二氧化氯对灵芝菌丝生长的影响

二氧化氯对灵芝菌丝生长的影响 作者:党建章, 朱海兰～ 杨智伟～ 黄仕容 【关键词】 二氧化氯,,,灵芝,,,菌丝生长 摘要:目的探讨二氧化氯作为消毒剂应用于灵芝栽培和液体培 养。方法平板法测定灵芝菌丝的生长和摇瓶发酵法测定灵芝的生物 量。结果在未高温灭菌的培养基中添加 0.7%,v・v-1,的二 氧化氯～灵芝菌丝生长良好,灵芝菌丝液体发酵重量接近对照组。结 论为灵芝栽培和液体发酵培养奠定基础。 关键词:二氧化氯, 灵芝, 菌丝生长 The Effects of Chlorine Dioxide on the Mycelium Growth of Ganoderma lucidum Abstract:ObjectiveTo explore the application of chlorine dioxide as antiseptic in cultivation and submerged cultural of Ganoderma lucidum.MethodsThe mycelium growth of Ganoderma lucidum was determined by plate culture method and biomass by submerged culture method. ResultsMycelium of Ganoderma lucidum grew fine and the weight of it came close to the contrast when 0.7% ,v・v-1,chlorine dioxide was added to the medium which was not sterilized by high temperature. ConclusionThis provides a firm foundation for the cultivation and submerged culture of Ganoderma lucidum. Key words:Chlorine dioxide; Ganoderma lucidum, Mycelium growth 灵芝Ganoderma lucidum作为药用真菌其功效已家喻户晓。近 年来灵芝作为保健食品和美容化妆品的添加剂～其应用日益广泛。传 统方法栽培灵芝～培养料均要高温灭菌。笔者在筛选灵芝培养的消毒 剂时～发现二氧化氯对各类微生物都有较强的杀灭和抑制作用～而且 对人畜无害,1,～但对灵芝菌生长却作用甚微。本文初步研究了不同 浓度二氧化氯对灵芝菌丝生长的影响～以及7种不同灵芝菌耐受二氧 化氯的能力。 1 材料与仪器 1.1 供试菌种 赤芝,Ganoderma.lucidum,AS. 565～由本系 提供。美国灵芝、日本灵芝、惠州灵芝、信州灵芝、紫芝、黑芝均购 自山东金乡真菌研究所。杨树菇、云芝、茯苓、茶新菇、金针菇均购 自华中农业大学。霉菌,黑曲霉、根霉、青霉,～细菌,大肠杆菌、枯草杆菌,由本系提供。 1.2 斜面培养基,%,马铃薯,去皮,20,葡萄糖 2,KH2PO4 0.3,MgSO4・7H2O 0.15,琼脂 2,pH6.5。 1.3 摇瓶种子和发酵培养基,%,葡萄糖20 g,蛋白胨10 g,酵母膏2 g,水1 000 ml,pH自然。 1.4 药品二氧化氯,ClO2,为深圳市科瑞德消毒用品科技开发有限公司产品～商品制剂 ClO2含量为2%,W・v-1,～用前加适量柠檬酸活化。其他化学试剂均为国产分析纯。 1.5 仪器恒温培养箱 PYX-DHS-60X75-BS 上海跃进医疗器械厂～高温消毒柜 TOMYSS-325 TOMY KOGYO CO.LTD.日本～MFS-11多功能三维旋混仪,摇瓶机, 深圳潘西诺生物科技有限公司。 2 方法 2.1 ClO2对霉菌和细菌的抑制作用每个培养皿中加入20 ml斜面培养基～趁热加入 ClO2～摇匀～使 ClO2制剂最终浓度为0.1%，1.0%,每100 ml培养基中加 ClO2制剂0.1 ，1.0 ml,～以未加 ClO2 并经高压灭菌过的培养基作为对照。涂布法接种霉菌和细菌～每个浓度每种菌各接3个培养皿～霉菌置于28?、细菌置于37?恒温培养～隔天观察生长情况～培养5 d。 2.2 ClO2对赤芝的抑制作用 方法同上述～ClO2浓度为0.1%，5.0%～每个浓度设3个重复。接入赤芝菌丝～置于28?恒温培养～隔天观察菌丝生长情况～培养10 d。 2.3 ClO2对其他种灵芝及食用菌的影响根据上述实验结果～确定培养赤芝时 ClO2的最适浓度为0.7%。在斜面培养基中～加入 ClO2～使其最终浓度为0.7%。接入其他灵芝菌和食用菌～每种菌种设3个重复～培养8，12 d。 2.4 ClO2对灵芝摇瓶培养的影响 将葡萄糖、蛋白胨培养基1 000ml装入3 000 ml三角瓶中～加入0.7% ClO2～立即用保鲜膜密封,摇匀,放置1 h～然后用灭过菌的棉塞替换保鲜膜～另设对照组～接入赤芝液体菌种～接种量10%。放入多功能三维旋混仪中培养～摇瓶温度30?、转速为150 r/min。摇瓶3，4 d～发酵液有浓厚的灵芝特有的气味～并伴有大量的菌丝球时～可终止发酵。将发酵液在100目筛网中过滤～用自来水反复冲洗～然后将菌丝体置于80?烘干至恒重～称重。以每升培养基中含菌丝干重表示,g・L-1,。 3 结果 3.1 ClO2对霉菌、细菌的抑制作用由表1可知～对照管5 d之内都长满～而0.1%，1.0%的 ClO2对上述微生物有明显的抑制作用。其中真菌比原核微生物耐受 ClO2的能力强。 表1 ClO2对霉菌、细菌的抑制作用,略, +++表示菌丝或菌落长满平板,-表示无菌丝或菌落生长 3.2 不同浓度 ClO2对赤芝的抑制作用由表2得知～ClO2浓度在0.6%，0.7%时对赤芝有一定的抑制作用～使得赤芝萌发比对照晚2 d～但菌丝长满平板的时间均为10 d。ClO2浓度在0.8%，1.0%时～对灵芝的生长有明显的抑制作用～浓度2.0%时完全抑制赤芝菌丝的生长。 根据上述的结果～培养赤芝时～选用 ClO2的浓度为0.7%～此浓度对霉菌和细菌抑制作用强～但对赤芝的生长影响不大。 3.3 0.7% ClO2对其他灵芝菌及食用菌的抑制作用表3中每种菌都设有对照组～其8，10 d菌丝都能长满。表3中0.7% ClO2能完全抑制紫芝的生长～原因还有待进一步研究。另外实验所选用的几种 食用菌都有明显的抑制作用。 表2 不同浓度 ClO2对赤芝的抑制作用,略, +++表示菌丝或菌落长满平板,-表示无菌丝或菌落生长 表3 0.7% ClO2对灵芝菌及食用菌的抑制作用,略, 3.4 ClO2对灵芝液体培养的影响由于多功能三维旋混仪每次只能放2个3 000 ml的三角瓶～因此摇瓶试验需分批进行。结果见表4。 表4 灵芝菌在摇瓶培养基培养的结果,略, 由表4得知～对照组的平均产量是4.66g～实验,批号,组平均的产量是4.38g。实验组在摇瓶过程中没有染菌～只是发酵周期比对照组多1 d。实验中发现:实验组的摇瓶棉塞需经高温灭菌～提示发酵罐实验需要无菌空气。摇瓶培养基配比和发酵罐试验有待进一步研究。 4 讨论 4.1 添加 ClO2的平板应用于灵芝子实体菌丝分离～尤其是野外菌种采集～效果良好。 4.2 ClO2可应用于本实验条件下灵芝菌丝液体培养～工艺简单～生产成本低。 参考文献: ,1, 张 鑫. 二氧化氯的应用和研究,J,.安徽农业大学学报,1996,23,4,:610. ,2, 曾东方～罗信昌. 强力安对食用菌生产中杂菌的毒力测定,J,.微生物学杂志,1998,18,3,:37.