山农一号在北海道黄杨组织培养中的应用

山农一号在北海道黄杨组织培养中的应用 第29卷第3期 VoI.29No.3 农业科学研究 JournalofAgriculturalSciences 2008年9月 Sep.2008 文章编号:1673—0747(2008)03—0020—03 山农一号在北海道黄杨组织培养中的应用 杨亚亚,麻东梅,许兴 (1.宁夏大学生命科学学院,宁夏银川750021;2.宁夏大学农学院,宁夏银川750021) 摘要:针对北海道黄杨(EuonymusjaponicusThunb)组织培养过程中内生菌污染严重问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,使 用山农一号进行杀 茵和抑茵实验,结果表明:山农一号I型能够有效对外殖体进行杀菌和抑茵,山农一号?型添 加在培养基q-能有效 抑制北海道黄杨组织培养过程中的内生茵.其中北海道黄杨茎段经山农一号I型消毒后接 种到含山农一号?型的 培养基中,杀菌,抑茵效果最佳,并且山农一号I型和?型对不定芽分化和外殖体的生长无抑 制作用. 关键词:北海道黄杨;组织培养;山农一号 中图分类号:Q93-334文献标志码:A 北海道黄杨(EuonymusjaponicusThunb)系卫矛 属卫矛科植物,原产自日本北海道札幌市,别名正木, 为大叶黄杨的栽培品种,是目前唯一能在一23.9.C 的气温条件下生存的常绿阔叶乔木].该树树姿挺 拔,四季长青,极具观赏和开发价值,是北方园林中 的优良树种.北海道黄杨的繁殖多以扦插法(单芽扦 插法和叶片扦插法)为主,繁殖系数低_2].在北海道 黄杨组织培养中,因其自身携带的内生菌较多,常出 现严重的污染问题.本实验在北海道黄杨组织培养 过程中使用山农一号进行杀菌和抑菌,能有效降低 内生菌的污染,为建立良好的北海道黄杨组织培养 体系,进行转基因分子育种工作奠定基础,为其工厂 化生产提供技术保证,对推广该树种和不断培育新 品种具有重要意义. 1实验 1.1材料 北海道黄杨由宁夏永宁县安宁园林绿化有限公 司提供.山农一号I型和?型抑菌剂购自济南普朗 特生物科技有限公司. 1.2培养基 以9(MS+6-BA)一1.5mg/L+p(NAA)一O.5mg/L 为腋芽诱导培养基,附加P(蔗糖)=30g/L,p(琼脂粉)一 1gfL,pH=5.8. 1.3方法 (1)取带腋芽的北海道黄杨茎段或顶芽,剪去叶 片,留叶柄基部,用质量分数为0.1的洗衣粉水轻 轻刷洗枝条后,在流水下冲0.5,1.0h,修剪成2cm 左右的小段,供接种使用. (2)将(1)中洗干净的茎段先用酒精浸泡30S, 再用叫(升汞)一0.19/6分别进行3,6,9,12,15min 消毒后直接接种到腋芽诱导培养基中,2Od后观察 污染和生长情况. (3)在超净工作台上,将(1)中洗干净的茎段在含 有tween-20的无菌水溶液中浸泡10,15min,无菌水 冲洗后,在(山农一号IN)一4中(添加1/4MS无机 盐)浸泡8,9,10,11h,设4个时间梯度实验.不用冲洗, 直接接种到事先灭菌的培养基I(p(MS+6-BA)一 1.5mg/L+p(NAA)一0.5rng/L+~(山农一号?型)一 0.1)和培养基II(p(MS+6-BA)一1.5mg/L+ p(NAA)一O.5mg/L)中进行对比实验,观察并 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 实 验结果. (4)将(1)中洗干净的茎段先用(酒精)一70消 毒30S,无菌水冲洗2,3次,再用训(升汞)一0.1消 毒,无菌水冲洗5,6次,每次3min,分别接种到培养基 I和?中,30d后观察污染情况. (5)将实验过程中有污染的北海道黄杨茎段采 取以下方式处理:对于真菌性污染,将污染材料用软 收稿日期:2007—11-05 基金项目:国家973项目”重要耐盐,耐低温基因的生物学整合效应分析研 究”(2006CB100106) 作者简介:杨亚亚(1982一),男,甘肃静宁人,硕士研究生,主要从事植物基因工程研究. 通信作者:许兴,教授,博士生导师,主要从事作物逆境生理与生物技术育种研 究,Email:xuxingscience@126.com. 第3期杨亚亚等:山农一号在北海道黄杨组织培养中的应用21 毛刷在流水下冲洗干净,在(山农一号I型)一 50中(添加1/4MS无机盐)中浸泡10min;对于 细菌或混合性污染材料,在ID(柠檬酸)一0.6g/L和 (山农一号I型)一1001:1配成的溶液中浸泡 10min.经以上处理的材料取出后,不用冲洗,直接 接种到培养基?中,20d后观察污染情况. (6)培养室温度为24?,每天光照12h,光照强 度为1500,2000lx. 2结果与分析 2.1升汞消毒时间对内生菌污染和材料的影响 北海道黄杨茎段经酒精和升汞处理后接种到腋 芽诱导培养基中,20d后所得结果如表1所示.随着 升汞消毒时间的延长,外殖体污染越小,同时外殖体 褐化的情况也越严重,这主要是由升汞造成的损伤, 褐化严重的直接导致外殖体死亡. 表1升汞消毒时间对内生菌污染和材料的影响 Tab.1Effectofmercuricchloridedisinfectiontimeto theendogenousfunguspollutionandmaterial 2.2山农一号I型对内生菌污染和外殖体的影响 将洗净的北海道黄杨茎段用山农一号工型处理 后,接种到培养基工和?中,30d后所得结果如表2 所示.经过山农一号工型处理后的外殖体,相比经升 汞处理的外殖体污染率有显着降低,存活率有所提 高.另外经山农一号I型处理的材料,表面褐色2周 后逐渐褪去,外殖体没有明显损伤. 表2山农一号I型对内生菌污染和外殖体的影响 Tab.2EffectofShannongNo.1typeIprocessingtothe endogenousfunguspollutionandmaterial 处 数数数, 82926.929100.0 92813.62796.4 103113.23096.8 113326.12987.9 830516.730100.0 932515.632100.0 1029310.32793.1 113O13.32786.7 酒精和升汞对内生菌污染和外殖体的影响 将用酒精和升汞处理后的茎段一分为二,分别 接种到培养基I和?中,30d后所得结果如表3所 示.经酒精和升汞处理的材料同时接种到培养基I 和?中,在含山农一号?型的培养基中能有效抑制 污染,相比之下,不含山农一号?型的培养基中污染 明显严重. 表3酒精和升汞处理对内生菌污染的影响 Tab.3Resultofalcoholandmercuric chlorideprocessing 培养基处理时间/min接种数污染数污染率/ 2.4山农一号I型对污染材料的影响 把有污染的材料按方法(5)处理后,接种到腋芽 诱导培养基中,20d后结果如表4所示.污染材料经 山农一号I型处理后污染率明显降低,因此山农一 号I型对真菌和细菌都具有明显的除菌作用. 表4山农一号I型对污染材料的影响 Tab.4EffectofShannongNo.1typeIonpollutionmaterial 3结论与讨论 组织培养中的污染由2方面原因造成,一是实 验材料自身携带的菌引起污染,这种污染不能被一 般的消毒方法所清除;二是组织培养过程中操作不 当引起污染.北海道黄杨是含内生菌较多的植物,茎 组织中心有髓组织,其细胞间隙大,在用酒精和升汞 进行外殖体消毒时,通常会对外殖体造成严重损伤, 从而影响其再生能力和繁殖速度.本实验在北海道 黄杨组织培养中使用山农一号能有效杀死细菌和真 菌,对污染具有较好的抑制作用,并且对外殖体没有 造成很大损伤. 多数情况下,一种抗生素只能抑制菌的生长而 不能将其完全杀死].无论是细菌还是真菌,一种抗 生素往往只能对其中的一种或几种菌有效,组织培 养过程中,抗生素浓度低了效果差,而浓度高了又容 易对植物产生伤害[4],并且使用抗生素容易引起抗 性,多种抗生素混用往往引起不相容性.此外,抗生 素一般不稳定,遇酸碱或加热易分解,失去活性.而 7O7O9365 够蝎 M 勰?弛?站 69256925 】】11 培养墨????一一一2 22农业科学研究第29卷 山农一号是一种广谱生物杀菌剂,能够杀死各种细 菌和真菌细胞,阻止孢子萌发,体积分数较高时,能 够消除对内生菌的污染,其活性成分能够穿透菌类 细胞壁,抑制部分重要代谢循环的酶类活性,抑制柠 檬酸循环和电子传递等,同时能阻断一些单糖的氨 基酸从培养基到菌类细胞的转运,是针对抑制多种 菌类代谢物活性而 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 的,因此在组织培养过程中, 不会引起菌类的抗药性,可多代使用. 山农一号能有效针对真菌和细菌进行杀菌和抑 菌,在组织培养中能大大降低外殖体内生菌的污染, 有效提高无菌苗的繁殖速度,同时对芽的分化和根 的生成没有显着影响,对获得无菌苗有很大帮助,在 其他组织培养中值得推广,尤其对内生菌较多,濒危 植物材料难以获得的植物组织培养中具有重要作 用.本实验结果表明:北海道黄杨茎段经山农一号I 型消毒并接种在含山农一号?型的培养基中,杀菌, 抑菌效果最为理想;但山农一号的价格相对昂贵,提 高了大规模生产成本,用酒精和升汞消毒后接种到 含山农一号?型的培养基中同样可获得相对理想的 结果,既能够充分获得无菌苗,又可以降低成本. 山农一号具有4种类型:外殖体型,分化生根 型,共生菌专用型和瓶内催化型,根据不同组织培养 的目的,可选用不同的类型.本实验未对后2种剂型 进行实验,还有待进一步研究. 参考文献 [1] [2] E3] [4] 杨合亭,魏林,李怀义.北海道黄杨单芽快速繁殖技术 EJ].林业实用技术,2002(5):23—24. 王合心.北海道黄杨引种表现口].中国林业,2002(4):35. 翟建中,顾梅俏.长春蔓组织培养中污染的防除[J].森 林病虫通讯,1999(4):3O一32. 周俊辉.植物组织中的内生茵污染问题[J].广西植物, 2O03.23(1):41-47. ApplicationofShannongNo.1intissuecultureofEuonymusjaponicusThunb YangYaya,MaDongrnei,XuXing. (1.SchoolofLifeSciences,NingxiaUniversity,Yinchuan750021,China; 2.SchoolofAgriculture,NingxiaUniversity,Yinchuan750021,China) Abstract:InordertopreventandcontroltheseverepollutionintissuecultureofEuonymusjaponicus Thunb,ShannongNo.1wasappliedtoconductedthesterilizationeffect.Theresultsshowedthat ShannongNo.1typeIcouldsterilizeandeliminateendophyticbacteriaeffectivly,ShannongNo.1typeII addedinthemediumtoeffectivlyinhibitendophyticbacteriainthetissuecultureofEUOrlymusapnicus Thunb.ThestemsegmentsofEuonymusjaponicusThunb.usedShannongNo.1type工 disinfectionafter inoculationintocontainShannongNo.1type1Iintheculturemedium,theeffectofinhibitoryand sterilizationwasoptimum,andShannongNo.1typeIandIItherebenoinhibitorytothebud differentiationandgrowthofexplant. Keywords:EuonymusjaponicusThunb;tissueculture;ShannongNo.1 .(责任编辑,校对魏乐) (上接第19页) Researchoffertilizationtechniqueformaizeinsandysoil GongYuqin,BaiJinhong, (YinchuanCentreStationforPopularizationof MaXiaohong,WangMeiqin AgriculturalTechniques,Yinchuan750004,China) Abstract:Theinfluencesofthecombinationofnitrogen,phosphorusandpotassium,optimaldosageand timeandproportionofnitrogenonmaizeyieldinsandysoilinNingxiairrigationregionwereresearched. Theresultsshowedthatthemaizeyieldwithwholefertilizershadnodifferencescomparedwiththat deficientofphosphorusandpotassium.Nitrogenwasthekeyfactorincontrollingyield.Theapplying amountofnitrogenfertilizerwassuitablefor315kg/hm.fortwotimesinsandysoil.50wasappliedas basicfertilizerandother5OwasappliedastopdressingfertilizerduringthelaterhalfofJune. Keywords:maize;sandysoil;fertilizationtechnique (责任编辑,校对安春华)