RP-HPLC 法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量的论文
【摘要】目的建立rp-hplc法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量。方法色谱柱:资生堂c18(250×4.6mm，5μm);流动相:乙腈-水(30:70);流速:1.0ml?min-1;
检测
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波长:270nm。结果淫羊藿苷在0.0408,0.2040μg?ml-1的范围内，线性关系良好，r=0.9993;平均回收率:96.1%，rsd=0.56%(n=6)。结论方法简便，快速，结果准确，可用于参芪二仙片的质量控制。
【关键词】参芪二仙片;淫羊藿苷;反向高效液相色谱法
参芪二仙片含有红参、黄芪、当归、仙茅、淫羊藿、巴戟天、黄柏、知母成分。原
标准
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收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册。具有补肾填精，调补冲任，益气养血的功效。用于肾虚腰膝酸软，阳痿早泄，遗精，妇女更年期经血不调等症[1]。原标准中质量控制项只有性状、显微鉴别项和检查项，没有含量测定。本实验建立了对处方中淫羊藿的淫羊藿苷含量测定方法，科学合理有效地控制了药品质量，提高了药品质量标准[1]。
1仪器与试药
1.1仪器
日本岛津lc-2010cht高效液相色谱仪;日本岛津lcsolution色谱工作站。www.11665.cOM电子分析天平(瑞士，d=0.01mg)。
1.2试药
淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110737-200415);水为二次蒸馏水，甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为分析纯;参芪二仙片(沈阳红药制药有限公司，批号:20090202、20090203、20090204)。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备
取淫羊藿苷对照品10.012mg，精密称定，加甲醇制成每1ml含10.012μg的溶液，即得。
2.2供试品溶液的制备
取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，加入50%乙醇溶液50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，用50%乙醇溶液洗涤残渣及滤器3次，每次10ml，合并滤液及洗液，蒸至近干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次15ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3阴性对照溶液的制备
取除淫羊藿柏以外的其它药材，按制法中
工艺
钢结构制作工艺流程车尿素生产工艺流程自动玻璃钢生产工艺2工艺纪律检查制度q345焊接工艺规程
制备阴性样品。其它操作同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.4色谱条件
色谱柱:资生堂c18(250×4.6mm,5μm);检测波长为;流速为1.0ml?min-1;流动相为乙腈-水(30:70);理论板数按淫羊藿苷峰
计算不低于5000;按上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性液各进样10μl，记录色谱图(见图1)。结果
表
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明在淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液在此峰位无吸收，对本品中淫羊藿苷含量测定无干扰，淫羊藿苷峰与其它组分峰分离完全[2.3]。
2.5线性关系考察
精密称取淫羊藿苷对照品10.20mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液。(0.1020mg?ml-1)。分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，将峰面积对其相应的浓度进行回归处理，得回归方程:y=1.36×106x，1.46×104，r=0.9993，表明淫羊藿苷对照品进样量在0.0408,0.2040μg范围内线性关系良好。
2.6精密度试验精密吸取同一供试品溶液10ul连续进样6次，测定峰面积，rsd为1.8%，表明本法精密度良好。
2.7重复性试验
取批号20090202的样品6份，按2.2项下供试品溶液制备方法试验，测定样品中淫羊藿苷的含量，平均值0.2494mg.g-1,rsd为1.6%.表明方法重复性良好.
2.8稳定性试验
取同一供试品溶液在0、2、4、6、12、24h分别进样10ul，测定峰
面积，rsd为1.8%，结果表明供试品溶液在12小时内稳定。满足方法要求.
2.9加样回收率试验
取已知含量的本品(批号20090202,含量0.2494mg/g)，精密称取供试品0.25g，共称取6份，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(c=0.06186mg/ml)1ml，再加入50%乙醇溶液50ml，按2.2项下“„„加热回流30分钟”起制备供试品溶液。精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，计算回收率，结果加样回收率为98.7%,rsd为0.87%(n=6)。
2.10样品含量测定精密吸取供试品溶液10ul，
进样依法测定，结果见表1。
3讨论
3.1检测波长的选择
在200,600nm波长对淫羊藿苷对照品进行紫外扫描，淫羊藿苷在270nm处有最大吸收，且其他组分无影响，故确定270nm为测定波长。
3.2提取方法的选择
根据《中国药典》2010版一部中淫羊藿的含量测定方法中采用稀乙醇做为提取溶剂，故在本试验中，进行多种
方案
气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载
提取，最终选定加入50%乙醇溶液50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，用50%乙醇溶液洗涤残渣及滤器3次，每次10ml，合并滤液及洗液，蒸至近干，残
渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次15ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解为最佳方法。
3.3流动相的选择
在试验中，参考有关文献，采用乙腈-水几种配比作为流动相，但结果不理想，最后认定乙腈-水(30:70)为流动相，测定淫羊藿苷的含量，分离效果较好，峰型理想。该方法简便，快速，稳定，分离效果佳，结果准确，可用于参芪二仙片中淫羊藿苷的含量测定的方法。
参考文献
[1]卫生部药品标准[s].中药成方制剂.第二十册.1998:156.
[2]中国药典[s].2010年版.一部.306
[3]徐天玲.hplc法测定强骨益肾胶囊中淫羊藿苷的含量[j].中国药师,2010,13(10):1526-1527.
浙公网安备 33021202002483