HPLC法测定氨茶碱片中无水茶碱的含量
氨茶碱片主要用于支气管哮喘、哮喘型支气管炎、阻塞性肺气肿等缓解喘息症状，也用于心源性肺水肿引起的哮喘。该品种为化学药品，已在中国药典二部收藏，原标准中采用分光光度法测定其中无水茶碱的含量，未见HPLC法测定报导，现采用HPLC法对该品种进行含量测定。
1 仪器与试药
日本岛津LC-20A高效液相色谱仪;SPD-M20A二极管阵列检测器;日本岛津UV-2401型紫外分光光度计;AB265-S型电子天平，ES-120J型电子天平。
茶碱对照品(批号:100121-199903，供含量测定用，中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂为
分析
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纯;氨茶碱片(山西亨瑞达制药有限公司20090101，20090102,20090103)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:天津兰博C(4.6mm×200mm,5µm);流动相:甲醇-水(30:70)，流速为18
-1-11.0mL?min;检测波长:275nm;流速为1.0mL?min;进样量20µL;柱温:30?。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取干燥恒重的茶碱对照品适量，置棕色量瓶中，加流动相制成每1mL含100µg的溶液，摇匀，即得茶碱对照品贮备液。
2.2.2 供试品溶液的制备:取本品10片，精密称定，研细，取适量细粉，精密称定，至100mL量瓶中，加流动相适量，超声处理15min，取出，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤。取续滤液2mL置10mL量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备:按处方比例配成不含氨茶碱的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.3 干扰实验 照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液个20µL，分别注入液相色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无干扰(见图1)。
2.4 线性关系考察 精密对照品贮备液0.5,1,2,3,4mL分别置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，各进样20µL，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，浓度(X)为横坐
42标，进行回归分析，得回归方程为Y=2.75×10X-1.34×10(r=1.0000)。结果，茶碱检测浓度的线性
-1范围为5.6~44.5µg?mL。
2.5 精密度试验 取同一份对照品溶液20µL，注入液相色谱仪，连续进样6次，RSD=0.20%。
2.6 稳定性试验 在本次试验条件下，取同一份供试品溶液分别在室温放置0,2，4,6,8,12,24h后
各进样1次，其RSD=0.70%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.7 重复性试验 取同一批号样品(20090101)6份，按供试品溶液制备方法制备，测定，结果无水茶碱的平均含量为77.5%，其中RSD=0.97%。
2.8 样品含量测定 取3批样品，按“2.2.2”方法制备样品溶液，依上述色谱条件进样分析，记录峰面积，并计算含量。结果，3批样品中无水茶碱的含量分别为77.5%、76.2%、78.1%。
2.9 回收率试验 取本品6份(已知含量)适量，精密称定，按“2.2.2”项下制备每份加入一定量的对照溶液，在上述色谱条件下测定，结果(见表1)，得平均回收率为97.97%(n=6)，RSD为0.94%。
3 讨论
在试验中，经过紫外扫描，发现茶碱在275nm波长处有最大吸收，因此选择275nm为检测波长。本试验曾采用文献(4)流动相进行测定，结果发现出峰时间太短，约3min，理论板数不高，故将甲醇-水的比例做了适当的调整，分
别以二者比例为20:80、30:70、35:65、40:60进行了试验。结果表明，甲醇-水的比例为30:70时，出峰时间为6.9min，理论板数最高，拖尾因子最小，故选用该比例的流动相进行测定。
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