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增殖法检测新生小牛血清中大肠杆菌噬菌体污染

增殖法检测新生小牛血清中大肠杆菌噬菌体污染表 2� pHII DNA疫苗诱导的细胞免疫结果 Tab 2� Cellu lar immun ity induced by pHII DNA vaccine G roup CD4+ CD8+ CD4+ /CD8+ Pos it ive con trol 136�11 56�76 2�39 Tes t 191�47 62�39 3�07 讨 � � 论本研究将 adr亚型 HBsAg基因和 IL�2佐剂基因插入到含有 CMV早期启动子的真核细胞表达载体 pVAX1中, 构建出重组质粒 pH II。为...

表 2� pHII DNA疫苗诱导的细胞免疫结果 Tab 2� Cellu lar immun ity induced by pHII DNA vaccine G roup CD4+ CD8+ CD4+ /CD8+ Pos it ive con trol 136�11 56�76 2�39 Tes t 191�47 62�39 3�07 讨 � � 论本研究将 adr亚型 HBsAg基因和 IL�2佐剂基因插入到含有 CMV早期启动子的真核细胞表达载体 pVAX1中, 构建出重组质粒 pH II。为使 IL�2与 HBsAg基因在同一载体内高效表达, 用微小病毒内部核糖体进入位点 ( IRES )基因片段将二者连接。将这种共表达载体基因免疫 BALB /c小鼠后,成功诱导出小鼠的体液免疫和细胞免疫应答。 IL�2是一种重要的 T细胞生长因子,在控制 Th细胞的分化上起着重要作用,能增强 NK和 CTL功能,促进 IFN� �的产生和 T 细胞增殖以及 Th1细胞的产生 [ 4 ]。 IL�2选择性支持经抗原刺激而活化的 T细胞扩增, T细胞活化后诱生两个重要膜蛋白即 CD40L和 FasL。CD40L与 B细胞表面 CD40结合, 为 B细胞活化提供第二信号, 促使 B细胞活化、增殖, 并进行 Ig类别转换, 促进体液免疫 [ 5] , 这些生物学功能使其具有非常好的免疫佐剂作用。本研究结果证明, IL�2蛋白与 HBsAg共同在体内长期持续低剂量表达, 能帮助机体克服对乙肝表面抗原的遗传限制性无应答,使之在体内产生协同效应,可诱导出较高水平的乙肝表面抗体,显著增强乙肝核酸疫苗的免疫原性。参 � 考 � 文 � 献 [ 1] 赵大鹏,吴晓娟,张岩,等. 乙肝病毒 DNA疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答.微生物学杂志, 2004, 24( 5) : 59~ 63. [ 2] 杜德伟, 白宪光,冯志华,等. 白细胞介素 2提高 HBV基因疫苗诱导的体液免疫应答.实用肝病杂志, 2003, 6( 2) : 78~ 79. [ 3] 萨姆布鲁克 J,弗里奇 EF, 曼尼阿蒂斯 T, 著.分子克隆实验指南.金冬雁,黎孟枫, 译.第 2版. 北京:科学出版社, 1992. 26~ 28. [ 4] 姜勋平. 基因免疫的原理和方法. 北京: 人民卫生出版社, 2004. 95~ 99, 117~ 122. [ 5] 陈慰峰. 医学免疫学. 第 3版. 北京: 人民卫生出版社, 2002. 154~ 155. (收稿日期: 2006�06�07 ) �实验技术 � 增殖法检测新生小牛血清中大肠杆菌噬菌体污染李福安 � 李玉凡 � 杨平学 � 潘丽静 � � 新生小牛血清是生物制品生产中的一种重要原材料, 其质量的好坏直接影响到制品的质量 ,尤其是活疫苗的生产。为提高疫苗的质量, 我们用 3种大肠杆菌宿主菌, 采用增殖法对新生小牛血清进行了大肠杆菌噬菌体检测。现将结果报道如下。 1�材料新生小牛血清共 106批, 为国内多家企业生产, - 20� 保存; 大肠杆菌宿主菌标准株 C�3000购自中国药品生物制品检定所, 25922菌株和 8099菌株均由辽宁省疾病预防控制中心提供。 2�方法将待检新生小牛血清 5倍稀释, 分别加 1 m l宿主菌 2 h 培养物, 置 37� 振荡培养 18 h。将用肉汤 10倍稀释的宿主菌培养物 1�5 m l铺平平皿表面, 吸出多余液体, 至表面完全作者单位:辽宁省疾病预防控制中心开发科 (沈阳 110005) . 通讯作者:李福安, E�m ai:l l iyilin999@ sina. com 吸干后,置 37� 培养 1 h。将培养 18 h的待检样品菌液经无菌滤器过滤,点种于经 37� 培养 1 h后的培养皿中, 再将培养皿置 37� 培养 8 h, 检查噬菌斑的形成。 3�结果 106批新生小牛血清用 C�3000菌株检测, 36批呈阳性, 阳性率为 34% ; 用 8099菌株检测, 23批呈阳性, 阳性率为 21� 7% ; 用 25922菌株检测, 26批呈阳性,阳性率为 24�5%。大肠杆菌噬菌体种类繁多,我们比较了 3株大肠杆菌对噬菌体检出率, 结果 C�3000菌株明显高于 8099菌株和 25922菌株,而 8099菌株和 25922菌株能检出 C�3000菌株检不出的噬菌体。所以在进行大肠杆菌噬菌体检测时, 应尽量用多种大肠杆菌依次检测, 这样可减少漏检的可能性。同时本实验结果也提示小牛血清生产企业需进一步加强对生产工艺的控制,以避免污染。 (收稿日期: 2006�08�30 ) �602� 中国生物制品学杂志 2006年 11月第 19卷第 6期 � Ch in J B iologicalsNovem ber 2006, Vo1. 19 No. 6

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