白术茯苓汤不同提取方法对脾虚大鼠血管活性肠肽的影响_20473

白术茯苓汤不同提取方法对脾虚大鼠血管活性肠肽的影响_20473 白术茯苓汤不同提取方法对脾虚大鼠血管活性肠肽的影响 [标签:来源] 作者:彭腾，贾波，邱建平，李鸿翔，魏华 【摘要】 目的研究白术茯苓汤不同提取方法对脾虚大鼠血管活性肠肽含量的影响。方法以大黄、厚朴、枳实加饥饱失常法复制脾气虚证动物模型，运用水提取法、水提醇沉法、半仿生法、半仿生提取醇沉法、生物提取法5种方法提取样品分别灌胃给药后观察各组药物对脾虚大鼠肠组织及血浆VIP的影响。结果与模型组比较，水提取法组、半仿生法组均能降低脾虚大鼠VIP水平，其中半仿生法作用更明显。结论中药复方用半仿生法提取值得进一步的探索。 【关键词】 白术茯苓汤; 提取方法; 血管活性肠肽 白术茯苓汤由白术、茯苓组成，二药配伍应用，始见于张仲景所著《伤寒杂病论》，明代徐春甫用以专治湿泻，并命名为白术茯苓汤而载入《古今医统大全》。二药均能益气健脾，白术苦温而善于燥湿，茯苓甘淡而善于渗湿，合而用之，一燥一湿，健脾除湿，相辅相成，成为古今治疗脾气虚证及脾虚泻泄的经典小方和常用药对。课题组前期的研究结果表明，白术茯苓汤水煎剂能显著下调SD大鼠脾虚动物血浆中VIP的升高[1，2]。为进一步研究该复方提取方法的药理作用，本课题组采用不同的提取方法系统研究其对脾虚大鼠血管活性肠肽含量的影响。 1 材料 1.1 动物SPE级SD大鼠56只，体质量(180?20)g，雌雄各半。由成都中医药大学实验动物中心提供，合格证号:0016632。 1.2 药品厚朴、枳实、大黄药材购于成都同仁堂，白术、茯苓药材购于成都市中药材公司。 1.2.1 造模药物的制备按厚朴?枳实?大黄为3?3?2的比例，厚朴、枳实先煎沸，再下大黄共煎，煎液过滤，煎煮两次，合并煎液，浓缩成 1g(生药材，下同)/ml煎液，4?保存，备用。 1.2.2 观察药物的制备白术茯苓汤(下同)水提取法样品制备:称取重量为1?1的白术、茯苓生药材饮片，混合浸泡30 min后合煎，煎煮3次后合并药液，过滤，浓缩成0.25 g/ml煎液水提取醇沉淀法提取液样品制备:上述煎液用95%乙醇调节浓度至70%，沉淀过滤，滤液浓缩成0.25g/ml。半仿生法提取液样品制备:参照张兆旺、陈惠结、孙秀梅等的研究[3，4]，结合本课题组的研究结果，称取重量为1?1的白术、茯苓生药材饮片，加入8倍量的水煎煮3次，3煎用水的pH依次为5.0，7.5，8.5;煎煮时间依次为90，60，60 min。合并提取液，过滤、滤液浓缩成0.25 g/ml。半仿生提取醇沉淀法提取液样品制备:上述半仿生法提取煎液用95%乙醇调节浓度至70%，沉淀过滤，滤液浓缩成0.25 g/ml生物提取法提取液样品制备:参照王淑玲等[5]的研究方法，结合本课题组的研究结果，称取重量为1?1的白术、茯苓生药材饮片，混匀，加入适宜的酶预处理;再按SBE法，采用正交实验L18(6×36)表，于第1煎和第3煎的溶剂中加入适宜的消化酶，用半仿生-酶法提取3次(加水量分别为中药量的12，10，10倍);提取液分别滤过，离心，合并上清液，浓缩成0.25 g/ml。 1.3 动物 SPF级SD大鼠56只，体质量(180?20)g，雌雄各半，由成都中医药大学动物实验中心提供，合格证号:SCXK-09-2006。 1.4 试剂VIP放免试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供。 2 方法 2.1 造模方法SD大鼠56只，随机分为两组，空白对照组8只，脾气虚证模型组48只，所有造模组大鼠采取隔日灌胃造模药物1次，每次4 ml/200 g体质量，喂药当日禁食，饮水不限，次日喂饲不限。喂养42 d;空白对照组则生理盐水4 ml/200 g体质量灌服，隔日1次，连续42 d。 2.2 实验分组及给药方法造模结束后，造模组大鼠随机分为6组，每组8只。即模型组、水提取法组、水提醇沉法组、半仿生法组、半仿生醇淀组、生物提取法组。于第43天开始灌胃给药治疗，1次/d，连续7 d。每组均按生药材0.25 g/ ml的浓度配制药液，按4 ml/200 g体重进行灌胃。 2.3 标本采集与处理所有动物处置前禁食24 h，饮水不限。实验时每只动物用预置了40 μl EDTA及10 μl抑肽酶的试管取血2ml，以3 000 r/min低温离心，分离血浆，装于离心试管，冰冻保存，待测血浆VIP。取血后立即处死大鼠，打开腹腔，自距肛门2 cm 以上取100 mg肠组织1段，在煮沸的生理盐水中煮3 min，加1 mol/L的冰醋酸0.5 ml,匀浆，4?保存l,2 h，加入1 mol/L的NaOH 0.5 ml，中和，离心30 min，取上清液，装于离心试管，-20?保存，待测结肠组织VIP。 2.4 检测方法采用放射免疫法(RIA)检测，由解放军总医院科技开发中心放免所检测。 2.5 数据统计各组数据均采用?s表示，用SPSS 12.0统计软件进行数据处理，单因素方差分析，均数间两两比较。 3 结果 3.1 动物造模情况造模后第3天起模型大鼠开始出现饮水减少、糊状稀便、食欲下降、 体质量下降、倦怠、懒动、喜聚堆等体征;7 d后模型大鼠相继出现嗜卧懒动，大便溏，食欲明显下降，体重、体温下降，毛色不荣等症状;造模15,20 d大鼠以上症状持续加重;造模35,42 d大鼠饮食量大幅度下降，身体虚弱，毛色晦暗发黄，精神萎靡。 3.2 各组大鼠血浆及结肠组织VIP变化比较结果见表1表1 各组VIP含量变化的比较 4 讨论 半仿生提取法(Semi-bionic Extraction Method，简称SBE法)是利用“灰思维方式”，将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，从生物药剂学的角度为经消化道给药的中药制剂创立的一种提取新技术。它模拟口服给药及药物经胃肠道转运的过程，适合工业化生产，体现中医治病综合成分作用的特点，有利于用单体成分控制制剂质量。 从实验结果来看，半仿生法提取的效果最好，对血浆及肠组织VIP均有极显著性差异;水提取法提取对肠组织有极显著性差异，对血浆VIP有显著性差异;而其它几种提取方法无差异。然而从这几种提取液中的主要成分分析，比如多糖含量、指标性成分来看，水提取液、水提醇沉法的含量最高，生物提取法提取液含量次之，半仿生提取法及半仿生提取醇沉淀法含量最低，可见中药复方起效是整体作用的结果，这符合中药复方的多药物、多成分的配伍组合后有协同增效的作用特点，为中药复方的研究提供进一步的研究思路，中药复方用半仿生提取值得进一步的探索和研究。 【参考文献】 [1] 贾 波，李晓红.粱 煜，等.白术茯苓汤对脾虚大鼠胃肠激素的影响[J].成都中医药大学学报，2001，24(4):47. [2] 魏 华，贾 波，张丰华，等.白术茯苓汤分煎、合煎及醇提对脾虚大鼠血管活性肠肽的比较研究[J]. 中药药理与临床，2007，23(5):37. [3] 张瑞亭，张兆旺，孙秀梅.思维方式的转换与中药半仿生提取法[J].中国中药杂志，1997，22(9):542. [4] 陈惠结，王晓芳，陈俊方.中药“半仿生提取”的进一步仿生化构想[J].基层中药杂志，1998，12(3):18. [5] 王淑玲，张兆旺，孙秀梅，等，半仿生-酶法提取的半夏白术天麻汤中甘草次酸的含量测定[J].承德医学院学报，2008，25(2):119.