【doc】申克孢子丝菌的体外耐热实验观察

【doc】申克孢子丝菌的体外耐热实验观察 申克孢子丝菌的体外耐热实验观察 乞匏备舒J, l996军10 参考文献 1ChertXP.Behand]ungderon]ychomy~osenthydraz[nhy— drat.Mykosen.i991.34}107 2洪盈,剂宗正.吕乃群,等.AF821的化学台成,抗真菌活 性硬其对真菌细胞韶微结构的影响沈阳药学院,1988, 5180. },一j占. 一 359 3卢玉娟,武庆科,李鹤玉,等.土槿皮等三种中药抗真菌作用 的超舷结构观察中华医学杂志,1988,63;l4. 4赵晓秋,田家畸,宋军,等.小檗碱体外抗真菌作用初探中 国皮肤性病学杂志,1992,6,80 (收稿:1995—12—11修回}199809—20) 申克孢子丝菌的体外耐热实验观察 李福秋金学洙 申克孢子丝菌是孢子丝苗病的病原菌,该菌为双 相性真菌,率实验通过不同的温度刺激体外培养的酵 母型孢子丝苗,观察其形态结掏的变化,生长繁殖规律 及最低温度的致死率,进一步探讨孢子丝菌病温热疗 法的作用机理,以对孢子丝菌病的治疗提供新的方法. 一 ,资料和方法 筛选1倒固定型耗子丝菌病患者皮损娃组织块及 渗出液,用抄堡培养基27_c培养一周,将此菌落接种在 脑心葡萄糖血琼脂培养基(BHI)上,36_c培养一周.以 此菌株做为车次实验的实验菌株.将此苗株接种在 BHI上,分别放在35_c,s6_c,s7?,38?,39_c,4O?, 41_c,42_c恒温箱内各培养一周后取少许苗落做涂片 及染色检查,光镜下观察其形卷结构并计算出芽率及 孢于平均体积,荐分别将上述各个温度培养一周的菌 株做微培养和逆培养,均培养一周进行观察 二,结果 35?培养一周的孢子丝菌为白色酵母样菌落,棘 片染色观察,见大量圆形,椭圆形孢子,孢子发芽形成 较长的菌丝体,有时一个孢于同时发出多个芽,出芽率 为26.36"C,37"C培养一周的苗落形态及体积基本相 同,孢子面积分别为2.5m×4.0pm,2.5m×3.8#m, 出芽率分别为22,20,微培养一周均见典型孢子丝 菌的形态结构,逆培养一周均为生长良好的菌落. 38"C,39"C培养一周的苗落直径变小,面积分别为 4_5,gm×8.5#m,6.5,gm×12m,出芽率分别为8, 2,且39?培养的孢子中心出现明显的空泡,微培养 38'C时,见少数典型结构.39"C时偶见典型结构.逆培 养二者均见苗落生长.40"C培养一周的菌落未见生长, 涂片及染色检查,均为圆形孢子,面积为6.5m× 7.5#m,出芽率为0,微培养及逆培养一周未见生长, 作者单位:180041长春,自求恩医科大学第二临床学院皮肤科 厂\7, 继续培养二周,亦来见生长.41"C,42_c的结果与41lc 的结果基本相同 三,讨论 35?培养时,见大量圆或椭圆形孢子,菌丝由孢子 发芽而成,个别孢子同时生出几个苗丝,说明在35? 时,该菌株没有形成酵母型,其酵母状态的形成在36? , 39"C之间.36"C,37lc培养的菌株均有典型形态 38?,3g?培养的孢子面积较前二种增大,且内部出现 空泡现象,在散培养中,虽偶见典型结构,但菌丝及孢 子数在相同倍数的视野内明显减少.这说明在38"C, 39"C培养的菌株受到一定程度的抑制,逆培养仍可生 长,故仍存在着一定的生长潜力,仍有一定的致病性. 前田做了39"C,40"C,42"C体外培养的孢子丝菌扫描 电镜观察,结果随着温度的升高,孢子形态越来越不规 则,退化的不典型孢子明显增多,成熟型孢子逐渐减 少.本实验与前田的实验基本相符.40"C,41_c,42"C培 养一周均未见菌落生长,继续培养二周亦未见生长,故 该菌在40"C时基本处于死亡状态,故本实验菌株的最 低致死温度是40c. Kwon-Chung等研究在8倒固定型损害中获得 的分离菌的分生孢子,35?培养时形成苗落.37_c培养 二周也敬形成苗落,此结果与本实验的结果有所不同. 比留间研究固定型菌株在35_c,37c培养时均形成 苗落.De—Albornoz[4研究的固定型菌株在37?,38"C 时均长出菌落,车实验菌株为固定型,且耐热性高于 KwonChung实验菌株,这可能因生长条件,菌株所在 地区气候,pH值或不同亚型导致实验结果的不同.故 本实验结果与国外多数学者的实验结果相同+本实验 菌株在36'C,39"C形成酵母型.最低致死温度为 40_c 临床应用意义:1962年有人:首先报道了局帮温 360 孔自扣?1 热疗法治疗孢子丝苗病.Hiruma瑚研究热效应可使细 胞内杀伤作用增强,尤其在4O?时更为明显.奉实验结 果也说明.加热可使孢子丝菌细胞内部结构发生明显 变化而抑制其生长繁殖,高温度也可导致死亡孢子丝 菌病治疗首选药物是口服ION碘化钾,因碘化钾有一 定副作用,太剂量服用也可发生碘中毒,故温热疗法对 活动性肺结核,碘过敏,服碘副作用明显的患者尤为适 用. 参考文献 1前田学.Spo~othrixscheackii6D温热牵I撒下I=扫时5细胞膜 棒造6"2变化.JapJMedMyco[,1987,28:296. 2Kwon~ChungKJCompa~sonDfisolatesofSporotkrlx schenekliobtained^mfixedc~neou8k)船tbiso- laresfromothertypesoflesions.JInfectDis,1978,4I 孑口一6J ChinJDer~tol,Oct1996,Vo【29,No. 424. 3比留间政太郎Sporotkrixschenckii~)温度感受性一) 第32回日本医真菌学会总会7口{厶摘录,1988,10: 58. 4deAlbornozMB,Mendo~aM,deTortesEDGrowth?】 peraturesofisoJates0S口orothrlxsc~tenckllfroradisseml natedandfixedcHtaneoHslesionsofsporotrickosls.Myco— patkologia,1986,95;8i 5UrabeH,HonboS.Sporotrichosis.IntJDemotol,1986,25 255 6Hi,ureaMtKagawaS.EffectsofkyperthermiaoD曲agocy toslsandintracellularhillingOfSporothr[xsckenckiiby polymorpkonu~learleukoc~es.Mycopatho|ogia,1986,95 93. (收稿:1995—11—30修回:1996—0130) 伊曲康唑治疗孢子丝菌病的临床和实验室观察 尤刚于凇谢珍珍张美莲李晓杰柳曦杨柴力 为了正确评价伊曲康唑治疗孢子丝苗病的疗效, 我f订于1994年7,9月期间在黑龙江省孢子丝苗病高 发地区使用伊啮康唑治疗13例孢子丝苗病,现就临床 疗效,真菌学,组织病理和电镜观察结果报告如下. 一 ,病例和方法 1.病例选择:全部病例为农村患者.均经临床和真 苗学检查确诊.伊曲康唑组选病情较重,皮损多发,固 定型皮掼面积较大者,计I3例,其中男6倒,女7例; 年龄1,10岁4倒,3l,40岁3倒,4l,50岁3例,51 岁以上3倒;病程1,12十月;皮损数目除4例固定型 外,余皆为多发性,平均为8.1个;临床类型:淋巴管型 5倒,固定型4倒,混合型3倒,播散型1例.碘化钾组 选自同一地区,其疾病严重程度,皮损效目太体与伊曲 康唑组相近,共29倒,男l1倒,女l8倒}年龄组1,10 岁8例,11,20岁6倒,21,30岁3例,31,40岁4 倒,41,50岁2例,51,60岁4例,61岁以上者2例; 病程1,18个月}临床类型:淋巴管型8倒,固定型13 倒,混合型6倒,播散型2倒}除13倒固定型为单发 怍者单位:150036哈尔滨,黑龙江省中日友谊医院皮肤科(尤 刚,张美莲,李晓杰,柳曦光,关熙峰);哈尔滨置科大学附属第 二医院皮肤科(于凇,杨发枝)1黑龙江省皮肤性病研究所 (谢珍珍,荣力) 外,余皆为多发性,平均5.2个. 2.给药方法t伊曲康唑组成人200mg/d,分两次于 早,晚餐后服用,儿童100mR/d餐后服用}碘化钾组根 据不同年龄按常规荆量服用1ON碘化钾溶液两组疗 程期限均规定为8周,治疗前,中,后观寨.记录. 3.疗效判定 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 :痊]缸为皮报完全消退,真菌培养 阴性;显效为皮报效目或面积消退>70,真菌培养阴 性{有效为皮损数目或面积梢遇50,70,真菌培养 阴性抑或阳性}无效为皮报面积或数目消退<50或 无明显改变,真菌培养阳性. 4.实验观察项目: (I)真菌学检查:两组患者治疗前,后均做真菌分 离培养(沙堡培养基).部分分离出的菌株作微量培养, 同时按常规技术程序制备标本,用日立S,520型作扫 描电镜观察,拍照. (2)组织病理和透射电镜观察:伊曲康唑组治疗前 全部进行活检,切除之组织块再分切成两小块,均按常 规技术程序分别制备石蜡切片(HE,PAS染色)和超薄 切片(醋酸双氧铀一枸橼酸铅染色),用光镜和H一600A 型透射电镜观察.治疗后选5倒皮报完全消退者做活 检,按上法制备标本,用光镜和电镜作治疗前后对比观 察. 二,结果