食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定
食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定 高效液相色谱法
1. 原理
样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，以石油醚萃取后，用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。
2. 适用范围
本方法来源于GB/T 5413.9-1997。适用于婴幼儿
配方
学校职工宿舍分配方案某公司股权分配方案中药治疗痤疮学校教师宿舍分配方案医生绩效二次分配方案
食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定;也适用于食品或强经食品及饲料中的维生素D含量的测定。
3. 主要仪器
1) 高压液相色谱仪，具有可变波长的紫外检测器，数据处理系统或记录仪。
2) 旋转蒸发器。
3) 平底烧瓶:250mL。
4) 分液漏斗:500mL。
4. 试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所实验用水均指蒸馏水。
1) 异丙醇:色谱纯。
2) 2,焦性没食子酸乙醇溶液:取2g焦性没食子酸溶液于100mL无水乙醇中。
3) 75,氢氧化钾溶液:取75g氢氧化钾溶于100mL水中。
4) 石油醚:沸程30,60?。
5) 甲醇:色谱纯。
6) 正己烷:色谱纯。
7) 环己烷:色谱醇。
8) 维生素D标准溶液
A. 维生素D2标准贮备液:含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D2，用甲醇定容于100mL容量瓶中。 B. 维生素D3的标准贮备液:含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。 5. 操作步骤
5.1样品处理:准确称取10g样品，于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸馏水。
5.2测定液的制备:
1) 于上述样品溶液中加入100mL的20,没食子酸乙醇溶液，充分混匀后加50mL75,氢氧化钾溶液，在蒸汽浴上边续回流30min后，立刻冷却到室温。
2) 将皂化液转入一500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲平底烧瓶。洗涤液并入分液漏斗中。 3) 于上述分液漏斗中，加入100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1 min.在振摇过程中，注意释放瓶内压
力。静置分层，将水相放入另一500mL分液漏斗中，重复上棕萃取过程2次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗
该醚液至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40?和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近于(绝不允许蒸干)后，用石油醚
转移至10mL容量瓶中，定容。
4) 从上述容量瓶中取7mL放入一试管中，用氮气将石油醚吹干，于试管中加1mL正己烷。 5.3测定:
1) 测定液的制备:
A) 仪器条件:
色谱柱:30cm×40cm，硅胶柱。
流动相:正己烷与环己烷按体积比1:1混合，并按体积分数0.8,加入异丙醇。 流速:1mL/min。
波长:265nm。
柱温:20?。
灵敏度:0.005AU/MV。
注射体积:200mL。
B) 注射50mL维生素D标样和200mL样品溶液，根据维生素D标样保留时间收集维生素D于试管中，将试管用氮气吹干，
准确加入0.2mL甲醇溶解。
2) 测定步骤:
A) 仪器条件:
色谱柱:4.6mm×25cm，C18或具同等性能的色谱柱。
流动相:甲醇。
流速:1mL/min。
波长:265nm。
柱温:20?。
灵敏度:0.005AU/MV。
注射体积:50mL。
B) 注射50mL维生素D标准溶液，注射50mL样品溶液，得到标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。 6. 计算
ρs×10?7×40×100
X =
m
As
ρs= ---×ρsd
Asd式中: X--样品维生素D的量，mg/100g;
m--称样量，含量，IU?100g;
ρs --进样液中维生素D有浓度，mg/mL;
A s --进样液中维生素D有峰高(或峰面积); A s d --标样液中维生素D有峰高(或峰面积); ρsd --标样中维生素D的浓度;
计算结果精确至小数点后一位。
7. 注意事项
1) 允许误差及最小检出量:同一样品的2次测定值之差不得超过2次测定平均值的10,;最小检出量为0.1国标单位。
2) 试剂焦性没食子酸容易变性，应购习近期生产的试剂。 3) 如果皂化不完全，可适当增加氢氧化钾的加入量。
浙公网安备 33021202002483