人卵泡液诱导的顶体反应、精子形态与体外受精率的关系

人卵泡液诱导的顶体反应、精子形态与体外受精率的关系 人卵泡液诱导的顶体反应、精子形态与体外 受精率的关系 第12卷第7期 2006年7月 中华男科学杂志 NationalJournalofAndrology ? 605? V01.12No.7 ? 论着? 人卵泡液诱导的顶体反应,精子形态与 体外受精率的关系 李建平,钟影,吴东,艾玲,王胜,谭超,曾伟前,刘敬,马光平 (成都锦江妇产科医院生殖中心,四川成都610016) 摘要:目的:探讨人卵泡液诱导的顶体反应,精子形态及体外受精率3者之间的相互关系.方法:应用 Spearman法对79对不育患者的人卵泡液诱导的顶体反应,精子形态(采用结晶紫染色及精子形态严格分类标准)及 体外受精率等指标进行等级相关 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 .结果:人卵泡液诱导的顶体反应率与正常形态精子百分率之间存在极显 着正相关(n=49,r=0.3763,P<0.01),但人卵泡液诱导的顶体反应率与体外受精率以及正常形态精子百分率与体 外受精率之间均未见显着相关性(n分别为2l和50,r分别为0.2666~110.0018,P均>0.05).结论:人卵泡液 诱导的顶体反应率与正常形态精子百分率之间存在极显着正相关,但两者与体外受精率之间均未见显着相关性. 关键词:顶体反应;精子形态;体外受精 中图分类号:R711.6文献标识码:A文章编号:1009-3591(2006)07-0605-03 RelationshipsamongHumanFollicularFluid-InducedAcrosomeReaction, SpermMorphologyandInVitroFertilizationRates UJian-ping,ZHONGYing,WUDong,AILing,WANGSheng,TANChao, ZENGWei-qian,LIUJing,MAGuang-ping IvFCenter,Chengdu~njiangMaternityHospital,Chengdu,Sichuan610016,China Correspondenceto:LIJian-ping,E-mail:donotcarewhoami@yahoo.COIn Abstract:Objective:Toassesstherelationshipsamonghumanfollicularfluid-inducedacrosomereaction,spermmorphologyandin vitrofertilizationrates.Methods:Therelationshipsamonghumanfollicularfluid— induced~msomereaction.spermmorphologyand invitrofertilizationrateswereinvestigatedbySpearmanrankcorrelationin79infertilecouples.AndthespermmorphologyanalysisWaS performedbyc~stalvioletstainingandbasedonstrictcriteria.Results:Asign~cantpositivecorrelationWasfoundbetweentheper- centageofhumanfollicularfluid-induced~msomereactionandthatofnormalspermmorphology(=49,r=0.3763,P<0.01),but nosignificantcorrelationWasobservedeitherbetweenthepercentageofhumanfollicularfluid-inducedacmsomereactionandinvitro fertilizationratesorbetweenthatofnormalspermmorph0log)randinvitrofertilizationrates(=21,r=0.2666,P>0.05and= 50,,=0.0018,P>0.05,respectively).Conclusion:Thereisasignificantpositivecorrelationbetweenthepercentageofhuman follicularfluid-inducedacrosomereactionandthatofnormalspermmorphology,butnosuchcorrelationeitherbetweenthepercentage ofhumanfollicularfluid-inducedacrosomereactionandinvitrofertilizationratesorbetweenthatofnormalspermmorphologyandin vitrofertilizationrates.NatlJAndrol,2006,J2(7):605-607 Keywords:acmsomereaction;spermmorpholog)r;invitrofertilization 人类的精卵结合是由一系列连续事件构成的复 杂过程,包括精子与卵子透明带结合,顶体反应的发 生,精子穿越透明带,精子与卵膜结合并与卵子受精 等.在此过程中,精子和卵子均发挥着各自重要的 收稿日期:2~5-07一ll;修回日期:2006-01-09 作者简介:李建平(1967-),男.四川武胜县人.副主任技师,博士,从事遗传优生与辅助 生殖技术工作. 通讯作者:李建平.E-mail:donotcarewhoami@yahoo.corn 中华男科学杂志2006年7月第l2卷 作用.自体外受精(in—vitrofertilization,IVF)技术问 世以来,有关精子各种检测指标与IVF结局的关系 一 直是生殖领域的研究热点.本文回顾性总结了 2004年4月一2005年2月间,在本中心接受助孕治 疗的79对不育夫妇的精子形态,卵泡液诱导的顶体 反应以及IVF结局等数据资料,现报告如下. 1资料与方法 1.1临床资料79对不育夫妇,男方年龄(32.9土 5.5)岁,女方年龄(29.7土3.5)岁.接受IVF治疗 的女性(输卵管因素31例,子宫内膜异位症1例,内 分泌因素4例,排卵障碍1例,多囊卵巢综合征2 例,综合因素10例,不明原因1例,共计50例),每 周期获卵数(11.6土7.7)枚.由于79对夫妇并非都 接受了所有的检查或治疗,故统计分组为:精子形态 与顶体反应组49例,精子形态与IVF受精率组50 例,顶体反应与IVF受精率组21例. 1.2精子形态学检查取液化精液1ml,加人生理 盐水至10ml体积,300×g离心5min去除精浆,用 生理盐水调整精子密度至(40—60)X10./ml后,取 10l于载玻片上,推成薄片,室温下风干后浸入 95%乙醇固定,再用5%结晶紫染色2—3rain,自来 水冲洗待干,油镜(×1000)下观察200条精子形 态,按Tygerberg严格精子形态分类标准对精子进行 分类并计算百分率?J. 1.3人卵泡液诱导的顶体反应取液化精液1— 2ml,加人生理盐水至10IIll体积,300×g离心5min 去精浆,加PBS(IrvineScientific公司)5ml,300×g 离心5min洗涤精子2次,然后在含5%人白蛋白的 人输卵管液(HrrF)培养液中上游1h,取含上游精子 上清,在37?二氧化碳培养箱(FORMA)过夜培养 使其充分获能.准备一个空白管和一个实验管,均 加入200过夜培养精子,再向实验管加入201 人卵泡液(为多人新鲜卵泡液混合液,分装保存于 一 20?),空白管不加任何试剂,然后放人37?二 氧化碳培养箱孵育45min.加入PBS5ml,300×g 离心5min洗涤精子1次,去上清,将沉淀精子混匀 后加入顶体反应检测板(Sigma公司)中,室温下干 燥,95%乙醇固定,风干.反应检测板每孔加入异硫 氰酸荧光素(FITC)标记的豌豆凝集素(pisumsati? vumagglutinin,PSA,Sigma公司)(FITC?PSA)20l, 室温中放置30min.反应检测板用PBS洗涤2次, 再用纯水洗涤1次,室温干燥,封片待测.制备好的 顶体反应检测板,置OLYMPUSBX50荧光显微镜下 (×1000)观察计数200条精子的顶体反应情况,计 算百分率.卵泡液诱导的顶体反应率为实验管的顶 体反应率减去空白管的顶体反应率. 1.4体外受精采用液体石蜡油覆盖下微滴培养 法进行体外受精.取卵后,卵子置二氧化碳培养箱 (FORMA)预培养4—6h后加入处理后的精子.精 液采取上游法进行处理,上游后调整精子至(10— 40)X10/ml.每个微滴(150tLl左右)中的卵子数 控制在2—3枚,精子总数控制在10万条左右.置 二氧化碳培养箱(FORMA)培养18h后,除去卵子 周围颗粒细胞,在相差显微镜下(×400)检查受精情 况.体外受精率为受精卵子数(包括双原核及多原 核卵子)与获卵总数之百分比. 1.5统计学分析采用SPSS11.0软件的Spearman 等级相关分析法对精子形态,顶体反应及体外受精 率等指标两两间进行相关分析. 2结果 2.1正常形态精子百分率与人卵泡液诱导的顶体 反应率的关系正常形态精子百分率与人卵泡液诱 导的顶体反应率之间存在极显着正相关(n=49,r= 0.3763,P<0.O1),见图1. Aa:osoaereaetion~ates【1) 图1正常形态精子百分率与人卵泡液诱导顶体反应率的关系 Figure1.Relationshipbetweenthepercentageofnormalsperm morphologyandtherateofacrosomereactioninducedbyhuman follicuUarfluid 2.2人卵泡液诱导的顶体反应率与体外受精率的 关系人卵泡液诱导的顶体反应率与体外受精率之 间未见显着相关性(n=21,r=0.2666,P>0.05), 见图2. 2.3正常形态精子百分率与体外受精率的关系 正常形态精子百分率与体外受精率之间未见显着相 关性(n=50,r=0.0018,P>0.05),见图3. 3讨论 自上个世纪90年代初以来,有关精子各指标 (不论是常规检查指标或者是精子功能指标)之间 的相关性就被许多研究者观察到,如正常形态精子 百分率(严格标准)与精子低渗肿胀率,透明带结合 第7期李建平等人卵泡液诱导的顶体反应,精子形态与体外受精率的关系?607? 0510152025303540 ^cro?H0reactionrates(1) 图2人卵泡液诱导的顶体反应率与IVF受精率的关系 Figure2.Relationshipbetweentheratesofhumanfollicularflu— id.inducedacmsomereactionandIVFfertilization 05101520253035 Norlal?-0r-morphology(1) 图3正常形态精子百分率与IVF受精率的关系 Figure3.Relationshipbetweenthepercentageofnormalsperm morphologyandIVFfertilizationrates 率及精子染色质浓缩程度之间存在正相关J.精子 的高畸形率,低活动率及低密度常常同时发生J. 透明带诱导的顶体反应率与精子透明带穿透率间存 在强的正相关J.本研究也观察到正常形态精子百 分率与人卵泡液诱导的顶体反应率之间存在极显着 正相关(凡=49,r=0.3763,P<0.O1). 精子各指标与体外受精率的关系一直存在争 议,还存在一些自相矛盾的结果,如Ku等.o对精 子形态(严格标准)及钙离子载体A23187诱导的顶 体反应率与体外受精率的关系,前后结果就不一致. 本研究没观察到人卵泡液诱导的顶体反应率与体外 受精率存在显着相关性,与Calvo等报道的结果 不一致,而与钱宪明等报道的基本一致.另外,正 常形态精子百分率与体外受精率之间也没观察到显 着相关性,这与以往的一些文献报道也不符?.o.8J. 方丛等认为精子在密度为1.2×10/ml时,正常形 态精子百分率与体外受精率之间存在显着相关性, 而在精子密度调高到1.6,1.8×10/ml时,两者不 存在显着相关性.之所以出现以上现象,可能有以 下原因:首先,存在各实验室所采取实验方法的差 异,如精子形态分类系统就包括Eliasson(1971), WHO(1980,1987,1992,1999),Williams(1964), Tygerberg严格标准(Kruger等,1986,1988;Menkvel 等,1990),David(1975),Freund(1966),Fredricsson (1979)和Dtisseldorf(Hofmann等,1985)等,目前世 界范围内广泛采用的是WHO和Tygerberg严格标准 系统….用于检测人精子形态学的常用方法也有 瑞一吉染色法,巴氏染色法,勃一利染色法,肖尔染色 法,考马斯亮蓝染色法等.而用于检测人精子顶体 反应的方法主要有FITC—PSA法,三色染色技术,间 接免疫化学技术和酸性磷酸酶法等?u."J.其次,技 术人员之间存在技术差异,以及存在实验误差.第 三,各实验样本的组成及大小存在差异.第四,体外 受精过程是受诸多因素影响的,影响其受精率高低 的因素包括精子因素,卵子因素,培养体系因素及操 作人员因素等,所以其本身变异较大. 但目前大多数研究还是支持精子形态(严格标 准)与体外受精的结局之间存在关联,体外平均受精 率预后差组(正常形态<5%)较预后好组(正常形态 5%,15%)及正常组(正常形态>15%)显着降低…. 总之,本研究结果显示人卵泡液诱导的顶体反 应率与正常形态精子百分率之间存在极显着相关 性,但两者与体外受精率之间均未见显着相关性. 参考文献 [1]CoetzceK,KrugerTF,LombardcJ.Predictivevalueofnormal spermmorphology:astructuredliteraturereview[J].HumRe? prodUpdate,1998,4(1):73-82. 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