电子垃圾污染区宫内镉暴露对胎儿生长发育及胎盘瘦素和瘦素受体表达的影响（可编辑）

电子垃圾污染区宫内镉暴露对胎儿生长发育及胎盘瘦素和瘦素受体表达的影响（可编辑） 电子垃圾污染区宫内镉暴露对胎儿生长发育及胎盘瘦 素和瘦素受体表达的影响 硕 士 学 位 论 文 电 子 垃圾 污 染区 宫 内 镉 暴 露对 胎 儿生 长 发育 及 胎盘 瘦 题 目 素 和 瘦素 受 体表 达 的影 响 Effects of In utero Exposure to cadmium on Fetus Development and 英 文 题目Placental leptin and leptin receptor Levels in an E-waste Recycling Area 姓名 邱少汕学号 10920031 所 在 学 院 汕头大学医学院 导师姓名 徐锡金专业免疫学 入 学 日 期 2009-09 答辩日期2012-05. 学位论文 原创性声 明 本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成 果。 论文中除了特别加 以标注和致谢的地方外, 不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。 对本文 的研究做出贡献的个人和集体, 均已在论文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的 法律责任由本人承担。 作者签名: 日期:年 月 日 学位论文 使用 授权 个人房产授权委托书公司各类授权委托书模版医师授权办法餐饮分店授权书产品代理授权书范本 声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档, 允许论文被查阅和借阅; 学校 可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索, 可以采用影印、 缩印或其它 复制手段保存和汇编论文; 学校可以向国家有关部 门或机构送交论文并授权其保存、 借阅 或上网公布本学位论文的全部或部分内容。 对于保密的论文, 按照保密的有关规定和程序 处理。 作者签名:导师签名:日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 汕头大学医学院硕士学位论文 中文摘要 研究 背景 广 东 贵 屿 镇 是 “ 世 界 电 子 垃 圾 终 点 站 ” 之 一 , 有 着 二 十 多 年 的 作 坊 式 电 子 垃 圾拆解历史。 长期不当的电子垃圾处理方式, 给当地的环境造成了严重的污染, 其中包括 有毒重金属暴露, 导致该地区居民体内相应重金属含量处于较高水平。 前期调查显示该镇 新生儿 胎盘中镉负荷远高于其它地区。 胎儿组织器官发育对有毒有害物质极为敏感, 有毒 金属镉的暴露影响了胎儿正常的生长发育。 瘦素由胎盘滋养层细胞分泌, 瘦素结合瘦素受 体调节能量代谢, 与胎儿的生长发育密切相关。我们检测胎盘中瘦素和瘦素受体的表达, 胎盘中镉的水平, 并调查新生儿生长发育指标, 探究 胎盘瘦素和瘦素受体的表达水平能否 作为镉暴露对胎儿生长发育影响的生物标志物。 目的 检 测 胎 盘 镉 水 平 、 胎 盘 瘦 素 和 瘦 素 受 体 的 表 达 量 , 探 讨 这 些 相 关 因 素 与 新 生 儿 生 长 发育的关系, 为污染区孕妇提供健康保健, 评价不科学的电子垃圾回收处理方式所导致 的环境污染对新生儿生长发育的影响。 材料与方法 2010 年 9 月至 2011 年 9 月, 对 261 名健康孕妇进行了调查访问, 其中 192 名来自于贵屿镇,59 名来自汕头市濠江区作为对照,并在分娩后采集了胎盘组织。此项 研究经过了汕头大学医学院伦理委员会同意, 并与每位受试者签订了知情同意书。 通过问 卷调查, 收集了一般性人口学特征、 孕妇的健康状况、 受教育程度、 居住条件, 以及新生 儿生长发育指标。 采用石墨炉原子吸收光谱法, 检测胎盘组织中镉的水平。 用 RT-PCR 方 法检测胎盘中瘦素和瘦素受体的表达水平。 结果 1. 暴露组新生儿体重小于对照组, 暴露组新生儿身长大于对照组, 暴露组新生儿胎龄大 于 对 照 组 , 且 均 有 统 计 学 意 义 (P <0.01 ) 。 按 照 性 别 分 组 , 暴 露 组 男 性 新 生 儿 的 身 长和胎龄均比对照组的大, 暴露组女性新生儿的体重比对照组小, 身长和胎龄均比对 照组的大,且均有统计学意义。 2. 暴 露 组 新 生 儿 胎 盘 隔 水 平 中 位 数 为 96.6ng/g , 对 照 组 新 生 儿 胎 盘 隔 水 平 中 位 数 为 20.9ng/g , 暴露组新生儿胎盘隔水平明显比对照组高 (Z-11.406, P0.01 ) 。 按照性别 分组, 暴露组男性新生儿胎盘隔水平中位数为 99.8ng/g , 对照组男性新生儿胎盘隔水 平中位数为 21.3ng/g ,暴露组男性新生儿胎盘隔水平明显比对照组高(Z-8.276, I 汕头大学医学院硕 士学位论文 P0.01 ) ; 暴露组女性新生儿胎盘隔水平中位数为 93.6ng/g , 对照组 女性新生儿胎盘 隔水平中位数为 19.7ng/g , 暴露组女性新生儿胎盘隔水平明显比对照组高 (Z-7.779, P0.01 )。 3. 随着胎盘镉水平的增加, 新生儿体重具有显著的下降趋势 (P0.01 ) ; 随着胎盘镉水 平的增加, 新生儿身长和胎龄具有显著的上升趋势 (P0.01 ) 。 产妇 住所是否同时为 工 作场所、怀孕期间的厨房燃料和豆乳制品的消耗都与胎盘镉有关。 4. 2009 年本课题组研究的胎盘镉中位数为 108.8ng/g ,2010 年本课题组研究的胎盘镉中 位数为 96.6ng/g ,2010 年胎盘镉水平有下降的趋势。 5. 暴露 组新生儿胎盘中 Ob 的 mRNA 表达水平高于对照组 (P0.05 ) ; 胎盘中 Ob-R 的 mRNA 表 达 水 平 显 著 高 于 对 照 组 (P0.05 )。 按 照 性 别 分 组 , 暴 露 组 女性 新 生 儿 胎 盘中 Ob 的 mRNA 表 达水平高于对照组(P0.05 ); 暴露组女性 新生儿胎盘中 Ob-R 的 mRNA 表达水平高于对照组(P0.05 )。 6. 胎盘中瘦素和瘦素受体表达呈正相关关系(Rs0.884 ,P0.01)。瘦素的表达与 新 生 儿 出 生 身 长 和 体 重 呈 正 相 关 关 系 (Rs0.234 ,P0.01 ;Rs0.277 ,P0.01 );瘦素受 体的表达与新生儿出生身长和体重呈正相关关系 (Rs0.222 ,P0.01 ;Rs0.229 , P0.01 )。按照性别分组,男性新生儿胎盘中瘦素表达与出生身长和体重呈正相关 (Rs0.234 ,P0.05 ;Rs0.305 ,P0.01 ) , 瘦 素 受 体 表 达 与 出 生 身 长 和 体 重 呈 正 相 关(Rs0.263 ,P0.01 ;Rs0.302 ,P0.01 ) ; 女 性 新 生 儿 胎 盘 中 瘦 素 表 达 与 出 生 身 长和体重呈正相关(Rs0.249 ,P0.05;Rs0.145 ,P0.05)。 7. 胎盘中镉水平都与胎盘中瘦素和瘦素受体表达水平呈正相关关系 (Rs0.228 ,P0.01; Rs0.218 ,P0.01),按照性别分组,女性新生儿胎盘中镉水平都与胎盘中瘦素 和 瘦 素受体表达水平呈正相关关系(Rs0.325 ,P0.01;Rs0.342 ,P0.01)。 结论 贵屿当 地不规范的电子垃圾拆解 已经造成了严重的镉污染, 孕妇妊娠期 镉的暴露可能 导致胎盘中 瘦素和瘦素受体的 mRNA 表达水 平发生改变,从而影响胎儿的生长发育 。 关键词 电子垃圾; 镉;瘦素;瘦素受体 ;生长发育 II 汕头大学医学院硕士学位论文 AbstractBackground: Guiyu in Southern China, is one of the biggest destinations of e-waste in the world and has nearly 20 years of disposal and recycling history. These activities caused serious pollution to the local environment, including toxic heavy metals pollution, lead to the residents of the area have a high level of heavy metal. The previously investigation shows the neonatal placental cadmium of Guiyu was much higher than other regions. The development of fetal organ is very sensitive to poisonous and harmful substances; cadmium exposure affected the normal growth and development of the fetus. Leptin is secreted by the placental trophoblastic cells, leptin combined with leptin receptors regulate energy metabolism, and closely related with fetal growth and development. We test the expression of placental leptin and leptin receptor, the level of cadmium Cd in the placenta, and neonatal growth index survey, explore the placental leptin and leptin receptor expression whether can be used as the biological markers of the fetus development exposure to cadmium Objective: To determine the expression of placental leptin and leptin receptor, the level of cadmium Cd in the placenta, discusses the relationship among related factors and the growth of the newborn ,Offers the health care to the pregnant women of pollution area, evaluation the effect of electronic waste recycling on newborn growth and development Material and method: We enrolled 261 healthy pregnant women as participants 192 from Guiyu and 59 from Haojiang, who voluntarily donated placenta after birth. The study protocol was approved by the Human Ethical Committee of Shantou University Medical College, ChinaAll participants gave their written informed consent after receiving detailed explanations of the study and potential consequences prior to enrollment. Questionnaires were addressed to collect information on general demographic and health indicators. Placenta were collected shortly after birth from the pregnant women from Guiyu and Haojiang between September in 2010 and September in 2011. The concentrations of cadmium in placenta were determined by graphite furnace atomic absorption spectrometry GFAAS. The expression of leptin and leptin receptor in placenta were determined by real time PCR Result:1. The birth weight of case group were smaller than the control group, The birth length of case III 汕头大学医学院硕 士学位论文 group were greater than the control group, The gestational age of case group were greater than the control group P 0.01. Separated by gender, the male birth length and gestational age of case group were greater than the control group, the female birth weight of case group were smaller than the control group, the female birth length and gestational age of case group were greater than the control group P 0.012. The median of placental cadmium level in Guiyu group was 96.6 ng/g, The median of placental cadmium level in Control group was 20.9 ng/g, respectively, The placental cadmium level of Guiyu was obviously higher than the control group Z 11.406, P 0.01. Separated by gender, The median of male placental cadmium level in Guiyu group was 99.8ng/g, The median of male placental cadmium level in control group was 21.3ng/g, the male placental cadmium level in Guiyu group was higher than the control group. Z 8.276, P 0.01; The median of female placental cadmium level in Guiyu group was 93.6ng/g, The median of female placental cadmium level in control group was 19.7ng/g, the female placental cadmium level in Guiyu group was higher than the control group. Z 7.779, P 0.01 3. The birth weight has significant decline with the increase of the placental cadmium levels P 0.01; The gestational age and birth length has significant increase with the increase of the placental cadmium levels P 0.01. The placental cadmium level related with whether the house was used as workshop or not , the type of fuel for cooking and milk products consumption during pregnancy 4. The median of placental cadmium level was 108.8 ng/g in 2009, however, the median of placental cadmium level was 96.6 ng/g in 2010 , compared with 2009, the placental cadmium level in Guiyu has decreased 5. The Ob mRNA expression level in placenta of Guiyu was higher than those in the control group P0.05; The Ob-R mRNA expression level in placenta of Guiyu was higher than those in the control group P0.05; Separated by gender, The Ob mRNA expression level in female placenta of Guiyu was higher than those in the control group P0.05; The Ob-R mRNA expression level in female placenta of Guiyu was higher than those in the control group P0.05 6. The expression of leptin in placenta are positively related with the expression of leptin receptor in placenta Rs0.884, P0.01. The expression of leptin in placenta are positively IV 汕头大学医学院硕士学位论文 related with birth weight and birth height Rs 0.234, P0.01; Rs0.277, P0.01; The expression of leptin receptor in placenta are positively related with birth weight and birth height Rs0.222, P0.01; Rs 0.229, P0.01. Separated by gender, The expression of leptin in placenta are positively related with birth weight and birth height in male Rs0.234, P0.05; Rs0.305, P0.01, The expression of leptin receptor in placenta are positively related with birth weight and birth height in male Rs0.263, P0.01; Rs0.302, P0.01; The expression of leptin in placenta are positively related with birth weight and birth height in female Rs0.249, P0.05; Rs0.145, P0.05 7. The placental cadmium level were positively related with the expression of leptin and leptin receptor in placenta Rs0.228, P0.01; Rs0.218, P0.01, separated by gender, the placental cadmium level were positively related with the expression of leptin and leptin receptor in placenta in female Rs0.325, P0.01; Rs0.342, P0.01 Conclusion: Abnormal electronic waste recycling activities has cause serious cadmium pollution exposure to cadmium during pregnancy influences the expression of leptin and leptin receptor mRNA level in placenta, which may indirectly affect fetus growth and developmentKey Words: E-waste; Cadmium; leptin; leptin receptor; growth development V 汕头大学医学院硕 士学位论文 英文缩写词缩略语 英文全称 中文全称 e-waste Electronic waste 电子垃圾 Cd Cadmium 隔 PCCd Placental cadmiuim 胎盘隔 GFAAS graphite furnace atomic absorption spectrometry 石墨炉原子吸收光谱分析法 ng/g nanograms per gram 纳克每克VI 汕头大学医学院硕士学位论文 目录 中文摘要. I 英文摘要III 英文缩写词 VI 目录VII 前言1 第 1 章 贵屿电子垃圾拆解区新生儿胎盘镉暴露水平分析 3 1.1 引言. 3 1.2 材料与方法3 1.2.1 研究对象. 3 1.2.2 胎盘的采集方法 3 1.2.3 仪器及试剂3 1.2.4 器材去离子化处理4 1.2.5 试剂的配制4 1.2.6 胎盘的前处理. 4 1.2.7 胎盘镉检测步骤 5 1.2.8 数据统计 6 1.3 结果. 6 1.3.1 暴露组与对照组新生儿生长指标一般情况. 6 1.3.2 暴露组与对照组新生儿胎盘镉水平比较8 1.3.3 新生儿胎盘镉水平与出生体 重、身长和胎龄的关系. 10 1.3.4 新生儿胎盘镉水平的相关因素. 12 1.3.5 不同年份贵屿新生儿胎盘镉水平比较. 13 1.4 讨论14 1.4.1 新生儿胎盘镉水平及其与生长发育指标的关系 14 1.4.2 新生儿胎盘镉水平及其相关因素 15 1.4.3 不同年份贵屿新生儿胎盘镉变化趋势. 15 1.5 本章小结. 16 第 2 章 电子垃圾拆解区镉宫内暴露对胎盘瘦素和瘦素受体表达的影响. 17 2.1 引言17 2.2 材料与方法 17 2.2.1 问卷调查的收集18 2.2.2 胎盘组织采集18 2.2.3 试剂及仪器 18 2.2.4 PCR 试验前的准备. 19 2.2.5 胎盘组织 RNA 提取 20 2.2.6 逆转录 cDNA. 21 2.2.7 实时定量 PCR RT-PCR22 2.2.8 数据处理及统计分析23 2.3 结果23 2.3.1 Ob 、Ob-R 和 β-actin 实时定量 PCR 结果图 23 2.3.2 PCR 产物电泳结果 :24 VII 汕头大学医学院硕 士学位论文 2.3.3 暴露组和对照组中胎盘Ob 和 Ob-R 的 mRNA 表达水平. 26 2.3.4 胎盘中Ob 及Ob-R 表达水平与新生儿出生相关指标分析. 27 2.3.5 胎盘中 Ob 及 Ob-R 表达水平与胎盘镉水平相关分析. 29 2.4 讨论30 2.4.1 胎盘中 Ob 及 Ob-R 表达水平与新生儿生长发育指标的关系. 30 2.4.2 胎盘中 Ob 及 Ob-R 表达水平与胎盘镉水平的关系32 2.5 本章小结. 32 参考文献. 33 瘦素的研究进展. 40 1 引言. 41 2 瘦素及其受体的结构和特征 41 2.1 瘦素41 2.2 瘦素受体 41 3 瘦素的主要生理功能. 42 3.1 瘦素与能量的关系42 3.2 瘦素与生殖的关系43 参考文献44 个人 简历 个人简历下载免费下载简历模版总经理简历下载资料员简历下载资料员简历下载 及发表论文 48 致 谢49 调 查 表 50 VIII 汕头大学医学院硕士学位论文 前言电子垃圾, 是指废弃的家用电器与电子产品及其元 (器) 件、 零 (部) 件和耗材, 包 括生产过程中产生的不合格产品及其零部件, 维修过程中产生的报废品及 废弃零部件, 消 费者废弃的电子用品等。 信息时代的到来, 伴随着电子工业的高速发展, 电子废弃物 已成 [1-2] 为世界上增长最快的垃圾 。 电子 垃圾是世界各 国增长最快、 对环境破坏最严重的污染源。 我国不仅自身每年产生大量的电子垃圾, 而且还遭遇国外电子垃圾的侵入。 广东贵屿镇是 国内乃至世界最大的电子垃圾拆解处理集散地,已有 20 多年电子垃圾拆解处理历史,由 于缺乏合理规范的回收措施 、 数量众多 的个体家庭作坊、 不科学的焚烧和酸洗方式以及残 余 的 电 子 垃圾 堆 积 , 令当 地 环 境 受到 严 重 污 染, 被 称 为― 世 界 电 子 垃圾 终 点 站‖ 、― 全球最 [3-4] 毒之地‖ 、― 电子废物切尔诺贝利‖ 。不科学的电子垃圾回收方式致使电子废物中所含的有毒有害物质如铅、 镉等重金属直 [5-15] 接进入当地环境,对当地环境、 生态系统和人体健康造成了严重的污染 。 研 究 表 明 许 [16-24] 多癌症的发生都和隔的污染密切相关 。 镉是 人 体 非 必 需 的 有 毒 金 属 元 素 , 在 电 子 垃 圾 中镉的来源主要来自电阻器、 红外线发生器、 半导体或旧阴极射线管。 镉进入体内的来源、 途径和方式与铅相似,但镉在体内的生物半衰期长达 10~30 年,是已知的最易在体内蓄 积的毒物。 镉是人体非必需元素, 在自然界中常以化合物状态存在, 一般含量很低, 正常 环境状态下, 不会影响人体健康。 镉和锌是同族元素, 在自然界中镉常与锌、 铅共生。 当 环境受到镉污染后, 镉可在生物体内富集, 通过食物链进 入人体引起慢性中毒。 镉被人体 吸 收 后 , 在 体 内 形 成 镉 硫 蛋 白 , 选 择 性 地 蓄 积 肝 、 肾 中 。 其 中 , 肾 脏 可 吸 收 进 入 体 内 近 1/3 的镉, 是镉中毒的― 靶器官‖ 。 其它脏器如脾、 胰、 甲 状腺和毛发等也有一定量的蓄积。 由于镉损伤肾小管, 病者出现糖尿、 蛋白尿和氨基酸尿。 特别具使骨骼的代谢受阻, 造成 骨质疏松、萎缩、变形等一系列症状。 镉对人体有明显的发育毒性,导致低出生体重儿、 [25-28] 胚胎吸收、死亡和各种畸形的发生 。 本 课题 组 之 前 研 究 了 电 子 垃 圾 拆 解 区 重 金 属 镉 的 [29] 污染可影响新生儿生长发育指标 。 瘦素(leptin )是由 Friedman 实验 室 发现的,由 ob 基因编码产生的一 种蛋白质。ob 基因首先编码 167 个氨基酸的激素前体蛋白, 在其分泌入血的过程中去除其信号肽形成有 生物活性的瘦素,由 146 个氨基酸残基组成,分子量 16kd ,其中 80% 左右与血清蛋白 结 合而被运输, 只有游离的瘦素可表现出生物学活性。 最初发现 的瘦素主要由人白色脂肪细 胞产生,随着 越来越深入的研究 ,棕色脂肪组织、胃、骨骼肌、下丘脑、肺、乳腺上皮、 1 汕头大学医学院硕 士学位论文 [30] 胎盘及胎儿的各种组织也能产生 瘦素 , 其中以皮下脂肪组织含量最多 。 瘦素发 挥作用离 不 开 与 瘦 素受 体 (Leptin receptor)的结合, 作 为 蛋 白 质激 素 , 瘦 素的 多 种 生 物学 作 用是 通 过 靶 细 胞膜 上 的 瘦 素受 体 和 相 应信 号 转 导 系统 实 现 的 。瘦 素 受 体 属 I 类 细 胞因 子 受 体 家族, 广泛分布于中枢和外周组织。 游离的瘦素通过多种组织及多种形式的瘦素受体, 作 用于中枢和外周的多个位点, 影响机体许多生理系统及代谢通路。 前者包括神经内分泌功 能、 调控摄食与耗能、 调节机体代谢, 后者包括调节糖代谢平衡、 促进脂肪分解和抑制脂 肪合成、 参与造血及免疫功能的调节、 促进生长等。 瘦素与神经内分泌之间形成了相互作 用的关系: 一方面它通过作用于下丘脑、 胰腺、 肾上腺、 甲状腺、 性腺发挥调节功能; 另 一方 面它也受这些神经内分泌器官的反馈调节。 在很多物种怀孕中期的胎儿循环中已经检 [31-34] [34-35] 测到瘦素 。 胎盘中 同时有瘦素和瘦素受体的表达 。 瘦素发挥多种生理作用, 对于机 体的正常生长发育有重要影响 。 胎儿时期胎盘是最主要的瘦素和瘦素受体来源。 瘦素与胎 儿的生长发育密切相关。 本课题以贵屿 和对照地区新生儿 为研究对象, 调查新生儿生长发育指标, 包括出生体 重、 身长和 胎龄, 检测 新生儿胎盘镉的水平和胎盘中瘦素和瘦素受体的 mRNA 表达水平, 了解胎盘镉水平与 胎盘中 瘦素和瘦素受体 的 mRNA 表达 水平的相关性,从而探讨出生前 镉的 暴露对胎儿生长发育的影响。2 汕头大学医学院硕士学位论文 第 1 章 贵屿电子垃圾拆解区 新生儿胎盘镉 暴露水平分析1.1 引言 镉是危害人体健康的有毒重金属, 广泛存在于生产和生活环境中, 主要通过呼吸道和 消化道等途径进入人体。镉在体内的生物半衰期长达 10~30 年,是已知的最易在体内蓄 [36-43] 积的毒物。 镉对人体的主要危害是引起机体肾脏、 肺、 睾 丸、 肝脏、 骨骼等系统的损伤 , [44-45] 且已被国际癌症研究机构确定为人类肺癌和前列腺癌的确认致癌物 。 镉 具 有神 经 发 育 [46-47] 毒性, 对中枢神经系统有明显的损害作用 ,Cd 对 人 和实验动物具有多器官和多组织毒 [48] 性, 其中对生殖系统毒性作用的研究日益受到重视 , 镉对动物有明显的发育毒性, 导致 [49-53] 低出生体重儿、 胚胎吸收、死亡和各种畸形的发生 。 人体内镉主要来自外环境, 胎盘镉水平是反映机体近期镉暴露的敏感指标, 因此 可以 用来衡量人群所在地环境的镉污染水平, 同时也可做为评估环境污染对人 群健康影响程度 的重要指标。 本研究选取电子垃圾拆解污染区新生儿为研究对象, 通 过检测该地区新生儿 胎盘镉水平及其影响因素,探讨环境污染对新生儿健康的影响。 1.2 材料与方法 1.2.1 研究 对象 在产妇及其家人的知情同意后, 选取贵屿当地医院 2010 年 9 月至 12 月出生的健康新 生儿 192 例作为暴露组,选取汕头市第三人民医院 2011 年 5 月至 9 月出生的健康新生儿 59 例作为对照组,对产妇完成问卷调查,问卷包括职业、文化程度、饮食、居住和新生 儿生长发育指标等。 1.2.2 胎盘 的采集方 法 新生儿断脐后, 剪取胎盘九点处内侧端 1×1cm2 全厚度胎盘组织 1 块, 用滤纸把组织 块上的血吸干,放入冻存管,填好标签(产妇姓名与日期) ,立即放入液氮罐保存。 1.2.3 仪器 及试剂3 汕头大学医学院硕 士学位论文 仪器名称 公司名称 Zeenit-650 型原子吸收分光光度计 德国耶拿公司 Milli-Q Academic 超纯 水器 美国 Millipore 公司 镉空心阴极灯 德国耶拿公司 微量移液器 德国 Eppendorf 公司 低速离心机 德国 Eppendorf 公司 旋涡混合器 IKA Works Guangzhou 低温冰箱 美国 NBS 公司 硝酸 优级纯 广州市东红化工厂 石墨管(型号 C206 -69984 ) 德国耶拿公司 水浴锅上海医用恒温设备厂 30%H 2 O 2(分析纯) 广州化学试剂厂 镉 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液 中国钢铁材料测试中心 BS224S 电 子天平 德国 Sartorius 公司 1.2.4 器材 去离子化 处理 2 ml Eppendoff 管、10ml 离心管 (消化管) 、500 ml 容量瓶、移液器枪 头和自动进样 杯置于含 20% V/V 硝 酸中浸泡 24 h , 依次用蒸馏水, 超纯水充分冲洗干 净, 烤箱干燥后, 盒装备用。 1.2.5 试剂 的配制 1 0.5% 硝 酸清洗液:用移液枪准确移取2.5 ml 优级纯浓 硝酸与500 ml 容 量瓶中 ,缓慢加入 超纯水至刻度线,混匀即得0.5% 的稀硝酸; 5 4 3 2 镉标准液的配制: 1000 ppm 镉 标准液, 用0.5% 硝酸梯度稀释成10 ppb, 10 ppb, 10 ppb, 100 ppb 、50 ppb浓度的镉标准液; 1.2.6 胎盘 的前处理 取约 0.1 g 鲜湿胎盘于 10 mL 消化管中,110 ?烤箱烘烤 1 h ,烘干后加入 0.4 mL 硝 酸,80 ?水浴 1 h 水浴起始温度不宜太高,应由室温缓慢升温,以防温度骤升引起剧烈 反应 。 待胎 盘 消 化 ,消 化 管 中 颜色 转 为 澄 清透 明 的 深 黄色 或 红 棕 色后 , 将 消 化管 从 水 浴 中拿出, 在通风橱中打开盖子, 放净红棕色气体, 在溶液保持一定余温的时候, 向消化管 4 汕头大学医学院硕士学位论文 内滴加 30% 体积分数 的双氧水 0.4 mL , 并不 断震荡, 溶液颜色转淡。 冷却后用超纯水定 容至 3 mL ,4 ?保存,备用。 1.2.7 胎盘 镉检测步 骤 1 标准工作曲线的测定:吸400 μl 胎盘消化液于2 ml EP管中, 然后加入400 μl 0.5% 的硝 酸溶液, 立即混匀, 用移液器转移至进样小杯中, 设置好检测程序, 待测。 仪器先吸取10 μl 0.5% 的 稀硝酸做空白检测得到一个吸光值,然后吸取待测 胎盘消化液10 μl + 10 μl 0.5% 稀硝酸上机检测, 得到第二个吸光度值, 然后依次在此基础上加入不同浓度的镉标准液 (2 , 4 ,6 ,8 ppb)上 机检测, 一共得到六个吸光度值, 最后仪器自动拟合曲线, 所得曲线线性 R20.999 ,线性良好,在该条件下进行实际样品检测。 2 仪器工作条件: 波长为228.8 nm , 狭缝宽 度为1.2 nm , 灯电流2.0 mA , 塞 曼效应扣背景, 2- 磁场, 最大强度0.8 T , 进样体积20 μl , 峰面积定量, 保护气: 氩气99.99% 。 石墨炉升温 程序见表1-1。 表 1-1 血镉检测的石墨炉升温程序 Table 1-2 Program of graphite furnace of BCd determination Step Temp ?C Ramp ?C/s Hold s Time s Gas Drying 1 90 3 8 31.3 Mid 2 105 5 8 11 Mid 3 120 5 8 11 Mid Pyrolysis 300 250 25 25.7 AZ 300 0 4 4 Stop Atomize 900 1500 3 3.4 Stop Cleanout 2100 500 4 6.4 3 样品分析 : 本次实验共分析实验与对照组胎盘样本共 243 例, 取胎盘消化液 400 μL , 用 0.5% 的稀硝酸 体积分数 等体积稀释混匀后, 置于 自动进样盘中, 仪器自 动吸取 10 μ L 上机检测,并按以下 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 计算胎盘中镉浓度ng/g :-1 C 样2×C 液×3×m 胎盘C 样 :实际样品含铅或镉量,ng/g ; 5 汕头大学医学院硕 士学位论文 C 液 :原子吸收测定的样品浓度,μg/L ; m 胎盘 :称 样量,g 1.2.8 数据 统计 采用 SPSS13.0 统计软件建立数据库并进行统计分析。 1 正态分布的采用均数? 标准误表示,偏正态分布的采用中位数及 P -P 表示。 25 75 2 率的比较使用卡方检验, 均数比较使用 t 检验, 偏态资料使用非参数检验 (M-W 检验) 。 3 相关因素分析:单因素相关分析使用 Spearman 等级 分析法。 4 显著性检验水准:P0.05 为差别有统计学意义,P0.01 为差异有高度统计学意义。 1.3 结果 1.3.1 暴露 组 与对照 组新生儿 生长指标 一般情况 本研究中样本总例数为 251 例, 其中暴露组为 192 例, 取自汕头市贵屿镇; 对照组取 自汕头市第三人民医院, 例数为 59 例。 新生儿身长、 体重和胎龄 经 Kolmogorov-Smirnov 检验,P0.000,结合图形情况 图 1-1、1-2、1-3 , 为非正态分布。采用非参数检验进行 分析。 暴露 组新生 儿体 重为 3.16 ?0.36Kg , 身长为 51.40 ?2.01cm ,胎龄 为 39.91 ?0.52 周; 对照组新生儿体重为 3.33?0.43 Kg, 身 长为 50.07 ?1.82cm , 胎龄为 39.41 ?1.18 周。 暴露组新生儿体重小于对照组, 暴露组新生儿身长大于对照组, 暴露组新生儿胎龄大于对 照组, 且均有统计学意义,P 值小于 0.01。 按照性别分组, 暴露组男性新生儿的身长和胎 龄 均 比 对 照 组 的 大 , 暴 露 组 女 性 新 生 儿 的 体 重 比 对 照 组 小 , 身 长 和 胎 龄 均 比 对 照 组 的 大, 且均有统计学意义 表 1-2 。 6 汕头大学医学院硕士学位论文图 1-1 暴露组 与对照组新生儿身长频数分布 图 1-2 暴露组 与对照组新生儿体重 频数分布图 Figure 1-1 Frequency distribution of neonatalFigure 1-1 Frequency distribution of neonatalbody length in case and control groupbody weight in case and control group 图 1-3 暴露 与对照 组新生儿胎龄频数分布图 Figure 1-1 Frequency distribution of neonatal gestational age in case and control group7 汕头大学医学院硕 士学位论文 x 表 1-2 暴露 组与对照组新生儿 一般情况 ( ?SD ) Table 1-2 Neonatal characteristics in case and control group 暴露组 对照组 x ?SD x ?SD No. No1 Total 192 3.16?0.36 59 3.33?0.43 2 体重(Kg) Male 107 3.19?0.36 32 3.33?0.45 3 Female 85 3.11 ?0.37 27 3.33?0.40 4 Total 192 51.40?2.01 59 50.07?1.82 5 身长(cm ) Male 107 51.07?2.16 32 50.25?0.98 6 Female 85 51.06?1.73 27 49.85?2.48 7 Total 192 39.91?0.52 59 39.41?1.18 8 胎龄 (weeks ) Male 107 39.90?0.64 32 39.38?1.21 9 Female 85 39.93?0.30 27 39.44?1.15 注:与对照组新生儿比 1 )Z-2.947 ,P0.01; 2 )Z-1.810 ,P0.05;3 )Z-2.463 ,P0.05; 4 )Z-4.708 ,P0.01;5 )Z-3.986 ,P0.01; 6 )Z-2.551 ,P0.05; 7 )Z-5.124 ,P0.01; 8 )Z-3.926 ,P0.01;9 )Z-3.279 ,P0.01; 1.3.2 暴露 组与对照 组新生儿 胎盘镉水 平比较 本研究中样本总例数为 251 例,其中暴露组为 192 例,对照组例数为 59 例。新生儿 胎盘镉水平 经 Kolmogorov-Smirnov 检验,P0.000,结合图形情况 图 1-4 , 为非正态分 布。采用非参数检验进行分析。 暴露组新生儿胎盘隔水平中位数为 96.6ng/g , 四分位数间距为 70.9~142.0 ng/g , 对照 组新生儿胎盘隔水平中位数为 20.9ng/g ,四分位数间距为 16.1~27.9 ng/g ,暴露组新生儿 胎盘隔水平明显比对照组高(Z-11.406, P0.01 )(图 1-5 );按照性别分组, 暴露组男 性新生儿胎盘隔水平中位数为 99.8ng/g , 四分 位数间距为 67.9~145.0 ng/g , 对 照组男性新 生儿胎盘隔水平中位数为 21.3ng/g ,四分位数间距为 16.5~28.2 ng/g ,暴露组男性新生儿 胎 盘 隔 水 平明 显 比 对 照组 高 (Z-8.276, P0.01 ) , 暴 露组 女 性 新 生儿 胎 盘 隔 水平 中 位 数 为 93.6ng/g ,四分位数间距为 71.8~136.6 ng/g ,对照组女性新生儿胎盘隔水平中位数 为 8 汕头大学医学院硕士学位论文 19.7ng/g , 四分位数间距为 15.6~27.3 ng/g , 暴 露组女性新生儿胎盘隔水平明显比对照组高 (Z-7.779, P0.01)(表 1-3,图 1-6)。图 1-4 暴露 与对照组新生儿胎盘镉(PCCd )水 平频数分布图 Figure 1-4 Frequency distribution