白带中白色念珠菌蛋白酶的测定及药敏结果分析
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白带中白色念珠菌蛋白酶的测定及药敏
结果分析
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
【摘要】 目的 评价白带中白色念珠菌的致病性和指导抗真菌药物的合理使用。
方法
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对大庆市中医医院2003年1月至2004年12月白带标本中分离的300株白色念珠菌进行蛋白酶测定,同时测定氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的最低抑菌浓度,MIC,。结果 300株白色念珠菌全部检出蛋白酶,其中蛋白酶活力高、中、低检出率分别为83,7%,251株,、12,7%,37株,、4,0%,12株,。4种抗真菌药物的耐药率分别是17,3%、11,3%、63,3%和44,6%。结论 白带中白色念珠菌具有致病性,临床应密切关注。
【关键词】白色念珠菌,白带,蛋白酶,耐药性
白色念珠菌是人体正常菌群之一,主要寄生于人体的体
表
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及口腔咽喉等部位,是引起女性生殖道感染的常见菌。笔者对我院2003年1月至2004年12月300株白带标本分离的白色念珠菌酸性蛋白酶,acid proteinase,AP,以及白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉
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素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药性进行
检测
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,以期阐明白带中白色念珠菌的致病性和耐药性,指导临床合理治疗。
1 资料与方法
1,1 材料
1,1,1 菌珠 我院检验科2003年1月至2004年12保存的白带标本中分离的白色念珠菌300株。经形态学、芽管生成、假菌丝、厚膜孢子、糖同化等试验系统鉴定,确定为白色念珠菌。
1,1,2 培养基 哥伦比亚血平板,重庆市庞通科贸有限公司,,产酶培养基,葡萄糖20,0 g/L,酵母粉1,0 g/L,KH2PO41,0 g/L,蛋白胨20,0 g/L,pH4,5[1],YGM-牛奶培养基,葡萄糖20,0 g/L,酵母粉1,0 g/L,KH2PO41,0 g/L,琼脂10,0 g/L,pH4,5[1]。灭菌后冷却到50?加脱脂牛奶,浓度为1,0%,。培养基厚度,9 cm直径平板准确加入25 ml培养基,约4,0 mm厚。
1,1,3 药敏测定板 法国生物梅里埃公司生产的酵母真菌药敏测定板ATB?FUNGUS2。
1,2 方法
1,2,1 AP活力的恢复 用产酶培养基37?增菌24 h,转种于哥伦比亚血平板37?培养24 h,用来恢复白色念珠菌的产酶等生物学活性,保存于4?备用。
1,2,2 白色念珠菌AP活力测定[1]试验菌株点种于YGM-牛奶平板上,37?培养72 h后,用游标卡尺测量菌落及其周围透明环的直径,以透明环直径/菌落直径,R,来判断酶活力的大小。
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1,2,3 抗真菌药物耐药性测定 严格按照说明书进行操作,结果按照美国临床实验室
标准
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化委员会,NCCLS,标准进行敏感、中介和耐药的判定,两性酶素B最低抑菌浓度,MIC,?2 mg/L为耐药。
1,3 统计学方法 采用WHONET5,2统计学软件进行统计分析。
2 结果
2,1 白色念珠菌AP活力 300株白色念珠菌在其菌落周围均出现透明环,R的范围是1,61,6,29,按R大小将试验菌株分为高活力,R?3,0,251株,占83,7%,中等活力,2,0?R,3,0,37株,占12,7%,低等活力,R,2,0,12株,占4,0%。
2,2 300株白色念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性 300株白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率为17,3%,52/300,、11,3%,34/300,、63,3%,190/300,、44,6%,134/300,。
3 讨论
AP的检测方法有多种,其中牛奶平板检测法具有简单、灵敏、不需染色可直接观察结果等优点。本实验采用YGM-牛奶平板法,检测了300株从白带标本分离的白色念珠菌AP,结果其产酶率达到100%,且高活力达83,7%,而低活力仅为4,0%,中度活力占12,7%,与国内外相关报道一致。
白色念珠菌的致病性由AP、荚膜及黏附性、芽管生成和
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疏水性等构成。其中AP为主要的致病因子,有文献报道白色念珠菌AP的活性与毒力,r=0,994 6,、黏附,r=0,994 4,密切相关[1]。菌体表面的疏水性是白色念珠菌重要的毒性因子,疏水性白色念珠菌较亲水性白色念珠菌产生芽管的速度快,其黏附组织、塑料、导管和人造瓣膜的能力强。
笔者测得白带标本中白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别是17,3%、11,3%、63,3%、44,6%,明显高于呼吸道中的白色念珠菌[2-4],说明白带中白色念珠菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药性已相当严重,这可能与临床局部使用过多唑类制剂,抗真菌药物选择压力增大有关。因此,临床对治疗白色念珠菌阴道炎时应慎用抗真菌药物,避免耐药性的积累。真菌耐药除与选择压力有关外,目前研究认为白色念珠菌耐药性的产生原因为,?麦角甾醇生物合成通路中关键靶酶的变化,?真菌胞膜内药物浓度的降低,?生物被膜的形成等。现已发现许多白色念珠菌感染的发生与生物被膜形成有关[5]。
本研究通过对白带标本中白色念珠菌AP的测定和对常用抗真菌药物耐药性分析,证明白色念珠菌具有相当的致病性,且对常用抗真菌药物已产生不同程度的耐药,说明在白带标本中白色念珠菌分离培养和药敏分析十分重要。
参考文献
,1, 黄长武,李兴禄,邱君风,等,白色念珠菌在呼吸道中致病性的研究,中华医院感染学杂志,2004,14,7,,721-723,
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,2, 刘晓敏,林婷,189株肺部酵母样真菌的鉴定及E-test法药敏分析,中国医学检验杂志,2004,5,2,,108-109,
,3, 沈翠芬,张晓祥,临床标本的真菌培养和药敏分析,中华医院感染学杂志,2003,13,4,,382-383,
,4,江艳,93例呼吸道白色念珠菌感染的临床调查与耐药现状分析,四川省卫生管理干部学院学报,2003,22,3,,196-197,
,5, Douglas LJ,Candida biofilms and their role in
infection,Trends Microbiol,2003,11,1,,30-36,
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