脑缺血耐受模型中海马胰岛素受体的表达变化

脑缺血耐受模型中海马胰岛素受体的表达变化 脑缺血耐受模型中海马胰岛素受体的表达 变化 ? 938?中华老年心脑血管病杂志2008年12月第10卷第12期 ChinJGeriatrHeartBrainVesselDis,Dec2008,Vol10,N.?12 基础研究. 脑缺血耐受模型中海马胰岛素受体的表达变化 徐蔚海,黄一宁,吴立文 摘要:目的观察小鼠脑缺血耐受模型中胰岛素受体表达和认知功能变化.方法取44只雄性 CD1小鼠腹腔注 射3-硝基丙酸(3一NP)建立动物模型,根据注射时间将18只小鼠分为未注射组,注射后1h 组和注射后12h组,每 组6只.采用免疫印迹方法观察3组小鼠海马胰岛素受体的表达.另将26只小鼠分为对照组 (未注射3-NP)和模 型组(注射3-NP),每组13只.采用Morris水迷宫观察两组小鼠记忆能力.结果未注射组小鼠 海马胰岛素受体 表达为(O.48+0.14)U,注射后1h为(O.28+--0.1)U,12h为(O.26+-0.1)U.与未注射组比较,注射 后1h组和 注射后12h组胰岛素受体均显着降低,差异有统计学意义(P<0.05).模型组注射3-NP后6h 和相应时间点对 照组小鼠寻找实台时间分别为(59.0+-0.5)s和(40.5+-0.1)s,注射3NP后12h和相应时间点对 照组小鼠寻找 实台时间分别为(42.O?o.3)s和(30.5+-0.5)s,模型组高于相应时间点对照组,差异有统计学意 义(P<O.05). 结论脑胰岛素受体下调有可能是一个未被发现的脑缺血耐受的负面作用. 关键词:脑缺血;海马;受体,胰岛素;认知 中图分类号:R743.3文献标识码:A文章编号:1009—0126(2008)12—093803 Theexpressionofinsulinreceptorinbrainischemiatolerancemodel xuWe~一hai,HUANGYi—ning,WULi—wen PPki”gUnin0”MedicalCollegeHospital,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing】 00730,China) Abstract:ObjectiveToobservetheinsulinreceptor(InsR)expressionandtheaccompaniedcog— nit~vefunctionchangeinmousebrainischemiatolerancemode1.MethodForty—fourCD1mice wereselectedinthisstudy.Hippocampusweretakenfromcontrolmiceandthemicepretreatedin wi0with3-nitropropionicacid(NP)injection1hor12hpriortosamplepreparation(6micein eachgroup).WesternblotwasperformedtomeasuretheInsRexpression.Morrismazetestwas Derformedtoevaluatethememoryfunctioninother2groups(13miceineachgroup,includingthe controlgroupand3-NPinjectiongroup).ResultsComparedwiththecontrolmice,expressionof InsRwassignificantlyreducedinhippocampusofmicelhafter3-NPadministrationandmain— ta~nedthesamelowlevel12haftertheinjection[-(0.48?0.14)Uv3”(0.28?0.1)Uand(0.26? 0.1)U,P<0.05].Micein3-NPinjectiongrouptooksignificantlylongertimetofindtheplat— form.thedurationbeing(59.0?0.5)sand(42.0?0.3)sat6hand12haftertheinjection,while forcontrolgroup.thecorrespondingdurationwas(40.5?0.1)sand(30.5?0.5)s(P<0.05). ConclusionInsRdownregulationmayhavenegativeeffectoncerebralischemictolerance. Keywords:brainischemia;hippocampus;receptor,insulin;cognition 长期以来,脑被认为是胰岛素不敏感的器官. 脑胰岛素信号系统,包括胰岛素受体,胰岛素受体底 物及其下游的复杂网络系统,它在学习,记忆,神经 营养,凋亡等方面有着极其重要的作用引.脑胰 岛素受体是激活脑胰岛素信号系统的靶点,是一种 基金项目:教育部博士点新教师基金(20070023060) 作者单位:100730北京,中国医学科学院北京协和医院神经科(徐 蔚海,吴立文);北京大学第一临床医院神经内科(黄一宁) 膜受体.3一硝基丙酸(3-NP)是线粒体琥珀酸脱氢 酶抑制剂,它可以使脑组织发生缺血缺氧的病理改 变;我们最新研究发现:CD1小鼠腹腔注射3-NP诱 导脑缺血耐受后1h,出现了小鼠海马的胰岛素受 体下调,而在额叶,基底节区,小脑半球则无这一改 变口].本研究着重观察了小鼠腹腔注射3一NP后胰 岛素受体下调是否具有延续性,同时观察小鼠伴随 海马胰岛素受体下调之后是否有学习能力,记忆能 力的下降. 中华老年心脑血管病杂志2008年】2月第l0卷第12期(-’lainJGeriatrHeartBrainVesselDis,Dec2008,,r0J10,No,12 1材料与方法 1.1主要材料PVDF膜购自Invitrogenlifetech— nologies公司.一抗insulinRb(C一19)和肌动蛋白 (actin,1-19)购自SantaCruzbiotechnology公司. 二抗Anti—RabbitIgG(NA934V)和Anti—goatactin 购自Amershambiosciences公司.水迷宫采用德 国TSE公司Videomot2通用小动物行为活动记录 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 系统. 1.2方法 1.2.1动物模型制备和分组雄性CD1小鼠44 只,中国医学科学院基础所动物室提供.体重25, 35g,用3-NP(20mg/kg)腹腔注射,pH7.注射 后,颈部离断处死小鼠.根据注射时间将18只小鼠 分为未注射组,注射后1h组和注射后12h组,每 组6只,采用免疫印记法观察小鼠海马胰岛素受体 的表达;另将26只小鼠分为对照组(未注射3-NP) 和模型组(注射3-NP),每组13只.采用Morris水 迷宫观察模型组注射3-NP后6,12h找寻实台时 间,并分别与对照组相应时间点进行比较,评价其认 知功能.所有操作严格按照本研究所的规范和实验 动物法规进行. 1.2.2Westernblot检测胰岛素受体的表达提 取小鼠海马(包括海马和齿状回).标本组织用 3001000l缓冲液(TRIS—C162.5mmol/L,2 SDS,10蔗糖,蛋白酶抑制剂0.14ul/mg),混 匀,离心20800r/rain,20rain,上清液储存在一 8O?冰箱待测.利用BSA建立 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线,蛋白的量 由ABC蛋白检验反应系统粗测.每个标本取2O g,与同样的loading缓冲液混合后95?加热5 min,放置于冰上冷冻后,在7.5SDS中进行电泳 (100V,90rain).转膜过程使用PVDF膜(O.2/*m poresize),30V,90min.此后将膜在室温下放置 于TBS(pH7.6,含5脱脂牛奶)中孵育1h.一 抗4?孵育(1:400)过夜后,将膜进行3次漂洗,每 次10min(漂洗液:PH7.6,TBS,0.05Tween 20).二抗和Anti—goatactin,浓度均为1:10000, 溶于5牛奶后室温下震荡孵育1h后,3次漂洗, 每次10min.最后用ECL成像法进行组织化学免 疫成像.条带的相对吸光度值测量使用光学分析系 统.胰岛素受体的量由l~-actin的相对值决定. 1.2.3Morris水迷宫行为测定在无特定病原体 (即SPF级)环境下进行水迷宫实验,通过计算机对 实验小鼠游泳轨迹进行记录,分析处理.对照组和 模型组小鼠用5天时间进行水迷宫训练,每天分 上,下午两个时间段训练,每段训练4次,小鼠分别 从4个不同的人水点入水,记录5天训练期间小鼠 每次寻找平台所需的潜伏期. 1.3统计学方法所有数据采用SPSS13.0统计 软件.组问比较采用单因素方差分析,多组比较采 用Duncan检验,Pd0.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1小鼠海马胰岛素受体的表达未注射组小鼠 海马胰岛素受体表达为(0.48?0.14)U,注射后1 h组为(0.28?0.1)U,注射后12h组为(0.26? 0.1)U.与未注射组比较,注射后1h和注射后12 h的胰岛素受体均下调,差异有统计学意义(P< 0.05),注射后1h组与注射后12h组比较,差异无 统计学意义(P>0.05,图1). 胰岛素受体 2 i:l:术ii-射组;2:注射后lh组;3:注射后l2h组 图1小鼠海马胰岛素受体的表达 2.2小鼠水迷宫实验结果比较模型组小鼠注射 3-NP后6h和相应时间点对照组小鼠寻找实台时 间分别为(59.0-0.5)S和(40.5?0.1)S,注射 3-NP后12h和相应时间点对照组小鼠寻找实台的 时间分别为(42.0?0.3)S和(30.5?0.5)S,模型 组均高于相应时间点对照组,差异有统计学意义 (P<0.05) 3讨论 我们的研究表明,小鼠在3-NP诱导脑缺血耐 受后海马胰岛素受体下调,并且持续至12h.同 时,水迷宫实验也表明,模型组小鼠注射3-NP后6, 12h与相应时间点对照组比较,出现了寻找实台时 间的延长,提示小鼠记忆功能下降. 近年在认知功能领域发现,脑胰岛素信号系统 具有突出的地位.胰岛素激活脑胰岛素信号系统可 以提高小鼠的记忆持久力,显着改善海马损伤所造 成的记忆功能障碍[4].以往的脑缺血耐受研究只重 视动物在组织病理水平上的改变,未研究或忽视研 究蛋白质水平和整体认知功能上的损益.本实验采 用3-NP缺血预处理剂量,即在该剂量下脑组织不 中华老年心脑血管病杂志2008年12月第1O卷第12期 ChinJGeriatrHeartBrainVesselDis,Dee2008,Vol10,?.12 会产生病理意义上的损害,却可以对随后的严重脑 缺血有耐受作用.但是.鉴于上述脑胰岛素信号系 统对认知功能的重要作用,本研究所发现的小鼠海 马胰岛素受体下调,有可能是脑缺血耐受一个未被 发现的负面作用.任何的治疗手段都有其有效性和 负面作用.目前,皮质功能越来越得到医学界的重 视,因为它可以严重影响患者的生活质量.尽管海 马对3-NP的敏感性可能是一种缺血耐受的正常反 应,而且可能会抵抗随后的缺血缺氧损伤.但是,海 马的胰岛素受体同样有着很重要的生理功能.如果 长期应用脑缺血预处理亚损伤刺激来控制脑卒中复 发,其代价是患者的认知功能下降. 本研究有一定的局限性,我们未能对哪些类型 的细胞存在3-NP注射后胰岛素受体的变化及胰岛 素受体RNA水平的变化做出相应的研究.3-NP 注射后胰岛素受体的具体形成机制也不在本研究范 围之内.今后,我们将对此作进一步研究. 参考文献 [13PlumL,SchubertM,Bruningjc.Theroleofinsulinreceptor signalinginthebrain.TrendsEndocrinolMetab,2005,16:59— 65. EelHoyerS.Glucosemetabolismandinsulinreceptorsignaltrans— ductioninAlzheimerdisease.EurJPharmacol,2004,490:115— 125. E3]XuwH.HuberR,RiepeMw.Genderandregion—specificex— pressionofinsulinreceptorproteininmousebrain:effectof mildinhibitionofoxidativeph0sph0rylation.JNeuralFransm, 2007,l】4:373-377. E4]ZhaoWQ,(:henH,QuonMJ,eta1.Insulinandtheinsulinre— ceptorinexperimentalmodelsoflearningandmemory.EurJ Pharmacol,2004,490:7l_81. (收稿日期:2008一O4—29) (本文编辑:唐丽君) . 病例 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 . 永久性起搏器安置围手术期介导’15,6动过速七例 陆尚彪,刘晓红,舒红,李毅刚 1临床资料 2004年1月,2007年12月在我院安置双腔起搏器 (DDD)的患者共315例,其中男性161例,女性154例.年 龄(65-+-11)岁.有7例(2.2)出现起搏器介导性心动过速 (PMT).男性4例,女性3例.年龄62,79(71土7)岁.完 全性房室传导阻滞4例,慢,快3例.冠心病4例,病态窦 房结综合征3例.7例快速心律失常,其中4例为安置起搏 器于囊袋中时,3例为术后.临床表现为心悸,胸闷,严重者 还有气急,血压偏低.经及时对患者行起搏器程控(延长心 室后心房不应期,降低上限频率,或改变工作模式)心动过速 得到纠正.伴有心力衰竭的3例患者,通过强心,利尿等治 疗,症状得以控制,预后良好. 2讨论 PMT是DDD起搏器患者特有的并发症,发生原因较 多.常见于窦性心动过速,房性心动过速,有室房逆传功能, 导致发生PMT.一旦发生PMT,应及时处理.发生PMT 时除了患者有临床症状外,主要从心电图上识别.结合本组 7例快速心律失常,术中4例发生PMT,将起搏器一放人囊 袋即发生心动过速,心率为起搏器的上限频率(120次/ min).心电图为心房感知心室起搏.将起搏器拿出囊袋,恢 复原来缓慢心率.静脉滴注异丙肾上腺素,改善了室房逆传 作者单位:200092上海,上海交通大学医学院附属新华医院心内科 功能导致了PMT.停止静脉滴注后,2例恢复正常.2例通 过程控起搏器参数,延长心室后心房不应期,使它长于室房 逆传时间而解决.这是简单而常用有效的方法.术后发生 PMT3例,1例为室房逆传诱发,1例为房性心动过速诱发, 1例为诱发窦性心动过速.心房波被起搏器心房电路感知 后触发心室起搏形成的PMT,快速房性心律失常不终止,心 动过速也不会终止.心电图显示:心房率不超过起搏器上限 频率时,起搏的心室频率通常均齐.心房率超过了.起搏器上 限频率时,可出现起搏文或莫氏或转为DDI起搏.紧急情 况下,用磁铁消除起搏器跟踪功能,降低起搏器上限频率,使 心室率不会过快,但不会根除PMT.如将起搏器程控为 DDI,DVI,或VVI模式,起搏器在下限频率工作,PMT将被 终止.术后3例PMT伴有心力衰竭(心悸,胸闷,出冷汗,呼 吸困难,肺部有哮鸣音).通过程控降低起搏器上限频率从 12O,90次/min,加上强心,利尿,扩血管,症状得到缓解. 心排量是心率与每搏量的乘积.心排量随着起搏频率的增加 而同步增加,但”高”的起搏频率时心排量反而下降.尤其对 完全性房室传导阻滞的老年患者,安置DDD起搏器后,为了 使心率不过快,控制室上性心率失常尤为重要,如心房颤动, 心房扑动,室上性心动过速.除了程控起搏器参数外,口服 药物预防和治疗,或通过射频消融来根治. (收稿日期:200806—30) (本文编辑:蔡振国)