养阴益气合剂增强外源性糖皮质激素小鼠免疫功能的研究

养阴益气合剂增强外源性糖皮质激素小鼠免疫功能的研究 养阴益气合剂增强外源性糖皮质激素小鼠 免疫功能的研究 352 中国中医基础医学杂志 ChinesejoumalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine 2006年第12卷第5期 2006.Vo1.12.No.5 【实验研究】 养阴益气合剂增强外源性糖皮质 激素小鼠免疫功能的研究 刘欣,李萍,梁代英,苑惠清,刘薇,王莒生 (1.北京市中医研究所,北京100010;2.北京中医医院,北京1o0010) 摘要:目的:研究养阴益气合剂对外源性糖皮质激素免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用.方法: 实验应用外源性糖皮质激素肌肉注射小鼠造成免疫抑制后,灌服养阴益气合剂,高剂量组(10g生药/ kg体重),中剂量~-(5g生~j/kg体重),低剂量组(2.5g生药/kg体重).采用淋巴细胞体外培养和MTF 法测定T,B淋巴细胞的增殖,中性红吞噬法测定腹腔巨噬细胞吞噬作用和NK细胞的细胞毒作用. 结果:养阴益气合剂高,中,低3个剂量组均可提高免疫抑制后小鼠的脾指数,高,中剂量组分别比模 型组提高89.3%和42.9%,在统计学上均有显着性差异;均可协同ConA和LPS促进免疫抑制小鼠T, B淋巴细胞的增殖.增殖率分别是模型组的132.6%,82.8%和21.7%及110%,63.4%和19.7%;同时 对免疫抑制小鼠的NK细胞杀伤活性及巨噬细胞吞噬活力都有一定的提高作用, 分别比模型组提高 77.9%,57.4%,17.6%及57.3%,9.3%和14.7%.结果:养阴益气合剂对免疫功能低下者 的特异性和 非特异性免疫功能都有明显促进作用,这一结果为临床上提高SARS患者免疫功 能低下及改善SARS 患者外源性糖皮质激素治疗后免疫力低下状态提供了理论依据. 关键词:养阴益气;外源性糖皮质激素;免疫抑制;淋巴细胞增殖;巨噬细胞吞噬 中图分类号:R285.5文献标识码:B文章编号:1006.3250(2006)05.0352.03 StudyofEnhancingEffectsofYangyinYiqiMixtureon Immuno.suppressedMicebyHydrocortisone UuXin,LIPing",LIANGDai—ying,YUANHui—qingz,LIUWei,WANGJu—sheng (1BeltingTraditionalChineseMedicineInstitute;2BeijingTraditionalChineseMedicineHospita1) Abstract:Objective:YangyinYiqimixture(YY)iswildlyusedincuringsusceptivepatients.Basedon it,wetrytoexplorehowitimprovedtheimmuno—functioninthemodelofimmuno— suppressedmice.Methods: KMmiceweredividedinto5groupsradomly:(1)controlgroups:VenN.S.0.5mli.g.onceaday,(2) modelgroups:N.S.0.5mli.g.andHydrocortisone0.025rag/gb.w.i.m.(3)YangyinYiqihighdosegroups (YYh):takenorallyYY(0.1m1)10gcrudedrug/kgbodyweightandHC0.025mg/gb.w.i.m.,(4) YangyinYiqimediumdosegroups(YYm):YY5gc.d./kgb.w.i.g.andHC0.025rag/gb.w.i.m.(5) YangyinYiqilowdosegroups(YY1):YY2.5gc.d./kgb.w.i.g.andHC0.025mg/gb.w.i.m..Micespleen lymphocytesproliferation,peritonealmacrophage(PM)phagocytesandNKcytotoxicitywereobservedby M,I'I'assayandneutralredcolorimeter.Results:allthreeYYtreatedgroupscouldraisetheind exofthe spleen,especiallyinhighandmediumdose,whichallsignificantlyhigherthanmode1.Theyalsocould promoteTlymphocytesproliferationabilityinducedbyConAandBlymphocytesproliferationabilityinducedby LPS.TheTlymphocytesproliferationratesare132.6%.82.8%and21.7%ofmodelgroup.Blymphocytes proliferationratesare110%.63.4%and19.7%ofmodelgroup.Theresultsdemonstratedthatallthree treatedgroupsincreasedthenumberofPMcpandthecytotoxicfunctionofNK.Cytotoxicactivitiesofthree groupsare7.9%,57.4%,17.6%hi 【gherthanmodel's;Thephagocyteactivityofthemall57.3%,9.3% and14.7%higherthanmodel'srespective.Conclusion:YangyinYiqimixtureup— regulatedeffectson immuno— suppressedmice.Itobviouslyincreasedthespecificandunspecificimmunefunctionofthefeeble organism.TheresultssuggestedthatYYmixturecouldbehelpfulforimmunodeficiencydisease. Key word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 s:YangyinYiqi;immunosuppllssive;lymphocytesproliferation;macrophagephagocyte 养阴益气合剂是北京中医医院治疗小儿病毒性肺炎的常用方剂.小儿腺病毒肺炎 审因辨证此病为 基金项目:北京市中医药科技项目资助(京中科.SARS-14-(1)) 2006年第12卷第5期 2oo6.Vo1.12.No.5 中国中医基础医学杂志 ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine35q 温热直中犯肺,耗气伤阴以致血凝.证属邪实正虚, 治疗当以扶正祛邪并重,以益气养阴清热凉血化瘀 法选药. 临床上SARS的发病机制类似于小儿腺病毒肺 炎,根据这一理论,我院将本方用于治疗SARS恢复 期病人,对改善病人低热,乏力,手足心热,盗汗等症 状有明显效果.这一结果提示我们有必要对本方调 节免疫功能机制做深入探讨.本项目将通过观察益 气养阴合剂对免疫抑制小鼠T,B淋巴细胞的增殖, 腹腔巨噬细胞吞噬作用,NK细胞的细胞毒作用及小 鼠脾指数等指标,探讨养阴益气合剂对小鼠特异性 和非特异性免疫的调节机制. 1动物与试剂 昆明(KM)小鼠,体重16g一25g,雌雄各半,由首 都医科大学实验动物中心提供.养阴益气合剂由北 京中医医院药剂科提供,为浓度1:1的浸膏(1g生 药/ml药液).ConA(SIGMA公司,美国)用生理盐水 配制(10tzg/m1),4cI=保存.LPS(SIGNA公司,美国)用 生理盐水配制(20tzg/m1),4cI=保存.噻唑蓝(MrITI1, Fluka)溶解于生理盐水中(5mg/m1),过滤除菌后4cI= 避光保存.氢化可的松(Hydrocortisone,HC)5mg/ml, 由天津金耀氨基酸有限公司提供.L929细胞由北 京紫晨医药生物技术研究所提供. 2方法 外源性糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠模型的 建立及分组:实验分为5组,每组10只.?对照组: 肌肉注射生理盐水0.1ml/只,每天1次连续10d,从 实验第4天起灌服生理盐水0.5rnl/~[21.?模型 组:每日肌肉注射HC0.1ml/只,实验第4天起灌服 生理盐水0.5?ll/只.?高剂量给药组:肌肉注射 HC,同模型组.从实验第4天起灌服养阴益气高剂 量(10g/kg体重).?中剂量给药组:肌注同上,从实 验第4天起灌服中剂量养阴益气(5g/kg体重).? 低剂量给药组:肌注同上,从实验第4天起灌服低剂 量养阴益气(2.5g/kg体重).实验第11天脱颈处死 动物. 3检测指标 3.1小鼠脾指数 计算 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 :脾指数=脾重量/体重(mg/g). 3.2脾淋巴细胞增殖功能检测(Mrrr法) 在超净工作台上取脾脏,制成脾细胞悬液(2× 1o6/rn1),在96孔板上每孔加IO0/A细胞悬液,分别 加入ConA(1Ong/m1)和LPS(20ptg/m1)各100tzl.每个 样品设3个重复孔.置37cI=5%cO培养箱中培养 66h.弃上清,每孔加入20tflMrrr,37?孵育4h,再加 入DMSO振荡.在酶标仪测A值,入=570nm. 3.3腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定 在无菌条件下,每只小鼠腹腔注射灭菌生理盐 水10ml,轻轻按揉腹部2min一3min,抽回腹腔液. 用Hanks液洗2次,1500r/rain,5min离心.再用含 10%小牛血清的PRMI.1640培养液调细胞浓度至1 ×10./ml.加入到96孔细胞培养板中,每孔lOOktl. 在37cI=5%CO,培养箱中培养4h,甩去未贴壁的细 胞,PBS洗涤2次0再加入0.1%的中性红染料 lO0~l,37~C5%CO,培养箱中培养30min,去掉多余中 性红溶液,洗板2次后加入细胞裂解液200tfl,振荡 后静置4cI=过夜.次日用酶标仪测A值,入=570nm. 3.4NK细胞活性 无菌条件下取脾脏,研磨成单个细胞后,1000g min离心5min,弃上清加s.NH4CL裂解红细胞. PBS洗涤后,用含10%小牛血清的1640培养液调细 胞浓度至1×10/ml. 传代培养的L929细胞,将细胞消化,调至浓度 为2×1o5/rnl,加入96孔培养板中,lO0~l/gk,37cI=, 5%cO培养箱中培养至少1h,而后每孔加入100 的NK细胞.每个标本有4个复孔,37cI=,5%CO,培 养箱中培养20h,弃去上清,用生理盐水洗3遍.每 孔加100~10.1%中性红染料,37cI=孵育30min.弃 去染液,生理盐水洗3遍后每孔再加入100tA细胞 裂解液,轻轻摇匀,用酶标仪在492nm处测OD值. 4结果 4.1脾指数 对照组的脾指数为5.5,模型组的脾指数为 2.8,是正常对照组的50.9%,免疫器官明显缩小. 高,中剂量给药组的脾指数为5.3和4.0,分别比模 型提高了89.3%和42.9%,其中高,中剂量组与模 型组有统计学差异(P<0.01,P<0.05),而低剂量 组仅为2.9,比模型组提高了3.6%,与其无明显差 异(P>0.05,见图1). ..一.00对照组模型组高剂量组中剂量组低剂量缎分组 图1养阴益气合剂对免疫抑制小鼠脾指数的影响 4.2养阴益气合剂对免疫抑制小鼠脾淋巴细 胞增殖功能的影响 在免疫抑制小鼠模型上,模型组T淋巴细胞增 殖明显降低,是对照组的41%;而养阴益气合剂的 高,中,低三个剂量组均可协同ConA和LPS促进T, B淋巴细胞的增殖.高,中,低剂量的T淋巴细胞增 殖率分别比模型组提高132.6%,82.8%和21.7%, 与模型组比较均有统计学差异(P<0.01,P< 0.05).模型组B淋巴细胞增殖率只达到对照组的 44%,养阴益气合剂高,中,低三个剂量组的B淋巴 354 中国中医基础医学杂志 ChineseJoUlTIalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine 2006年第12卷第5期 2006.Vo1.12.No.5 细胞增殖率分别比模型组提高了110%,63.4%和 19.7%,也与模型组有显着差异(P<0.01,P< 0.05,见表1). 表1养阴益气合剂对免疫抑制小鼠T,B淋巴细胞 增殖功能的影响(OD,?s) 注:与对照组比较:…P(O.O1;与模型组比较:P<O.05,P(O.O1 4.3养阴益气合剂对免疫抑制小鼠腹腔巨噬 细胞吞噬功能的影响 在免疫抑制小鼠模型上,腹腔巨噬细胞吞噬活 力比对照组明显下降,只达到对照组的55.6%;养 阴益气合剂高,中,低三个剂量组对免疫抑制小鼠的 巨噬细胞吞噬活力分别比模型组提高57.3%,9.3% 和14.7%,3个剂量组均有统计学差异(P<0.01,P <0.05,见表2). 4.4养阴益气合剂对免疫抑制小鼠NK细胞 的活性 在免疫抑制动物模型上可看出,模型组NK细 胞的杀伤活性明显低于对照组,仅为对照组的 55.2%;养阴益气合剂的高,中,低三个剂量组均可 提高NK细胞的杀伤活性,分别比模型组提高 77.9%,57.4%和17.6%,其中高,中剂量组与模型 组相比有明显统计学差异(P<0.01,见表2). 表2养阴益气合剂对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞 吞噬功能,NK细胞活性的影响(OD,?s) 注:与对照组比较:…P<001;与模型组比较:P<0.05,P<0.01 5讨论 传染性非典型肺炎(SARS)的病原体是一种变 异的冠状病毒,研究发现它可以直接攻击人体的免 疫细胞,造成感染者细胞免疫功能迅速下降.另外, SARS临床表现为发热,急性肺部炎症改变甚至发展 到呼吸窘迫综合症.在急性期临床采用大剂量糖皮 质激素治疗对抑制炎症反应有积极的作用,但长期 应用激素对机体产生很多副作用,如二重感染,水电 解质平衡紊乱,免疫功能进一步低下等问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 .因此, 提高感染者的免疫功能是临床上治疗SARS及改善 激素副作用的手段之一. 养阴益气合剂重用生黄芪,党参以益气扶正,以 紫草凉血清热透疹,黄精,沙参,玄参,花粉滋阴降 火.实验 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 ,本制剂能抑制腺病毒,呼吸道合胞病 毒和脊髓灰质炎病毒等多种病毒.临床研究也证 实,本方治疗腺病毒肺炎平均止喘,止咳及平均罗音 消失时间均明显优于病毒唑组.对出院病例追踪观 察,养阴益气对治疗反复呼吸道病毒感染者有明显 疗效,提示它有提高免疫功能作用. 本研究发现,在外源性糖皮质激素免疫抑制的 小鼠模型上,养阴益气合剂(2.5g10g生药/kg体 重)均能在不同程度上提高小鼠的淋巴细胞增殖能 力,且10g生药,kg体重组淋巴细胞的增殖能力与对 照组相近,表明该方高剂量可将受抑制的免疫功能 恢复近于正常,且增殖率与给药剂量存在依赖性关 系.不同剂量的养阴益气合剂对免疫抑制小鼠的脾 重量均有不同幅度的提高,且均具统计学意义;同样 对免疫抑制小鼠脾指数的增加程度与给药剂量也存 在依赖性关系,提示养阴益气合剂在临床上对于免 疫低下者的特异性免疫功能具有提高作用. 除了对特异性免疫有增强外,本实验中还观察 了养阴益气合剂对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能 的作用.发现此合剂对免疫抑制小鼠的NK细胞及 腹腔巨噬细胞的活性有显着性的提高,均有显着的 统计学差异(P<0.01),其细胞活性的提高率与药 物剂量也存在依赖性关系,提示养阴益气合剂对免 疫功能低下机体的非特异性免疫功能也有非常显着 的提高作用. 本实验从特异性免疫和非特异性免疫两方面证 明,养阴益气合剂对免疫抑制小鼠的免疫功能具有 明显增强作用.正常机体处于一种稳定状态,阴阳 调和,而当这种平衡被破坏,机体就会产生疾病,即 失稳状态.本实验证明,养阴益气合剂对失稳状态 下的机体免疫功能降低症状有非常显着的提高作 用,甚至可使其近似恢复至稳态,体现了中药的调节 作用.这一结果为养阴益气合剂临床上治疗免疫力 低下疾病提供了理论依据. 参考文献: [1]温振英.再论扶正祛邪法治疗病毒性肺炎[J].医药新纪元, 2003.8(3):50.51. 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