睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究

睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究 内蒙古医学院 硕士学位论文睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究 姓名:段香星 申请学位级别:硕士 专业:眼科学 指导教师:钱志敏 20090501 中文摘要 目的观察睫状神经营养因子(,,,,)能否促进视神经(,,)损伤后在原中枢神经环境中再生，为临床救治提供理论依据和新的治疗途径。方法选用成年日本青紫蓝兔,,只，其中随机抽取两只做正常对照，不做任何处理;其余,,只为实验对照组，构造视神经中度损伤模型(中号显微血管夹于视神经后, ,,,,处夹持,, ,),于损伤后即时、,天、,天、,,天各时间点给予右眼(实验眼)玻璃体腔内注射,,,, ,一(, ，,,,山)，左眼(对照眼)于同等时间点注射等量双蒸水。于损伤后,、,、,,、,,天分别取实验眼和对照眼视神经眶内段行纵切片，行常规,,染色观察视神经组织学变化;免疫荧光检测观察生长相关蛋白,,,(,,,一,,)在视神经的表达;同时将动物实验眼及对照眼于损伤前、损伤后即刻及处死前进行视觉诱发电位(,—,,,)检查以观察兔视功能变化情况，采用,,,,,,(,统计学软件包对数据进行统计学分析。结果,,及免疫荧光检测可见实验组组织学变化明显好于对照组;,—,,,检查可见视神经损伤后即时闪光视觉诱发电位波形几近熄灭。伤后,周，两组潜伏期基本恢复至损伤前水平，振幅恢复缓慢，组间比较差异无统计学意义(,,,(,,);,周以后两组间比较差异有统计学意义(,,,(,,),结论睫状神经营养因子对视神经损伤有修复作用，可促进视神经轴突在原中枢环境中的再生。 关键词睫状神经 —,,, ,,,,;, ,, ,,,,营养因子视神经损伤再生,,,一,, , ,,, ,,,,,,,,,,,; ,,;,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ，,,,,, ,, ,,,,; ,,,,, ,,,,,,;, ,,,,;,,,,。,, ,,,,,,, ,,, ,,,,;,—,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,;?,,;,,,((,,,,)，,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,; ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ;,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,;(,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,, ;,,,,;,, ,,,,, ,,, ;,,,(,,,,,,,„ 茫瑁铮铮螅?,,,,,,州 ,,, ,,,,,,,, ;,,,,,,; ,,,, ,,,,,,, , ,,, ,, ,,,,，,,,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,, ,,,,,。,, ,,,,,,(,,,,; ,,,,, ,,,,,,((,,, ,,,,; ,,,,,, ,, ,,;, ,,, ,,,，;,,,,,, ,, ,,;,,,,,;,,, ,,, ,, ,,;,,,, , ,, ,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,);，,,,, ,瓣 (,彬“),,, ,,,,;,,, ,,,,:,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,„,,,,„(,,,,,,,,,,,, ,,,,)，,,,,,，,,,,,,，; ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,(,心),,, ,,,, ,, ,,,, ,,,,(;,,,,,, ,,,,):,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,, ,, ,，,，,, ,,,, , ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,;,, ,, ,，(,， ,,,,,,，:„,,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,, ,,翠,,,,, ,,，,,,,; ,,,,, ,，,,, ,,,,,,,,甄 ,,,,,,, ,, ,,,,,，,,,,,,,,, ,, ,,簦澹悖?,,, ,,,一(,, ,,,,,,,,,, ,,,,,;,, ,,,,; ,,,,,(,,,, ,,,;， ,,,,,,,,,,,;,,;,。,—,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,, ,，,,、?王, ,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,(,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,;,,,, ,,,, ,,,,,,(,(,,,,,,, ,:,,,，,,,,,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,;,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,(,—,,, , ,,,,; ,,,,, ,,, ;,,,,,,(,,, ,,,,,;, ,, , —,,, ,,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,，,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,,,,，,,,,,,, ,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,(,,,(,,)(,,,,,,,,,;, ,,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ;,,,,,, ,,,,, ,, , ,,,,, ,,,,, ,,,,,,(,《,(,,)(,,,;,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,;,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,;,,,,, ,, ,,,,; ,,,,,;,,,,,,,,, ,, ;,, ,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ;,,,,, ,,,,,,,,,,,( ,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,;,,, ,,,,; ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,——,, ,((,,, 内蒙古医学院学位论文原创性声明 郑重声明:本人所呈交的学位论文是在导师指导下，独立进行研究所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 外，本论文内容不包含其他个人或集体已经公开发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人学位论文与资料若有不实，愿意承担一切相关的法律责任。论文作者签名 年刀月？日 ,, 学位论文版权使用授权书 本人完全了解学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学院保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。学院享有发表、复制、查阅、借阅及申请专利等权利。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时本人保证:毕业后发表、使用学位论文以及结合学位论文研究课题再撰写的文章，作者署名单位一律为内蒙古医学院。论文作者签名牲 指导教师签名丛查盈 砷年石月弓日 年莎月, 日 睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究 视神经(,,,,; ,,,,,，,,)损伤的原因很多，如缺血、高眼压、眼外伤等都会造成视神经损伤。近年来，交通运输及体育事业不断发展，外伤 性视神经病变有逐年增加的趋势，尤其是眼部感染性疾病治愈率的明显提高，外伤性视神经病变引起的不可逆转的视力丧失问题显得更为突出。视神经的再生，指视神经轴突的再生，由于作为中枢神经系统一部分的视神经损伤后缺乏神经修复和再生所需的微环境，因此视神经损伤后的治疗和功能恢复是临床上的一大难题。 睫状神经营养因子(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ,,;,,,，,,,,)是,,,,年被,,,,,,,发现，,,,,年由,,,,,,从小鸡眼的抽取物中分离出的一种酸性蛋白质，它能促进鸡胚睫状神经节神经元存活并因此而得名。近年的研究表明，,,,,具有多种生物学效应，被认为是唯一的能促进视网膜神经节细胞(,,,,)存活及轴突再生双重作用的神经营养因子，而且是通过促进大量轴突向远端延伸来增强再生的?,。玻璃体腔内持续注射,,,,，可能通过:?替代靶源性的神经营养因子或促进其逆向运输，增强,,对原发损伤尤其是继发损伤的抵抗能力，减轻轻微损伤和未损伤的神经元继发变性、凋亡，从而起到对,,较长期的保护作用，而延缓了神经组织变性的进程，保存相对较多的神经纤维;?增强其再生反应，促进不全损伤后再生轴突的延长;?促进轴浆运输恢复，加强神经细胞内物质合成和新陈代谢，调节神经营养，缓解组织水肿，减轻局部压力，改善神经组织内环境，而有利于病变的神经纤维功能的恢复。有研究发现，,,,,刺激轴突再生的作用与生长相关蛋白一,,(,,,,,, ,,,,;,,,,, ,,,,,,,一,,，,,,一,,)有关，认为,,,,可能是通过上调,,,,,,基因的表达而促进,,轴突再生的, ,,,一,,是一种神经特异性的质膜磷酸蛋白，被认为是神经生长发育和再生的分子标记物，它广泛分布在生长、发育中的胚胎神经系统中，一旦神经系统发育成熟后它的表达水平就变得很低甚至消失，而在成年动物和人神经系统损伤后的再生过程中重新表达。 闪光视觉诱发电位(,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,，,—,,,)是闪光刺激视网膜后，在大脑枕叶皮层测出的一组电信号，反映视觉信息在视路中传导的总体情况，是评价视功能的重要参考指标。由于其具有非侵人性、客观性、高敏性、可重复性的特点，而且对受试对象的合作性要求较低，因而被广泛应用于动物实验中，以检测视神经纤维的损伤程度。其观察指标是主波的潜伏期和幅值，潜伏期长短取决于髓鞘的完整性和功能状态。 , 凼蓥点匿堂瞳塑?婴塞生堂焦迨塞《墨嫂,生,振幅高低取决于轴索的功能状态。 ,(材料与方法 ,。,仪器与试剂 ,(,(,仪器 中号显微盎管夹(,,,,,,):上海医疗器械公司 眼科显微手术器械:苏州医疗器械厂 ,,,,直接检眼镜:苏州六六视觉科技股份有限公翟 ,,微升微量进样器:上海高鸽公司 ,,,一,,,,型切片视:,,,,, ,,，,,,, ,,,,,德国 双目光学显微镜:日本,,,,,,,公司 荧光照微镜(,,,,,,,—,,,,):县本,,,,,,,公司 爱仕达高压锅:浙江爱仕达集团有限公司 电热恒温水浴锅:北京长安科学仪器厂 隔水式电热恒温培养箱:上海医疗器械七厂 电热干燥箱:天津市三水科学仪器有限公司 摊片烤片机:天津久圣医疗电子仪器有限公司 ,,,,,,,,全自动眼电生理仪:重庆康华公司 ,(,。,试剂 睫状神经营养因子冻干粉:美国,,,,,公司 速眠薪注射液:军事医学科学院军事兽嚣研究所 封闭用正常兔血清(原液):北京博奥森生物技术有限公司 神经生长相关蛋白一躬(抗体):薯匕京博奥森生物技术有限公司 荧光索标记小鼠抗兔，,,:北京博奥森生物技术有限公司 托百? 眼膏:美国爱尔康公司 ,(,,氯霉素滴眼液:沧州光明药业有限公司 硫酸庆大霉素注射液:安徽联谊药韭股份有限公霹 地塞米松注射液:安徽联谊药业股份有限公司 薹。,实验动物及分组 成年日本青紫蓝兔,,只，由内蒙古医学院动物实验中心提供。其中随机抽取两只为正常对照组，不做任何处理，予实验结束时进行,,观察及免疫荧光检测;其余,,只为凼錾查匿堂瞳亟?班塞生堂焦迨塞(兰,堕生,实验对照组，其中右眼为实验组，左眼为对照组。实验期间动物在同一条件下由内蒙古医学院动物实验中心喂养。 ,(,动物模型制作及给药方式 ,(,(,模型制作:速眠新注射液(,(,,,(,,,,,,)耳缘静脉麻醉兔后取侧卧位，置开睑器，于颞上方剪开球结膜，在上直肌及上斜肌肌止端处作牵引缝线，将眼球向眶前外下方向拉，以暴露视神经，向深部分离视神经约, ,,,,,，于球后, ,,,,,,处用显微血管夹夹持视神经,, ,，庆大霉素生理盐水冲洗眶腔，缝合球结膜，结膜下注射庆大霉素(,万,)和地塞米松(,(, ,,)，滴,(,,氯霉素滴眼液眼液，结膜囊内涂托百士眼膏，待苏醒后放回笼内，观察伤眼瞳孔散大，直接对光反应消失，眼底检查视网膜血管无出血及梗塞，无眼球突出及眼睑闭合不全者纳人实验, ,(,(,给药方式:动物麻醉后，用消毒后的,,山微量进样器吸取药物，于兔眼球上方赤道部(距角巩膜缘, ,,,)斜向后下方进针，于瞳孔直视下观察针尖避免损伤晶体。实验组于伤后即时、,、,、,,天玻璃体腔内注射,,,, ,,,，,(,斗,,一)，对照组于同时间点玻璃体腔内注射等量双蒸水, ,(,视神经纵切片制作 ,)取材:分别在对照组和实验组建立,,损伤模型后,、,、,,、,,天和正常对照组,,天时散瞳直接检眼镜检查后，符合要求的于耳缘静脉麻醉动物后，开胸，灌注针头经左心室插管人升主动脉，先快速灌注,(,,生理盐水,,, ,,，同时剪破右心耳放血，待冲出液体变澄亮时，再用,?,,多聚甲醛磷酸缓冲液,,, ,,灌注固定, ,，摘出眼球及球后视神经, ,,; ,)组织固定:在,,,甲醛磷酸缓冲盐固定液,,,, ,,、甲醛,,, ,,、,(, ,,,,, ,,,,,,, ,,混合液中将眼球固定,, ,; ,)脱水:流动自来水冲洗,, ,，酒精常规逐级脱水:,,,乙醇过夜;,,,乙醇, ,;,,,乙醇, ,;,,,乙醇放,?冰箱中过夜;,,,乙醇， , ,;,,,乙醇?, ,; ,)修整:沿视乳头根部剪去眼球部分; ,)脱水:,,,,乙醇， , ,;,,,,乙醇?,, ,,,继续脱水; ,)二甲苯透明, ,,,; ,)浸蜡:，号蜡(熔点,,,,,?),, ,,,;?号蜡(熔点,,—,,?),, ,,,;?号蜡(熔点,,—,,?),, ,,,; ,)包埋:将视神经用?号蜡包埋，备用, , 煎鐾遘医堂瞳塑?堑窒垡堂鱼迨塞鳇,塑生, ,(,视神经石蜡切片,,染色 ,,染色方法如下: ,)切片和烤片:切片机连续切片，厚,,，,，,,?水浴中展片，酏，?烤片,, ,,,,; ,)二甲苯脱蜡:二甲苯， ,, ,,,,二甲苯?,, ,,,; ,)酒精复水:,,,,乙醇至, ,,,;,,,,乙醇鼗, ,,,,;,,,乙,,,, ,,,乙醇?,,,,;,,,乙醇, ,,,, ,)染色:苏木素染色, ,,,，用清水漂洗,, ,，,,盐酸酒精中浸一下(分化)，蛊来水漂洗,,, ,,,,，伊红染色,, ,; ,)酒精脱水:,,,乙醇中浸一节;,,,乙醇至中浸一下;,,,乙醇?中浸一,;,,,,乙醇， , ,,,;,,,,乙醇?, ,,,; ,)二甲苯透明:,,甲苯重,,,,,;,甲苯?,, ,,,; ,)中性树胶封片。 视享，,,经,,染色后，光镜下进行损伤局部形态学观察,。, ,(,免疫荧光检测 免疫荧光检测具体步骤如下: :,)切片和烤片:切片机连续切片，厚,,，,，,,?水浴中展片，??烤片,, ,,,; ,)二甲苯脱蜡:二甲苯王,, ,,,,;二甲苯?,, ,,,; ,)酒精复水:,,,,乙醇， , ,,,, ,,,,乙醇蠢, ,,,;,,,乙,,,, ,,,乙醇?,赫,;,,,乙醇, ,,,; ,)高压锅修复:切片用双蒸水洗,次，再用,,,洗,次，每次, ,,,，置柠檬酸缓冲液 中，放人高压锅，喷气后开始计时,, ,,,，室温冷却, ,)倒掉柠檬酸缓冲液，用双蒸水洗,次，再用,,,洗,次，每次, ,,,, ,)除去,,,，正常兔血清封闭，,,?孵育, ,,,, ,)倾去血清，勿洗，滴加一抗,,,一稻稀释液(董:,,,)，,,,过夜, ,)切片,,?复温, ,，再用,,,洗,次，每次, ,,,。 ,)滴加疆和,，,,标记的荧光素二抗，,,?放置,, ,,,后，再用,,,洗,次，每次,,,,,, ,,),,,缓冲甘油封固。置予荧光显微镜下观察, ,，,,荧光标记的,,,一,,呈绿色，,，荧光染料在细胞核上呈红色，红色与绿色重亵处显示为棕黄色, ? ,盎蓥查堡堂毽亟?壁塞垒堂垡途銮,兰塑,釜～(孽腻土(:, ,，,(),,,检查„ 动物实验组及对照组予损伤蓠、损伤后酃刻及处死前进行,—,,,检测。检查一眼时，不透光眼罩遮盖对侧眼。速眠新注射液(,(,,,(,,,,,,)耳缘静脉麻醉，剔除兔前囟髑视皮质所对应处体表毛，以减少干扰电阻，复方托晶酰胺眼液散瞳，置于暗室内暗适应如,,,，固定于兔板„;各电极与针灸针相连，作用电极针灸针于枕骨粗隆后侧, ,,,,处(槐皮质对应医)刺人皮下，使针尖与枕骨粗隆后侧壁骨膜槌贴;参考咆极针灸针于两眼眶上缘中点连线的中点后侧, ,,,,处(前囟对应区)刺人皮下，使针尖与鼻骨骨膜相贴;地电极置于同侧耳廓，使针尖穿过耳缘，各电极针均固定牢固。采用全视野闪光刺激器，白光刺激，闪光强度,档，刺激频率, ,,，通频带宽,(, ,,, ,,，叠加次数,,,次，分析时间,,, ,,，每次观察并记录稳定波形,条曲线，分别编号储存,分柝各组中,，波潜伏期及波幅平均值的差别,。 ,(,统计学处理 将数据输入计算机，采用,,,,,,(,软件进行统计学分析。实验组与对照组在相同时间点的差异性比较采用配对样本,检验，结果以均数,,标准差(,土，?表示;各组内部不同时阀点的,—,,,分布变化采用方差分析口同时绘制图表，分析数据。 ,(。结(果 ,。,褫神经,,染色属部形态学变化 ,(天时视神经出血、水肿、空泡样变，毛细血管扩张，束间膜血管周围间隙增宽，间质水肿，神经轴心送嫩现梗死灶，胶质细胞排列紊乱(附图董，,)(;,天时，空泡变性严重，梗死灶扩大，神经纤维稀疏，胶质细胞增生(附图,，,)，实验组与对照组之间无显著差别;,,天时，神经纤维排列紊乱，分布稀疏，纤维束结构尚存，胶质细胞增生舞显，实验组变化轻于对照组(附图,，,);,,天时，损伤区出现胶质瘢痕及毛细血管增生，各类炎性细胞减少，损伤远端星形胶囊缨胞增生，吞噬细胞胞浆空化，轴突变性崩解，,,,,治疗组神经组织变性明显轻于对照组(附图,，,),正常视神经,,染色见附图,, ,(,免疫荧光检测结果 免疫荧光检测结果显示:?视神经损伤后,、,天时，细胞空泡变性严重，神经纤维排列紊乱，,,,一,,在视神经损伤近端鬻性表达，在损伤远端, ,,,,处表达阴性，实验组与哉兆椴钜觳淮螅ǜ酵迹保埃 保保 虎谑由窬 鹕撕螅保刺 焓保 窬 宋 帕薪 徊轿陕遥 鹕私 耍牵粒幸唬矗?，,,性表达减弱，远端,,,处出现局灶性阳性表达，，且实验缰强于对照组(附图,,，,,);?视神经损伤,,天时，轴突变性坏死，神经纤维排列紊乱，分布稀疏， , 也鐾直匡堂睦塑?班塞生堂焦缝皇(～～塑生,视神经损伤远端, ,,处,,,一,,阳性表达显著增加，且实验组明显强于对照组(附图,,(,,)。 ,(, ,—,,,检查结果 视神经损伤后即刻，,—,,,波形几近熄灭，潜伏期明显延长，振幅显著降低(附图,,)。伤后,天，潜伏期两组明显恢复，组间比较差异无统计学意义(,,,(,,)(附图,,);伤后,,天，实验组潜伏期明显恢复，与对照组比较差异有统计学意义(,(,(,,)(附图,,);,,后,,天，实验组潜伏期基本接近损伤前，与对照组比较差异有统计学意义(,,, ,,)(附图,,)。振幅恢复缓慢(伤后,、,天治疗组与对照组比较差异无统计学意义(,,, ,,)(附图,,，,,):,,天以后实验组波幅明显升高，与对照组比较差异有统计学意义(,,,(,,)。见表,，,及统计图，，,。两组分别比较不同时间点的潜伏期及渡幅变化情况，即实验组潜伏期:,,,,,(,,,(,,, ,,,)，波幅:,,,,, ,,,(,,,(,,,),对照组潜伏期:,,,,, ,,,(,,, ,,,)，波幅:,,,,, ,,,(,,, ,,,)。损伤前,,一,,,波形见附图,,。 表,实验眼与对照取,—,,, ,，渡潜伏期变化(,?,，, ,直鐾直蜃兰隆塑?堑嚣笙堂篮逾塞,垫螋笙, 毫,实验暇与对照暇,—,,, ,，波馥?变化(,?,。” 组别 例数实验组 对照组, , 损伤前 ,, ,, ,,?, ,, ,,(,,?【(,, ,(,,, ,(,,, 损伤即时 ,, , ,,?, ,, , ,,?, ,, , ,,, , ,,, , , , , ,,?, ,, ,(,,?, ,, —,(,,, , ,,, , , , ,, ,,?, ,, ,,(,,?, ,, 一, ,,, , ,,, ,, , , ,, ,,?, ,, ,,(,,?, ,, —, ,,, ,(,,, ,, , , ,, ,,?, ,, ,, ,,?, ,, —, ,,, ,(,。, ,(讨论 ,(,动物模型的选择 要深入、细致地研究外伤性视神经损伤(需要建立满足以下要求的动物模型”,:(,)致伤率高，可造成确切的视神经损伤，同时避免损伤视网膜中央动脉及脉络膜血管丛(使损伤因素单一;(,)致伤设备简单，便于操作，创伤小，动物死亡率低，存活时间长;(,)致伤状态最大程度接近临床受伤状态(以保证实验研究的临床意义;(,)能精确标定致伤强度，并在致伤强度及损伤程度之间建立联系;(,)选择的实验动物应满足标准化、易于饲养、便于观察、经济、与临床相关性好。 本实验采用结膜人路，充分暴露视神经后。用血管夹钳夹视神经制作兔视神经损伤模型(具有“下优点;(,)采用结膜人路对动物的刨伤小，动物存活率高;(,)夹持伤模型是国内外公认的比较精确的视神经损伤模型，在直视情况下进行操作(致伤确切，与临床上视神经损伤造成的视神经压迫接近;?应用压力恒定的血管夹，可控性好，损伤程度可具体化;(,)兔视网膜动脉在距眼球不到, ,,处进人视神经下缘中部，本实验夹持部位统一选择在球后, ,,处，不会影响眼球和视神经的血供，同时夹持伤保持了视神经鞘膜的完整性;(,)应用血管夹造成损伤。设备简单。便于操作，易于统一;(,)选择兔作为实 囱鐾直匡堂瞳塑?婴塞生堂焦迨塞,呈,塑堡》验动物，因其体积大，方便手术操作;,;珏取材，„个体差异小，手术耐受性好，易于饲养, ,(,,视神经损伤后视神经 的形态学变化 在神经系统相互连接的网络中，某一条神经元的轴突受到原发损伤后，这种损伤作用会沿着轴突向损伤的两端延伸，产生正向和逆向的神经元的影响，包括神经传导功能降低、神经轴突的轴浆运输障碍、神经元的溃变、凋亡和坏死等，从面引起继发损伤，原发损伤与继发损伤相互促进，导致病变进一步发展口一,。， 本实验中视神经钳夹伤后早期局部表现为无菌性炎性改变，损伤处视神经出现水肿、空泡样变，毛细血管扩张，髓鞘松解等可能与视神经的壹接损伤和局部缺血有关;损伤后期，视神经纤维稀疏排列紊乱，脱髓鞘现象加重，轴索中心出现明显的坏死灶，胶质细胞增生明显，这些改变与细胞毒索的释放、脆内钙离子的超载、宣由基和谷氨酸水平升高等导致继发损伤的进行性加重有关，实验发现，实验组与对照组组织学变化在早期(,、,天)时差异不明显，而在后期(,,、,,天)时出现明显差异，说明,,,,可以通过阻止视神经的继发性损害来达到修复视神经的作用。 高鹰【,,等用无翎血管夹夹持视神经后动态观察不同时阐段视神经的病理改变，结果发现，视神经在钳夹损伤,, ,内就出现脱髓鞘改变，神经纤维束间空泡样改变，局灶性坏死，且随时闻推移进一步加重，因此强调在临床上视棒经损伤确诊后，应在伤后,,,内治疗，方能达到较理想的治疗效果，更好恢复视觉功能。因此，本实验选择在伤后即时即给予玻璃体腔内注射,,,,治疗, ,(,视神经损伤后视觉诱发电位(,—,,,)的改变 正常视神经纤维在筛板后是有髓鞘的，其神经冲动的传导是跳跃式的。视神经损伤时，髓鞘变性脱落，在脱髓鞘区，神经传导改变为由局部电流以连续方式进行，传导速度比跳跃式明显减慢，出现潜伏期延迟。视神经纤维水肿、受压，轴索传递视觉信息及运输营养因子的功能降低，出现振幅降低【,,,;本实验中，伤后即时,，,,,波形几近熄灭，在伤后,„?,(,周，随着轴突水肿消退、轴浆运输功能恢复及轴突再生，,二,,,潜伏期及波幅部分恢复，且实验组显著高于对照维，结果经统计学分析差异有统计学意义(,,,(,,)，提示,,?，甲可能通过促进轴浆流恢复，减少继发损害，保存相对较多的神经轴突，同时促进再生纤维的延.