周围淋巴结地址素和血管细胞粘附分子_1在妊娠7-d小鼠淋巴结和子宫的
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达_2207
周围淋巴结地址素和血管细胞粘附分子_1在妊娠7?d小鼠淋巴结和子宫的表达
【摘要】 目的:研究正常小鼠妊娠第7?d子宫和淋巴结的淋巴细胞归
巢分子[周围淋巴结地址素(PNAd)和血管细胞粘附分子_1(VCAM_1)]的分布。方法:应用免疫组化染色观察C57Bl/6小鼠妊娠第7?d PNAd和VCAM_1在子宫和淋巴结的表达。结果:在小鼠妊娠第7?d中,PNAd强表达于外周淋巴结高内皮静脉血管的内皮细胞,但在子宫,仅弱表达于
子宫内膜上皮;VCAM_1弱表达于淋巴结部分血管内皮、淋巴细胞,但
广泛表达于子宫的各层血管内皮。结论:PNAd和VCAM_1在小鼠妊娠第7?d子宫和淋巴结有各自的分布特点,可能与妊娠期淋巴细胞的分布有
关。
【关键词】 妊娠 子宫 淋巴结 周围淋巴结地址素 血管细胞粘附分子_1
(Department of Forensic Medicine, Shantou University
Medical College, Shantou515041, China)[Abstract]Objective:To determine the distribution of lymphocyte_homing molecules
[peripheral lymph node vascular addressin(PNAd)and vascular
cell adhesion molecule_1(VCAM_1)]in the lymph node and uterus
of C57Bl/6 mice at gestation day 7. Methods:Immunohistochemistry assay was applied to observe the
expression of PNAd and VCAM_1 in the lymph node and uterus of
C57Bl/6 mice at gestation day 7. Results:PNAd was strongly expressed in the endothelial cells of high endothelial
venules, but weakly expressed in the endometrium epithelial
cells. VCAM_1 was weakly expressed in the parts of vessel
endothelium cells and lymphocytes in the lymph node, but
expressed widely in all kinds of vessel endothelium in the
uterus. Conclusion:The distribution of PNAd and VCAM_1 in the
lymph node and uterus of C57Bl/6 mice at gestation day 7 is
supposed to be related to the distribution of lymphocytes in the gestation.
[Key Words]pregnancy;uterus;lymph node;peripheral
lymph node vascular addressin;vascular cell adhesion
molecule_1对母体来说,胚胎是半同种移植物,但在正常妊娠中,母
体却没有对胚胎产生排斥。子宫局部免疫微环境在妊娠过程中扮演重要
的角色。早孕时蜕膜部位出现大量的免疫细胞,最引人注目的是大量子
宫NK细胞[1,2]。正常小鼠非孕子宫内有极少量的NK细胞,妊娠6?d左右开始增多,直至妊娠10?d达高峰(占子宫淋巴细胞总量的
70%~80%),12?d左右开始减少,妊娠结束时几乎没有[3]。这种NK细胞在子宫局部的剧增与该类细胞的增生有关。研究显示,妊娠早期子
宫NK细胞在蜕膜增多主要是由于骨髓和其他外周淋巴组织中的NK细胞迁移所致[4]。而外周淋巴细胞的定向迁移与该器官局部的淋巴细胞
归巢相关分子有密切关系[5]。本研究通过免疫组化观察C57Bl/6小鼠妊娠第7?d周围淋巴结地址素(Peripheral lymph node vascular
addressin,PNAd)和血管细胞粘附分子_1(Vascular cell adhesion molecule_1,VCAM_1)在子宫和淋巴结的表达,以探讨妊娠子宫NK细胞积聚的机理。
1材料与方法
11实验动物
健康成年的C57Bl/6小鼠(Taconic Farms公司,美国)按雌雄2?1合笼,次晨检查阴栓,阳性者为妊娠第0?d,第7?d时处死,分离淋巴
结(下颌下,腋下,腹股沟,腹主动脉旁等)和子宫,冰冻切片包埋剂包
埋,液氮快速冷冻后,_20??冰箱保存备用。
12免疫组化染色
冰冻组织制成12?μm厚的切片,室温晾干2?h,冷丙酮固定
10?min,晾干,切片进行免疫组化染色。PBS浸洗5?min,体积分数03%的H2O2室温孵育30?min,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS浸洗5?min,体积分数5%的抗血清(PBS稀释)封闭,室温孵育20?min。倾去多余血清,一抗[生物素化大鼠抗小鼠PNAd单克隆抗体(BD Pharmingen公司,美国)1?100稀释;大鼠抗小鼠VCAM_1单克隆抗体(Antigenix America公司,美国)1?20稀释]室温孵育30?min。PBS浸洗5?min,滴加适当比例稀释的生物素标记兔抗大鼠IgG(vector实
验室,加拿大)1?100室温孵育30?min,PBS浸洗5?min,AB复合物(vector实验室,加拿大)室温孵育30?min,PBS浸洗5?min;DAB显色2?min,自来水冲洗,苏木精对比染色,梯度酒精脱水并封固,显微镜
下观察并拍照。
2结果
在C57Bl/6小鼠妊娠第7?d中,PNAd强表达于外周淋巴结高内皮
静脉血管的内皮细胞,在这些血管周围,有大量的淋巴细胞围绕,可见
PNAd阳性细胞呈线状向外延伸(图1A,封2)。妊娠第7?d子宫在胚胎着床处明显增厚,在子宫底蜕膜区,中膜三角区和子宫壁均未见PNAd阳性表达,仅弱表达于子宫内膜上皮(图1B,封2)。而VCAM_1表达与PNAd显著不同,在淋巴结部位,VCAM_1弱表达于部分血管内皮、淋巴
细胞(图2A,封2),但广泛表达于子宫各层血管内皮(静、动脉)(图2B,封2),尤其强表达于中膜三角区(小鼠妊娠中形成的临时淋巴细
胞聚集区,妊娠10?d左右,该部位大量子宫NK聚集区)。
3讨论
淋巴细胞在中枢淋巴器官发育成熟后,经血流迁移,并在全身各器
官、组织以及炎症部位发挥多种生物学功能。淋巴细胞在移行过程中对
组织器官具有相对的选择性,即某一特定的淋巴细胞群或亚群定向归巢
到相应的组织或器官。淋巴细胞归巢过程的分子基础是淋巴细胞与各组
织、器官血管内皮细胞粘附分子的相互作用。一般将淋巴细胞的粘附分
子称为淋巴细胞归巢受体,而将其对应的血管内皮细胞的粘附分子称为
地址素。多种粘附分子与淋巴细胞的归巢有关,但参与不同群或亚群淋
巴细胞归巢过程的粘附分子是不同的[6]。
PNAd是特异性地表达于外周淋巴结的血管地址素,其与淋巴细胞
受体L_selectin结合介导了淋巴细胞向外周淋巴结的归巢。研究表明,PNAd在高内皮静脉样血管的表达参与了一些疾病的发生和发展
[7]。子宫NK细胞表达L_selectin,且体外粘附实验显示,使用
L_selectin抗体可明显减少NK细胞与蜕膜组织的结合[8,9]。本研究结果显示,虽然在妊娠早期PNAd仍高表达于淋巴结,但在子宫却极
弱表达,提示PNAd可能并未直接参与妊娠早期子宫NK细胞的归巢。
VCAM_1是一种重要的归巢分子,多表达于内皮、淋巴和单核细胞等
[10]。VCAM_1的受体是极迟抗原_4(又称整合素α4β1)和整合素α4
β7。VCAM_1参与体内许多炎症反应中淋巴细胞的归巢。本研究结果显
示,VCAM_1与PNAd的表达正好相反,弱表达于淋巴结,但广泛表达于
子宫的各层血管,尤其是子宫NK细胞聚集区(中膜三角和底蜕膜中央)。本研究提示VCAM_1是招募子宫NK细胞聚集的关键粘附分子,但
确切作用和机制还需进一步研究。
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