神经降压素与原发性肝细胞癌

神经降压素与原发性肝细胞癌 神经降压素与原发性肝细胞癌 第3卷第1期胃肠病学和肝病学杂志 1994年3月CHINESEJOURNAI.OFGASTROENTEROLOGYANDHEPATOLOGY V0【.3NO.1 March【994 神经降压素与原发性肝细胞癌lR7汁 董薹兰傅宝玉邦有贵刘春荣童宗玉美蔡至道;尸三.f/ 摘要应用放射免疫方法检测了72倒原发性肝细胞癌(PHC)病人空腹血浆神经降压素 (NT)浓度,与正常对照组(14.06土9.71PM)比较,除4例高于正常上限外,其他68例其均值 与对照组无明显差异应用ABC法对19例肝癌组织作NT免疫组化染色,其中9倒NT抗原 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达阳性,染色阳性部位在癌细胞的细胞浆内,癌旁间质则为阴性.l0例非PHC肝脏肿瘤,除 1例胆管癌呈弱阳性外,其他9例均为阴性10例非肝肿宿肝组织也呈阴性染色.说明在一些 PHC病例肝癌细胞内存在着NT免疫活性物质,提示此等癌细胞可能具有异位分泌NT的功 能但抗原血浆水平与肝癌组甥免疫组化阳性染色之间没有并行关系 关键词神经降压塞放免测定免疫组化染鱼原发性肝细胞癌 I973年Carraway首次从牛下丘脑中分 离出一种能降低血压的多肽,称之为神经降 压素(Neurotensin,NT)J,由13个氨基酸 残基所组成J.1980年Hammer又从小肠粘 膜中分离出这种具有生物活性的肽类激素, 而以回肠末端含量为高. 1983年后有些报道发现在部分胰腺及 肠管内分泌肿瘤病人空腹血浆NT浓度增 加J.人小细胞肺癌的癌细胞株提出液中有 较高水平的NT含量.Collier及Wood报 道部分肝癌病人血清NT浓度明显增高,但 究竟这种高浓度NT水平可出现在那种类型 肝癌病人尚处在初步讨论中[],以上种种反 映NT可能有一定程度的肿瘤特异性. 本文目的在于观察原发性肝细胞癌 (PHC)病人血浆NT水平,来考虑血浆NT 浓度增高能否作为一项肝癌的诊断指标.其 次,用免疫组化染色观察肝癌细胞中有无 NT抗原的阳性表达,以确定肝癌细胞有无 异位激素分泌的可能. 材料与方法 检澳I对象 1.原发性肝癌组:72倒,均为我院1988 年12月,1990年5月间的住院病人,经肝 动脉造影,肝活检或手术病理证实.男性59 例,女性l3例.年龄28~71岁.按1977年 全国肝癌会议修订的临床分型,其中硬化型 38例,单纯型27例,炎症型7例 2.正常对照组:46倒,均为本院健康学 员及职工男性30例,女性15例.年龄23, 57岁. 研究方法 1.材料:NT 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品为美国Sigma公司 生产,NT氨基端抗体7852由美国加州大学 JohnHWalsh教授惠赠,SephadexGmCM SephadexC.,氯胺T以及右旋糖酐T均为 Pharmacia产品,牛血清白蛋白为Sigma公 司产品,活性炭为Nort"A牌,ABC药盒为 美国Vector实验室产品,NaI为北京原子 能研究所提供,其它试剂均为我国生产的分 析纯制剂. 2.血浆NT浓度测定: -车越鸯口擎自瞧#蓦盘目.1ti.t20gI 胃肠病学和肝病学杂志第3卷 ?样品:所有病例均于清晨空腹采血,血 标本用l0EDTA抗凝,加入Aprotimin (500kIU/ml血液),标本管置于冰浴中,经 4c离心,3000r/min20min,分离出血浆后 存放于一2o?.于测定前血浆用无水乙醇提 取处理;?血浆NT测定:应用放射免疫方 法l9_,NT"I标记果用氯胺T法.将已被标 记的多肽通过SephadexG.柱进行分离.再 通过CMSephadexC柱纯化,比放射性为 200.5士20#Ci/#g.非特异结合率为2, 3.标准曲线NT标准抗原含量1.O,200 pg,所用抗体7852最终稀释度为l;20000. 结合率为33,此抗体与蛙皮素,牛胰多肽, 肠血管活性肽,P物质,胃泌素等胃肠道激素 均无交叉反应.从FT613型自动计算"jI放 免测定仪中测出对照管,标准曲线各管以及 样品管的B/B0,换算出LogitB/Bo,以Logit B/B0对剂量作出直线,确定出样品中NT含 量.测定值批内变异系数为3.2.批间变异 系数为14.5. 3.肝癌组织NIr的免疫组化染色:肝癌 组织l9例来自手术切除或肝活检材料,均经 病理证实为肝细胞癌;对照组l0例为非 PHC的肝肿瘤.另10例为非肝肿瘤的肝组 织.经10中性福尔马林固定,石蜡包埋(蜡 温不超过6o?),制成5m切片.所用NT 抗体为7852.稀释倍数为l:1000,羊抗兔 IgG稀释倍数为】【:1000,染色方法按ABC 药盒内规定程序进行. 结果的判定阳性(+++):细胞膜或 细胞浆呈深棕色.阳性(++)呈棕色.阳性 (+):呈淡棕色.阴性(一):无棕色或与背 景一致呈很泼的棕色.(+__+)或(++)归之 为强阳性,(_-)为弱阳性. 结果 血浆NT浓度在正常对照组为14.06 ?9.71PM.与Wood等 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 一组健康人的 血浆NT含量相似,以+1.68×(30.37 PM)为正常上限.72例PHC中NT含量有4 例超过正常上限,分别为38.9PM.54.3 PM.93,2PM.149.1PM,其他68例血浆 NT含量为l2.66士5,89PM,与正常对照无 明显差异(t检验.P>0,05). l5例PHC病人手术切除肝癌后1:3,7, 21天分别检测了血浆NT浓度,但NT水平 于手术前后均在正常范围. 肝癌组织NT免疫组化染色 1.肝癌组织NT免疫组化染色:结果见 附表,l9例肝癌中9例为阳性结果.阳性率 为47.4,NT抗原阳性表达部位在癌细胞 的细胞浆内,除l例肝细胞癌NT阳性细胞 呈散在分布外,其余均为弥漫性分布.在部分 病例可见同一肝癌部位或同一癌灶内癌细胞 的NT表达强度不同.l2例癌旁肝细胞中. 有3例有不同程度的阳性反应,靠近癌灶者 阳性强度较高,远离癌灶者阳性反应弱或呈 阴性.癌旁间质则为阴性(见封3,图2l,图 2—2). 2.对照组:非PHC肝脏肿瘤NT免疫组 化染色.4例肝胆管癌,l例呈弱阳性,3例为 阴性.4例肝转移癌(来自消化道)及l例肝 脏肉瘤均为阴性反应. 附表肝癌组织NT免疫组化染色结果 第】期神经降压隶与原发性肝细胞癌 3.非肝肿瘤肝组织NT免疫组化染色: 取自1O例非肝肿瘤的肝组织NT免疫组化 染色均呈阴性 讨论 评价血浆NT测定在PHC诊断上的价 值1984年Collier等发现2o个PHC病人 中有5个血清NT浓度明显增高(740PM, 900PM,260PM,750PM),此5倒中有4例 为纤维板层样癌(fibrolamellarCarcinoma), 这类病人的血清AFP含量往往不升高,故认 为血清NT升高有助于纤维板层样癌与其他 PHC的鉴别.并观察到1例肝癌病人肝叶切 除术后几小时血清NT水平下降,而在肿瘤 复发前几个月NT水平即有所上升,故认为 可作为一个治疗后复发的指标.而Wood 报道29例经组织学证实为肝细胞癌的病人, 其中有6倒空腹NT水平明显增高(175, 750PM),此6例中仅3例组织学证实为纤 维板层样癌,故他们认为Collier提出血浆 NT浓度增高有利于纤维板层样癌的诊断, 这种观点是不成熟的.本文72例PHC病 人(22倒病理证实者.无l例纤维板层样癌) 血浆NT水平除4例升高外,其他病例均在 正常范围.4例血浆NT升高者,有3例AFP 水平也增高,其中1例血浆NT93.2PM, AFP明显增高至i000gg/L,另1倒AFP水 平正常.仅就这几例还看不出两者问明确的 相关性.研究结果说明血浆NT水平尚不可 能作为一个HPC的肿瘤标志应用于临床诊 断此外本组15例肝癌切除病倒手术前后血 浆NT水平均在正常范围,故也不能认为可 作为手术后复发的一项指标,这可能与我们 PHC病倒并非纤维层样癌有关. 肝癌组织的NT免疫组化染色关于脑 组织及肠管的NT免疫组化研究已有众多的 报道,但应用免疫组化染色以确定NT抗原 在肝癌组织中的表达及分布尚未见报道本 文研究结果证实了在一些病例的肝癌细胞内 存在着NT免疫活性物质,其阳性表达部位 在癌细胞的细胞浆内,其分布是不均匀的,少 数病例癌旁肝细胞呈弱阳性,而远离癌灶的 肝细胞均为阴性,癌旁问质也为阴性.对比 NT检出率与肝癌细胞分化程度问的关系, 尚未见有明显的相关性(P>0.05).在l0恻 非PHC肝脏恶性H巾瘤及转移癌中,除l恻肝 胆管癌有微弱的NT阳性表达外,其他9恻 呈阴性反应,l0倒非肝肿瘤肝组织中NT呈 阴性反应. 在一些肿瘤细胞如小细胞癌常伴随异位 激素分泌,Goedert用间接免疫荧光法发现 在一部分小细胞肺癌细胞中检出NT样免疫 活性物质而推测此等细胞存在神经分泌颗 粒.Collier早在1982年在电镜下发现1恻 肝日巾瘤细胞中有神经内分泌颗粒.由此看 来,本研究提示部分肝癌细胞存在异位分泌 NT的可能 血浆NT水平与肝癌组织免疫组化染色 阳性率的比较9例肝细胞癌免疫组化染色 有NT抗原阳性表达,但无论呈强阳性或弱 阳性者其血浆NT水平均在正常范围. 有关影响血清某些抗原升高的因素以及 抗原血清水平与组织免疫组化定位之间的相 关性迄今尚未清楚.Sandberg在有关胰癌的 肿瘤标志物的报道中认为在高度及中度分化 的大面积的腺癌,抗原的组织表达与血清浓 度问有很好的相关性.但一个高血清水平并 不常伴随着一个组织强阳性染色,如见于低 分化的或发育退化的癌肿.同样地,一个正常 血清水平也不排斥一个阳性的组织染色,如 见于肿瘤非常小的病人.他们认为两个主要 因素影响肿瘤抗原在血循环中的水平,首先 是肿瘤抗原在组织中的含量,其次是抗原的 清除和排泄,此外还有些因素影响血清水平, 如肿瘤发生部位,侵袭范围以及有无胆总管 梗阻等【]. ?23? 胃肠病学和肝病学杂志第3卷 Suzuki等认为如肿瘤抗原存在于围绕 在恶性细胞附近的问质内,可能是抗原在血 循环中升高的重要机理.此外,癌细胞合成大 量的抗原如不正常地表达质膜的基底侧,则 可能流人问质而进入血管或淋巴,结果I起 血清抗原浓度增高口 Nagura等报道胃肠道肿瘤病例,如 CEA积聚在恶性腺体的腺腔内,则对血清 CEA水平升高起到一个重要作用El2] 本组病例血浆NT水平无明显增高,与 肿瘤面积以及分化程度没有明确的相关性, 可以考虑肝癌组织中虽然有NT抗原阳性表 达,但其含量不高,或含量虽高,能被很好清 除,故不足以提高血浆浓度;其次,NT存在 于肝癌细胞胞浆内,其周围间质中抗原呈阴 性,故不容易进入血循环中;此外肝细胞癌并 非腺癌,抗原不能积聚于腺腔而使血浓度增 高.这些可能是NT血浆浓度不高的原因,但 尚有待进一步研究来证实. 参考文献 250:1907. 『3]HammerRA,eta1.Isolationofhumanintestinal rotensin.JBillChem,1980,255t2476 :4]ElvHrTN,"a1.NeurotensinirmaaunoreactivJtyin plasmaarmtumoFsofthepancreasandgut- !r.g,,1983,85t881. [5]G~dertM,a1.Neurotettsininhu衄nsmallcell lungcarcinomaBrJCanc~,1984t50179. 6](;oilierNA,eta1.Neurotensinsecretionbyfibro- lameliarcarcinomaoftheliver.Lancet,1984,3t 10. [7]WoodJR,et.Neurotensinandhepatoeellularearei— M眦.1~ncet1984,3{24. [8]ShulkesAetalAradioinanmlOaSSayforu_ rotensininhun~nplasma.ClinChimArta,1982, 125:4e [9]蔡强.等血浆神经降压豪放射免疫测定法中华医 学棱骚杂志,】986,9:159. [10]AkeAndren-Sandbexg,CAA50andCA199in serumastHmo~mrkersforpancreaticc?r.Ac一 ChitStand.1989.549[Supp1]75. [11]Suzukir,a1.HighserumlevelsofDUPAN2and— genarmCAA199inpancreaticcancer!co~/atinn withimmunocytochemica[1o~lizationofantigensin 1]CarrawayR,ega1.Theisolationof?hypotetmive geptidetneurotensintfrombovinehypothalam[.JBlot[】2_ C/fire,1973,2486854 [明C~rawayR,eta2.Theaminoaddsequenceofahy pot[uda~cpeptideneuroter~in.,BiolChim,1975, c~ncercells-HP}酣.g础打伽g,t1988t35 l28. HamadaY,elal-lmmunohistochemicalstudyOfCaT- cinoembryonicantigeninpatientswithcolor~tal ca…:correladonwithplasmcarcinoembryonic antigenlevelsc…1985,55'188 NeurotensinandPrimaryHepatO—CeIIularCarcinoma JiangRuo.IanFuBao—yuZhengYou—guietal (DepartmentofMedicine-TheFirstAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniz~rsity,Shenya ng) AbstractPlasmaneurotensin(NT)c0ncentratio邶weremeasuredin72Datientswith primaryhepato— cellularcarcinoma(PHC)and46norrcl~lcontrolsbyradioimmunoassay.The meanplasmaconcentrationofNTwas12,66?.89PMinpatientsand14,06土9.71PMin controls?Therewasnosignifieantdifferencebetweenpatientsandcontrols.Immunohis. tochemiealstudiesofNTwerecarriedOUtin19PHClivertissues,10otherhePatomasand10 nonhepatomalivertissuesbystainingwithABCmethod,Itwasfoundthat9of19PHCtis— sueswereimmunohistochemicallypositive.whiletheothertwogroupswerenegativeexcept ?24? 第3卷第1期 1994年3月 胃肠病学和肝病学杂志 CHINESEJOURNAlOFGANDHEPATO1.0Gy vot.3No.1 March1g94 疫抑制酸性蛋白与HLA—I类分子 在胃癌组织中的表达及其关系 张宏博樊代明张学庸陈希陶 贾同文/张少华凌瑞王岭彭涌 (第四军医大学西京医院消化内科西安710032) R7; Rj2tfJ 摘要本文应用抗HLA—I类重链单态决定簇和抗免疫抑制酸性蛋白l型(1AP-2)单克 隆抗体,分别对64例胃癌,癌旁组织和6例正常胃粘膜冰冻和石蜡切片进行了免j芟组化 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 . 结果表明,正常胃粘膜及癌旁上皮细胞lAP2表达阴性,HLAI粪分子表达阳性.但在胃癌 组织1类分子表达缺失(42.2%),IAP一2表达阳性(90.5)其中肿瘤分化程度与I粪分子缺 失和IAP一2高表达均呈负相关,即分化程度越低,I类分子缺失率越高,IAP一2表达阳性率亦 越高.提示:?HLA—I粪分子表达缺失可能是胃癌细胞述避宿主免疫监视而得以生长,扩散 和转移的机理之一;?IAP一2的高表达可能是胃癌细胞引起宿主免疫抑制的重要因索. 关每词盟差自塑些巫(HLA)是篓塑壁丝堡旦差查复壅望墨坐 肿瘤宿主免疫功能异常可能是导致细胞 恶变后继续生长发展为肿瘤和转移的原因之 一 .研究表明,癌细胞可以通过多种机制使宿 主免疫功能异常.其中包括癌细胞表面的人 类主要组织相容性抗原(亦叫人类白细胞抗 原,HLA)表达缺失和癌细胞产生多种免 疫抑制因子如免疫抑制酸性蛋白(immuno suppressiveacidicprotein,IAP)等.J,从而 逃避宿主免疫监视或者通过抑制宿主免疫机 制而得以生长或转移本文通过lAP一2与 HLA—I类分子在胃癌及癌旁组织中的表达 及其相关性的研究,探讨这两种分子在胃癌 发生和转移中的意义. 材料与方法 单克隆抗体及其它试剂W6/32为抗 HLA—I类重链单态决定簇单抗(军事医学 科学院惠赠);MI为抗IAP-2单抗(本研究 室制备);ABC药盒(美国Vector公司); DAB(日本和光纯药株式会社) 病例选择及取材随机选择我院及外院 1993.4间外科手术切除并经病理 1992.1, onehepatoeholangioma.NT—positivesubstancewaspresentinthecytoplasmofthecancer cellsandabsentinthesurroundingstromaadjacenttothemalignantcells.Therewasnopar— alletrelationshipbetweenimmunohistochemicaIlocalizationofNTandplasmaNTleveIs. TheresultsindicatethatthePHCtissuesmaycontainNT.andthePHCcRncercellsB.reasso— ciatedwiththeectopicproductionofNT KeywordsN'eurotensinradioimmunoassayImmunohistochemistryHepato—,Cel 1ularCarcinoma 车研目豪自科半?忧十青年十珥基?(3922..)谭置-日市目普外科 ?. ?25?