HPLC法测定氨糖美辛肠溶片中盐酸氨基葡萄糖的含量

· 648· 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2010 Jun；14(6) HPLC法测定氨糖美辛肠溶片中盐酸氨基葡萄糖的含量 谢子立 ，宋 倩 (1．安徽省食品药品检验所，安徽 合肥 230051；2．安徽 医科大学，安徽 合肥 230032) 摘要：目的 建立HPLC法测定氨糖美辛肠溶片中盐酸氨基葡萄糖的含量。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为C 。柱 (250× 4．6 inrn，5 n)；流动相为乙腈 一0．05％磷酸溶液(40：60)并用三乙胺调至 pH3．0；流速为0．6 ml·min～； 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 波长为 192 rim；柱 温为30℃。结果 在 1．31～20．6 Ixg范围内盐酸氨基葡萄糖的浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0．9994，n=6)；平均回收率为 99．57％(n=9，RSD=0．91％)。结论 本法简便、准确、重复性好，适用于氨糖美辛肠溶片中盐酸氨基葡萄糖的含量测定。 关键词：高效液相色谱法；氨糖美辛肠溶片；盐酸氨基葡萄糖 Determination of glucosamine hydr0chl0ride in glucosamine indomethacin enteric．coated tableIs by HPLC XIE Zi—li ．SONG Qian (1．Anhui ba~titutefor Food and Drug Control，Hefei，Anhui Province 230051，China； 2．Anhui Medical University，Hefei，Anhui Province 230032，China) Abstract：Aim To establish a method to determine glucosamine hydrochloride in glucosamine indometracin enteric—coated tablets． Methods Cl8 column(250 mm×4．6 mm，5 )was adopted．The mobile phase was a mixture of0．05％ phosphoric acid(adjusted to a pH 3．0 with triethylamine)and acetonitrile(60：40)．The flow rate was 0．6 ml·min and detection wavelength was 192 nm and column temperature at 30~C．Results Within the range between 1．3 1 and 20．6 g，there was a good linear relationship between the concentration and peak area of glucosamine hydrochloride(r=0．9994，n=6)．The average recovery was 99．57％ (n=9)and RSD was 0．91％ ．Conclusion The method is simple．accurate．repeatible and can be applied to determine glucosamine hydrochloride in gill— cosamine and indomethacin enteric—coated tablets． Key words：HPLC；glucosamine hydrochloride；g|ucosamine and indomethacin enteric—coated tablets 氨糖美辛肠溶片中的组成成分之一是盐酸氨基葡萄糖 ， 它是一种天然的氨基单糖，是蛋白多糖合成的前体物质，可以 刺激软骨细胞产生有正常多聚体结构的蛋白多糖，提高软骨 细胞的修复能力，从而可延缓骨关节疼痛的病理过程和疾病 的进程，改善关节活动，延缓疼痛，用于全身骨关节炎的治疗 和预防。对于氨基葡萄糖的研究较多，测定其含量的方法也 有多种，如旋光法⋯，衍生化气相色谱法 ，高效液相色谱 法 等。目前，氨糖美辛肠溶片的现行药品 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 采用 Elson — Morgan比色法测定盐酸氨基葡萄糖的含量 ，过程繁琐， 影响显色的因素较多。本文采用 C 色谱柱测定其含量，方法 准确，简便，灵敏度高，重复性好，可用于氨糖美辛肠溶片中盐 酸氨基葡萄糖的质量控制。 1 仪器和试药 1．1 仪器 Agilentl200高效液相色谱仪，lnertil HPLC Column； c1R色谱柱(25o l／ira×4．6 mm，5 Ion)；Mettler AG一135 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 天平。 1．2 试药 盐酸氨基葡萄糖对照品(批号：140673-200405)， 由中国药品生物制品检定所提供；氨糖美辛肠溶片(上海东 海制药股份有限公司东海制药厂批号：070803、080112，广东 mAU 160 躲 60 40 20 O 逸舒制药有限公司批号：20060601)；乙腈为色谱纯；水为纯化 水；磷酸和三乙胺均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 色谱柱为cl8柱(250 nun×4．6 mill，5 m)；流动 相：0．05％磷酸溶液(三乙胺调pH3．0)·乙腈(60：40)；流速为O． 6 ml-min～；检测波长为 192 rim；柱温为30℃，进样量 10 。 2．2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品 50．70 mg，置 50 ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀， 即得浓度为 1．0 g·L。。的溶液。 2．3 供试品溶液的制备 取本品 20片，精密称定，研细，取 细粉适量(约相当于盐酸氨基葡萄糖 50 mg)，置 5O rnl量瓶 中，加水适量，振摇使其溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 2．4 阴性对照溶液的制备 依照氨糖美辛肠溶片的处方比 例称取除盐酸氨基葡萄糖的其它成分，按供试品溶液的制备 方法制备阴性对照溶液。 2．5 专属性试验 按“2．2，2．3，2．4”项下方法配置三种溶 液，照上述色谱条件进样 ，结果表明所 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 的色谱条件适用于 盐酸氨基葡萄糖的含量测定，见色谱图 1。 mAU 髑 60 18 O 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 A B C 图 1 对照品溶液(A)、样品溶液(B)、阴性对照溶液(C) 砷 戆 柏加0 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2010 Jun；14(6) ·649· 2．6 线性关系考察 取 1．0 g·L 的盐酸氨基葡萄糖对照品 溶液分别进样 1，3，5，7，10，15，20 ，测定峰面积，以峰面积(1，)为 纵坐标，进样量( ，雌)为横坐标，进行线性回归，得到线性方程： Y=28．212X+8．7363，r=0．9994。结果表明盐酸氨基葡萄糖进样 量在 1．31～20．6 lag范围内线性关系良好。 2．7 精密度试验 精密吸取盐酸氨基葡萄糖对照品溶液 (1．0 g·L )按上述色谱条件重复进样 5次 ，测定盐酸氨基 葡萄糖的峰面积，峰面积的RSD=0．20％ (n=5)，仪器进样 精密度良好。 2．8 重复性试验 取同一批样品(070803)研细，按 2．3方法 平行制备供试品溶液(n=6)，按样品测定方法测定，测得平 均含量为 100．3％，RSD=0．6％；结果表明本法重复性好。 2．9 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12， 24 h各进样一次，测定盐酸氨基葡萄糖的峰面积分别为 294．23、 294．95、295．64、297，33、296．80、293．40、291．60，峰面积基本不变， RSD=0．64％，结果表明在24 h内，样品基本稳定。 2．10 回收率试验 精密量取氨糖美辛肠溶片的样品溶液 (含盐酸氨基葡萄糖的浓度为 2．5085 g·L )2 ml，共 9份 ， 分别置 10 ml量瓶中，精密加入 0．9106 g·L 的盐酸氨基葡 萄糖对照品溶液3，5，7 ml各 3份，加水稀释至刻度，摇匀，作 为供试品溶液，各进样 10 l，结果见表 1。平均 回收率(n= 9)为99．57％，RSD=0．91％。表明本实验所确定的 HPLC 的检验法能有效测定氨糖美辛肠溶片中盐酸氨基葡萄糖的含 量，准确有效，见表 1。 表 1 加样回收率试验(n=9) 2．11 定量限 按照“2．2”项配置对照品溶液 ，然后再用水 稀释 1O倍，取7 l注入液相色谱仪，主成分峰高是噪音峰高 的10倍，此时溶液浓度为0．6 mg·L 即盐酸氨基葡萄糖对 照品的定量限，见图2。 0 2 3 4 6 8 图2 定量限 2．12 含量测定 精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品约 5o n1g，置 5o rI1l容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取本 品2o片，精密称定，研细，精密称取相当于盐酸氨基葡萄糖 100 rug的样品粉末，置 100 fnj容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度， 滤过，取续虑液作为供试品溶液。精密吸取对照品和供试品溶液 各 1O ，分别注入液相色谱仪， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图，按外标法；以峰面积 计算含量，即得。另按标准测定盐酸氨基葡萄糖三批供试品含量 测定结果，见表2。 表2 样品含量测定结果(／7,=3) 3 讨论 3．1 色谱柱的选择 目前美国药典(29版)中收载有用 C 色谱柱以及 中华人民共和 国国家标准 (GBT 20365~006) 用 C 。色谱柱检测盐酸氨基葡萄糖的方法，按照上述条件实验 时比较，盐酸氨基葡萄糖色谱峰的保留时间都较短。考虑盐 酸氨基葡萄糖是葡萄糖的衍生物，分子中存在氨基和多个羟 基，糖类物质尤其是单糖在乙腈和水的作用下可以使用氨基 柱一般能得到较好的分离，同时参考糖类物质的含量测定相 关文献报道 ，选择用氨基色谱柱采用反相色谱系统进行考 察，不同品牌的氨基柱其保留时间相差较大，且峰形较差。因 此，最后采用通用的C， 色谱柱进行相关研究，结果表明 c 柱 较为适合于盐酸氨基葡萄糖的含量测定。 3．2 检测波长的选择 由于盐酸氨基葡萄糖的紫外吸收处 于末端区，缺乏可很好利用的较明显的紫外吸收来检测。目 前，美国药典在测定其时采用 195 nm波长测定，考虑盐酸氨 基葡萄糖峰面积较小，而 192 nm波长处的吸收值略大于在 195 nm波长处的吸收值，这样可以减少液相测定时的积分误 差，因此选择 192nm作为测定波长，结果较理想。 3．3 流动相的优化 考察过乙腈．水(60：40)、乙腈-0．05％ 磷酸溶液(60：40)、乙腈-0．05％磷酸溶液(40：60)并用三乙 胺调至 pH3．0，结果表明乙腈-0．05％磷酸溶液(40：60)并用 三乙胺调至 pH3．0的流动相色谱 图较好，保留时间合适，分 离效果佳。 参考文献： [1] 庄旭琴．旋光度法测定盐酸氨基葡萄糖片的含量[J]．安徽医 药，2006，10(12)：930． [2] 李 俊，王英瑛．衍生化气相色谱法测定氨基葡萄糖制剂含量 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