ml之间.此外,清热解毒软胶囊对二 甲苯致小鼠耳廓肿胀,大鼠蛋清性足肿胀及大鼠棉球肉芽肿均有 不同程度的抑制作用,对急性,慢性炎症都有较好的对抗作用,且 中高剂量组呈现明显的量效关系. 参考文献: [1]池细弟,高世华.肉汤稀释法测偶发分支杆菌的MIC[J].中华医院 感染学杂志,2002,12(9):716. [2]姚蕾,陈琼,胡昌勤,等.64株大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素 的耐药表型与钝化酶基因型的分析[J].中华微生物学和免疫学杂 志,2005,25(9):727. [3]陈奇.中药药理实验方法[M].北京:人民卫生出版,2006:843. [4]徐叔云,卞如濂,陈修.约理实验方法学[M].北京:人民卫生出 版社,2001:562. [5]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社, 2006:183. 狐尾葛的化学成分研究 张桢,刘光明,肖怀,罗建蓉,何红平,郝小江 (1.大理学院药学院,云南大理671000; 2.中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,云南昆明650204) 摘要:目的研究狐尾葛的化学成分,寻找活性成分.方法运用多种柱色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数 据鉴定了化合物的化学结构.结果从中分离鉴定了8个化合物:?3B[(0一p—D—glucopyranosy1)oxy]一olean一12一 ene一2B—tetraol;(~)androseptosideA;?La(一)3R,4Rhydroxy一4(cis)melleine3;?3,4一二羟基苯甲醛(3,4一di— hydro—amando1);?4一羟基苯甲酸(P—Hydroxybenzoicacid);?二十八酸(octacosanoic);?胡萝卜串(daucostero1);?B 一 谷甾醇(B—sitostero1).结论以上化合物是从该植物中首次分离得到. 关键词:狐尾葛;化学成分;三萜苷 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008-0805(2009)03-0702-02 StudiesonChemicalConstituentsofPuerariaalopecuroides ZHANGZhen,LIUGuang-ming,XIAOHuai,LUOJian—rong,HEHong— ping,HAOXiao—jiang (1.CollegeofPharmacologicalSciences,DaliUniversity,Dali671000,China;2.StateKeyLaboratoryofP— tochemistryandPlantResourceinsChina,KunmingInstituteofBotany,Kunming650204,China) Abstract:ObjectiveTostudythechemicalconstituentsfrompuerariaalopecuroideandlookforbioactivenaturalproducts. MethodsColumnchromatographytechniqueswereusedforseparationandpurificationofthecompounds.Theirstructureweree— lucidatedbymeansofspectralanalysisandphysio— chemicalproperties.ResultsEightcompoundswereisolatedfrompueraria alopecuroideandtheirstructureswereidentifiedas:3p[(0一p—D—glucopyranosy1)oxy] 一olean一12一ene一2p—tetraol; androseptosideA;La(一)3R,4Rhydroxy一4(cis)melleine3;3,4一dihydro—amandol;P —Hydroxybenzoicacid;octacosauo— ic;daucosterol;B— sitostero1.ConclusionAllthesecompoundswereisolatedfromthisplantforthefirsttime.. Keywords:Puerariaalopecuroide;Chemicalconstituents;Triterpenoidsaponins 葛属Pueraria,蝶形花科Papilionaceae…,约20种以上,分布 于亚洲热带地区至日本,我国有12种,广布于各省.蝶形花科葛 属狐尾葛Palopecuroides,俗名:毛花葛藤,葛根藤(元江),葛藤 (允景洪),分布于云南,贵州.生于河边疏林下和盆地.根,花: 味微甘,辛,性平,有升阳解肌,透疹止泻,除烦止渴的功能.用于 伤寒,烦热消渴,痢疾,高血压病,心绞痛,耳聋,滇南的傣族用狐 尾葛的茎皮作药用部位. 笔者对采集于云南西双版纳地区的狐尾葛Puerariaalopecu— roides进行了化学成分研究,从中分离鉴定了8个化合物,通过理 化常数的测定,各种光谱数据的分析,确定它们分别为:?3p[(0 一 B—D—glucopyranosy1)oxy]一olean一12一ene一2p—tetraol;? 收稿日期:2008-02-10;修订日期:2008-08-03 作者简介:张桢(1976一),男(彝族),云南风庆人,现为大理学院药学院 讲师,硕士学位,主要从事天然药物化学成分的分离鉴定,教学.Y-作. 通讯作者简介:郝小江(1951一),男(汉族),重庆人,现任中国科学院昆 明植物研究所研究员,博士学位,主要从事药用植物化学,天然有机合成, 药物合成的研究工作. ? 702? androseptosideA;?La(一)3R;4Rhydroxy一4(cis)melleine3; ?3,4一二羟基苯甲醛;?4一羟基苯甲酸;?二十八酸;?胡萝 卜苷;?B一谷甾醇. 1仪器与材料 ESI—MS和FAB—MS用VGAutoSpec一3000型质谱仪测 定.NMR用BrukerAM一400和BrukerDRX一500超导核磁共振 仪测定,TMS为内标.薄层层析板和各种规格的柱层析硅胶均 来自于青岛海洋化工厂,C反相硅胶(60lxm)来自于德国的 MerkDarmstadt公司,sephadexLH一20来自于瑞士的Amershan Biosciences公司. 植物采自云南西双版纳,植物标本由中科院昆明植物研究所 陶德定研究员鉴定. 2方法与结果 2.1提取与分离狐尾葛的干燥藤茎11kg,粉碎后经95%乙醇 回流提取3次,合并提取液减压回收溶剂得浸膏,将浓缩后的提 取物加适量的水悬浮,用醋酸乙酯萃取,得到醋酸乙酯萃取物 (210g),醋酸乙酯萃取物用硅胶柱层析分离,用氯仿一甲醇梯度 洗脱(9:1,8:2,7:3,每一梯度5L),最后用甲醇洗脱,再经