酶（蛋白质）工程Ch1

1 云南大学生物技术系本科专业必修课程 酶（蛋白质）工程 云南大学生命科学学院 林洁 主讲 linjie@ynu.edu.cn 第一章 绪论  第一节 生物技术与酶工程  第二节 酶学研究简史  第三节 酶与酶工程研究的重要意义  第四节 酶工程简介  第五节 酶工程与蛋白质工程  第六节 课程的学习目标  第七节 课程的教学安排  第八节 教材和参考书目 第一节 生物技术与酶工程  美国国会科技评议处在1995年将生物技術 (biotechnology)定义为「利用生物体或来自生物体 的物质去制造或修饰某个产品，改良动、植物或开发 微生物以做为特定之用途。」  Bios = life；Teuchos = tool；Logos = study of or essence of.  Biotechnology = the study of tools from living things. 一、 生物技术的定义  生物技术（biotechnology）就是指人们以现代生命科学为基础，结合其 他基础学科的科学原理，采用先进的工程技术手段，按照预先的设计改 造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需要的产品或达到某种目的 技术原理与过程。有时也称为生物工程（bioengineering）。 改造生物体是指获得优良品质的动物、植物和微生物品系。 加工的生物原料是指生物的某一部分或生长过程中产生的能利用的物 质，如淀粉、多糖、纤维素等有机物。 生产出所需要的产品包括：粮食、医药、食品、化工原料、能源等。 达到某种目的则包括：疾病的预防、诊断与治疗和食品的检测以及环境 污染的检测和治理等。 生物技术的不自觉应用 第一代生物技术 近代生物技术 现代生物技术 二、生物技术的发展历程 生物技术的不自觉应用  4000多年前我国人民就会利用谷物酿酒，这是最早的发酵技术。  公元前221年，周朝后期，就能制作豆腐、酱和醋，并一直沿用至 今。  當生面团制作完成后，未马上烘焙，便会进行自发性的发酵过程， 经过烘烤后形成了质地较轻、较蓬松且美味的面包。  在西方，红酒的起源地 据信是底格里斯河流 域，在某次葡萄果汁受 到酵母菌與其他微生物 污染后自然发酵而產 生。 2 第一代生物技术  1680年，Leeuwen Hoek制成了显微镜后，人们知道有微生物的存在。  1857年，Pasteur证实酒精发酵是由活酵母引起的，才逐渐了解到其 他不同的发酵产物也是由不同微生物的作用而形成，并建立了微生 物纯种培养技术。为发酵技术的发展提供了理论基础。  19世纪末到20世纪30年代这段时间不少工业发酵过程陆续出现，如： 乳酸、 酒精、面包酵母、丙酮、柠檬酸、淀粉酶等的生产：至此， 以工业微生物过程生产发酵产品为代表的真正意义上的生物工程才 正式诞生了 近代生物技术  1928年英国人弗莱明复发现了青霉素。  1941年美国和英国开始合作对青霉素的大规模生产技术进行研究和 开发，终于在1943年开发出一条青霉素沉浸培养工艺，采用带有机 械搅拌和通气的密闭式发酵罐对青霉菌进行培养并用离心萃取和冷 冻干燥把青霉素从发酵液中提取出来并进行精制，从而使青霉素的 产量和质量大幅度提高。推动了抗生素产业的兴起和发展。  抗生素生产的MATCH_ word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 _1716951679907_0很快地促进了其他发酵产品的发展，最突出的是 20世纪50年代氨基酸发酵工业及60年代出现的酶制剂工业。  发酵相关知识积累至某個水准后，便可大量以工业发酵过程制造重 要工业化合物。如今，商用酶制剂、氨基酸、抗生素和维生素等工 业原料和医药制品，均大量以工业发酵生产。 现代生物技术  1972年，Berg首先实现了DNA体外重组技术，DNA重组技术的建立是 现代生物技术的标志。  1944年Avery利用实验证明了DNA是遗传信息的携带者；  1953年美国的沃森和克里克发现了DNA的双螺旋结构；  1961年Khorana和Nirenberg破译了遗传密码，揭示了DNA编码的遗 传信息是如何传递给蛋白质这一秘密；  限制性内切酶的发现。  DNA重组技术使人们可以按照意愿在试管内切割DNA，分离基因并经 重组后导入其他微生物或细胞，藉以改造生物体，生产新产品。从而 带动了传统生物技术的发展，形成了具有划时代意义和战略价值的现 代生物技术。 生物学 化学 工程 工程学化学 生物 工程 生物 化学 生物 技术 现代生物技术 新兴、前沿学科往往在学科交叉中产生 3 三、生物技术的四大支柱 生物技术 （生物工程） 基因工程 细胞工程 酶工程 发酵工程 蛋白质工程 1. 基因工程(gene engineering)  基因工程主要是通过体外DNA重组创造 新生物并给予特殊功能的技术 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ，也 被称为DNA重组技术。  其主要原理应用人工方法把生物的遗传 物质，通常是DNA 分离出来，在体外 进行切割、拼接和重组。然后将重组了 的DNA导入某种宿主细胞或个体，从而 改变它们的遗传品性；有时还使新的遗 传物质（基因）在新的宿主细胞或个体 中大量表达，以获得基因产物（多肽或 蛋白质）。 挑出所要群落 得到纯系转殖菌株 大量培养生产 人类胰岛素 Human Insulin 探針 Probe 互补 DNA 专一性抗体 送入宿主細菌 基因接入載体 目标基因剪接 Stryer (1995) Biochemistry, p. 119 Kleismith & Kish (1995) Cell and Molecular Biology, p. 115 番茄殖入反义基因 可防止软化 抑制果肉软化的酶 (果胶酶pectinase) Nature Biotechnology 反义基因 荧火虫发光基因转殖烟草 抗虫基因转殖 Nature Biotechnology D av id O w 植物 基因 转殖 荧火虫发光基因转殖烟草 Nature Biotechnology * * * 蛋白质工程(protein engineering)  蛋白质工程，又被称为是第二代 基因工程，它是在基因工程的基 础上，结合蛋白质结晶学、计算 机辅助设计和蛋白质化学等多学 科的基础知识，通过对基因的人 工定向改造等手段，从而达到对 蛋白质进行修饰、改造、评价以 产生能满足人类需要的新型蛋白 质的技术。 4 2. 发酵工程(fermentation engineering)  发酵工程利用微生物生长速度快、生长 条件简单以及代谢过程特殊等特点、在 合适条件下，通过现代化技术手段，由 微生物的某些特定功能生产出人类所需 要的产品的技术过程。 0 12 24 36 48 60 72 84 96 0 20 40 60 80 100 D is ov ed O xy ge n( % sa t) T ime(h) Feeding 0 200 400 600 800 1000 S tirrer S peed(rpm ) 0 12 24 36 48 60 72 84 96 0 10 20 30 40 50 B iom ass(O D 610) 0 20 40 60 80 G lu co se (g /l) 0 10 20 30 40 50 60 G lutam ine by Y S I(% ) G lutam ate by Y S I(% ) 0 50 100 150 200 250 300 350 400 B ase(m l) 4 5 6 7 8 9 pH 10 20 30 40 50 T em prature( ) ℃ 3. 细胞工程(cell engineering)  细胞工程主要是以细胞为基本单位，在体外条件下进行培养和繁殖； 或是应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论 与方法，在细胞整体水平或细胞器水平上人为地使细胞的某些生物学 特性按照人们的意愿发生改变，从而获得新型生物品种或细胞产品的 技术过程。 细胞重组技术与无性繁殖 每一植物細胞都有极強的再生能力 再生植株 紫杉醇 Nature Biotechnology 溶解細胞壁 原生质体 愈伤组织 S ci en tif ic A m er ic an Life Processes of Plants 植物細胞再生 牛頓 (1985) no. 23 p.100 National Geographic 細胞融合 融合瘤 5 单克隆抗体的高度专一性有很多用途 单克隆抗体是对其抗原有极强专一性的 魔弹 (magic bullet)或巡航飞弹 研 究 以免疫转印法侦测特定抗原 医 疗 以毒素连接抗体攻击病变細胞 检 验 以 ELISA 侦测特定病原体 以 单 克 隆 抗 体 來 清 除 体 內 癌 細 胞 N at io na l G eo gr ap hi c 4. 酶工程(enzyme engineering)  酶工程则是从应用的目的出发，研究酶，生产酶，改造酶，并利用酶 的催化功能借助生物反应器和工艺过程来生产人类所需产品或实现人 类需求的技术过程。是酶学、微生物学的基本原理与化学工程有机结 合而产生的交叉学科。 • 二、 酶的应用领域和现状  1. 酶在医药方面的应用  利用酶的催化特性进行基本诊断  药物的研制和疾病的治疗  2. 酶在食品方面的应用  食品保鲜  食品加工生产  改善食品的品质和风味  3. 酶在工业方面的应用  进行原料处理  生产各种工业产品  加酶增强产品的使用效果  4. 酶在农业方面的应用  农产品保鲜  农产品加工  农产品质量控制  饲料加工  5. 酶在环保能源方面的应用  用酶进行环境监测  用酶进行废水处理  生产各种可生物降解材料  生产各种新能源产品  6. 酶在生物技术（工程）方面的应用  核酸的合成、切割和拼接（基因工程）  胰酶消化（细胞工程）  细胞破壁、酶（蛋白质）分子的改造（发酵工程、酶工程、蛋白质工程）  核酸杂交检测技术、免疫检测技术（ 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 检测） • 药用酶的应用  治疗消化不良  蛋白酶：胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶  α-淀粉酶：麦芽淀粉酶、米曲霉淀粉酶  脂肪酶  糖化酶：特别是婴儿饮奶后出现腹胀、腹泻等  治疗各种炎症  蛋白酶：使炎症部位的坏死组织溶解、增加组织通透性  溶菌酶：作用于细菌的细胞壁，使病原菌、腐败性细菌等溶解死亡  治疗辐射损伤  超氧氧化歧化酶（SOD）：抗氧化、抗衰老、抗辐射 6 • 药用酶的应用  治疗血栓性疾病（溶血栓）  尿激酶（UK）：激活纤溶酶原成为有溶解血纤维蛋白活性的纤溶酶  纳豆激酶：可以催化血纤维蛋白水解，同时可以激活纤溶酶原成为纤溶酶  组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）：溶纤功效强，特异性好  治疗出血性疾病  凝血酶：催化血纤维蛋白原水解，生成不溶性的血纤维蛋白，促进凝血  抑肽酶：抑制人体的胰蛋白酶、纤溶酶、血浆及组织中血管舒缓素  治疗癌症（肿瘤）  L-天门冬酰胺酶：分解L-天冬氨酸，抑制癌细胞蛋白质合成  免疫检测技术的基本原理：  抗原免疫动物能够获得特异的抗体  特异的抗体能与抗原在体内或体外发生反应，形成抗原-抗体复合物 ELISA与疾病的诊断ELISA与疾病的诊断  抗原的种类：  病原体：细菌、病毒、寄生虫、衣原体……  细胞  蛋白质：单纯蛋白、脂蛋白、糖蛋白、核酸蛋白等  小分子化合物：半抗原，与载体蛋白偶联成为完全抗原  利用抗原-抗体的特异性反应可以检测  检测样本中是否存在某种抗原  检测样本中是否存在某种抗体  酶联免疫吸附检测（Enzyme-Linked Immuno-Sorbent Assay, ELISA）的基本原理：  抗原与相应抗体的特异性反应  大多数塑料能够吸附蛋白质（抗原或抗体多为蛋白质成分）  有些酶的催化反应能够成为显色反应，易于观察和检测 加入基质 ELISA Plate 酶标板 抗 原 专一性 抗体 酶联二抗 連結酶酶呈色 不相关抗体 2 E  1969年，日本田边制药公司将从米曲霉中分离得到的氨基酰化酶，用DEAE-葡聚 糖凝胶为载体通过离子键结合制成固定化酶，将L-乙酰氨基酸水解成L-氨基酸， 用来拆分DL-乙酰氨基酸，连续生成L-氨基酸  剩余的D-乙酰氨基酸经过消旋化，生成DL-乙酰氨基酸，再进行拆分  生产成本仅为用游离酶生产成本的60%左右 R CH COOH NH O C O CH3 OH2 R CH COOH NH2 CH3 C O OH L-乙酰氨基酸 L-氨基酸 ＋＋ ＋＋ 基因操作过程中的常规试验 消化前 消化后 细胞贴壁培养中的胰酶消化过程 7 酶工程与各生物技术 细胞工程基因工程 蛋白质工程 产品 酶工程 生化工程 发酵工程 转基因 生物反应器 及分离工程 动植物 细胞培养 酶制剂 应用或生产 “ 在含有不同糖成分（包括蔗糖、葡萄糖、果糖 和麦芽糖）的水溶液中，一种从啤酒酵母制备的 无细胞榨出汁能导致二氧化碳和乙醇的形成。发 酵过程的启动并不需要以活细胞为代表的那样复 杂的“装置”，酵母榨出汁中导致发酵作用发生 的只涉及一种溶解了的物质，它无疑是一种蛋白 质。我们用“酿酶”这个名词来标示这种蛋白。” ——爱德华﹒毕希纳 第二节 酶学研究的简史  酶的发现起源于发酵——这一史前时代的厨房工作：  酵母、面团、面包  公元前2000年之前，古埃及、储存碾碎的枣从美味到变酸  公元前1500年，葡萄汁与葡萄酒、大麦浸泡液与啤酒  史前就已经存在的动物类食品的保存方法——风干、熏干、腌、盐渍等。  古埃及，木乃伊的脱水制作。  这些古老的工艺已经应用了超过6000年，但其中的化学机制直到19世 纪仍保持着神秘。  亚里士多德：发酵是一个不断成熟的过程，“精神”作用。  炼金术士：“第五元素”——元气，发酵与酵素 第一节 酶学研究的简史  后来，酵母菌在酿造葡萄酒和啤酒中的作用成为了生物学 中耗时最长，也最为激烈的争论。  盖-吕萨克与李比希都认为发酵是与加热有关的化学反应。  1830年前阿斯迪尔德观点：“空气是所有细菌的传播媒介和酵素的来 源，酵素通过消耗糖来维持自身的生存和繁殖，从而导致组成糖的基 本元素单位之间平衡的破坏”被化学流行的社会所忽视。  列文虎克使用显微镜在发酵沉淀中见到了酵母，使很多人相信发酵的 决定力是活有机体。  1837年施旺用实验证明发酵与加热无关，指出发酵的过程的诱发要素 必须是一种由过程中本身产生并增加的物质，此现象只适用于活的有 机体。  以李比希、维勒和伯齐厄斯为代表的化学家对此加以讥讽。 第一节 酶学研究的简史  1896年，毕希纳兄弟报道了以下发现：  在含有不同糖成分（包括蔗糖、葡萄糖、果糖和麦芽糖）的水溶液中，一种从 啤酒酵母制备的无细胞榨出汁能导致二氧化碳和乙醇的形成。  毕希纳兄弟的实验结论：  发酵过程的启动并不需要以活细胞为代表的那样复杂的“装置”，酵母榨出汁中 导致发酵作用发生的只涉及一种溶解了的物质，它无疑是一种蛋白质。我们用 “酿酶”这个名词来标示这种蛋白。  关于发酵这个古老冲突结束了：发酵是一个生物体的化学过程。现代生化化学 诞生了！酶学研究正式开始！ 第二节 酶学研究的简史  20世纪，酶学得到了迅速地发展：  发现了更多的酶，注意到了辅酶  1902年，Henri提出了中间产物学说；Michaelis和Menten，根据中间产物学说 提出了酶促动力学原理——米氏方程  Sumner从刀豆中得到了脲酶结晶，提出酶的蛋白质本质  1950s，Kosland提出了“诱导契合”理论，解释了酶的催化理论和专一性  1956年，Arthur Kornberg证明了DNA的复制并分离了复制所需要的DNA合成酶  1961年，Monod提出“变构模型”，提供了酶调控作用的基础  1970s，限制性内切酶的发现推动了重组DNA技术的产生  DNA重组技术用定点突变法研究酶的作用机制，并为涉及特定需要的酶奠定 了基础。  1984年，Cech小组发现了核酶，提出了酶的RNA本质的存在。  1986年，Schultz小组用单克隆抗体技术制备了抗体酶。  1989年，耐热Taq酶的发现，为PCR技术的应用奠定了基础。 8 第三节 酶与酶工程研究的重要意义  酶（enzyme，在酵母中）是由活细胞产生的具有催化能力的蛋 白质，它是促进一切代谢反应的物质，没有酶，代谢就会停 止，生命也即停止。  酶的发现及其催化作用的阐明是现代生物化学的起点！  酶的作用机制的研究是生命科学和现代医药学的重要理论基 础！  酶的催化功能的应用是生物技术的开端！是工业、农业、医学、 环境保护和能源开发的福音！ “ 什么样的化学物质使细胞和生物能够发挥其功能、生长 并且繁殖？既不是碳水化合物——植物中的淀粉——和动物 体内的糖原，也不是储存的脂肪；既不是构成肌肉、结缔组 织和骨骼组织的结构蛋白，亦非遗传物质DNA。尽管DNA威风 八面，它也只是指导构建细胞蛋白质的蓝图。DNA本身是无 生命的，它的语言冰冷而威严。真正赋予细胞生命和个性的 是酶。它们控制着整个机体，哪怕仅仅一个酶功能异常都可 能致命。对我们的生命而言，自然界中找不到象酶眼些重要 的任何其他物质，然而，人们对它的了解如此之少，只有少 数科学家才真正欣赏它们。” ——阿瑟﹒科恩伯格 第四节 酶工程的简介  1. 酶工程的定义  2. 酶工程的研究概况  3. 酶工程的研究内容  4. 酶工程的发展前景 1. 酶工程的定义  酶工程（enzyme engineering）是从应用的目的出发，研究酶， 生产酶，改造酶，并利用酶的催化功能借助生物反应器和工艺工程来 生产人类所需产品或实现人类需求的技术过程。是酶学、微生物学的 基本原理与化学工程有机结合而产生的交叉学科，是现代生物技术的 重要组成部分。  酶能在常温、常压、中性pH等温和条件下高度专一有效地催化底物 发生反应，所以以酶的开发和应用为目的的酶工程已成为当代和未来 新技术革命中的一个重要课 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 。 2. 酶工程的发展概况 通过分离纯化法从动、植物或微生物中获得越来越多的酶，并应用于实际生 产。由于受到原料来源和分离纯化技术的限制，难于进行大规模的工业化生 产，“如何提高酶的产量”成为酶工程研究的方向。 从木瓜中分离获得木瓜蛋白酶，用于啤酒的 澄清 华勒斯坦 （Wallerstein）1911 从动物胰脏中提取分离制得胰酶，用于皮革 的软化罗姆（Rohm，德国）1908 从米曲霉中获得高峰淀粉酶，用作消化剂高峰让吉（日本）1894 2. 酶工程的发展概况 限制性内切酶的发现，开创的DNA重组技术，使酶得以大规模重组 表达和生产。1970 雅各和莫诺德提出操纵子学说（阐明了酶生物合成的调节机制）， 依据该学说，在酶的发酵过程中，进行适当的调节和控制，使酶的 产率得到限制的提高。 1960 酶的生产技术得以极大的发展，酶的产量越来越大，酶的应用也越来越广泛。 但是同时酶在应用方面的不足之处，也日趋凸现。“如何生产高效率的酶制 剂”成为酶工程的研究趋势。 动、植物细胞培养技术的迅速发展，为酶的生产提供了一条新的突 进，获得了许多来源于动、质细胞的酶制剂。1980s 微生物液体深层培养技术被成功应用于细菌α-淀粉酶的发酵生 产，揭开了现代酶制剂工业的序幕 。1949 9 2. 酶工程的发展概况 脂肪酶在有机介质中不但具有催化活性，而且热稳定性 有限制提高。 提出了酶非水相催化的理论。克利巴诺夫1984 采用固定化原生质体生产碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、 谷氨酸脱氢酶等的研究相继取得成功郭勇（中国）1986 用固定化细胞生产α-淀粉酶研究成功铃木等（日本）1978 化学工程技术应用于酶工程，提高了酶制剂改造的效率，但未能完全解决酶在实际 应用中的不足，特别是酶的化学修饰法在一定程度上影响了酶的活力 利用多样的化学修饰剂通过化学反应修饰酶分子1980s 用固定化氨基酰化酶进行DL-氨基酸拆分而生产L-氨基酸千钿一郎（日本 ）1969 证明了吸附在骨炭上制成的水不溶性状态的固定化酶仍 然具有催化活性 奈尔森和格里芬 （美国）1916 2. 酶工程的发展概况 生物技术的发展，大大推动了酶工程的产生，出现了更多更好的酶的改造方法，同 时大量高效、新颖的酶制剂腾空出世 基因工程、蛋白质工程、细胞工程等现代生物学技术的发展，促进了 酶工程的快速进步，用基因工程技术大量生产酶（克隆酶），通过基 因定点突变技术修饰酶基因产生出遗传修饰酶（突变酶），酶的定向 进化技术，另外设计新的酶基因以及杂交瘤技术的应用产生了许多自 然界本没有的酶（抗体酶）。 1980s 之后 3. 酶工程的研究内容  化学酶工程  天然酶、化学修饰酶、固定化酶及化学人工酶的研究和应用  分子酶工程  克隆酶  突变酶  新基因酶  多功能酶  抗体酶 3. 酶工程的研究内容  酶的生产  通过各种方法选育得到优良的微生物、动物或植物细胞，在人工控 制条件的生物反应器中进行生产，而获得各种所需要的酶  酶的改性  通过各种方法使酶的催化特性得以改进的技术过程，经过改性，酶 可以提高活力、增加稳定性、降低抗原性，改变选择性，更有利于 酶的利用  酶的应用  根据酶的催化特性和酶反应动力学的理论，将酶应用于医药、食品、 工业、农业、环保、能源和生物技术等各个领域。 4. 酶工程的发展趋势  今后将会出现一大批基因工程表达的酶制剂  会出现应用经分子改造与修饰的酶制剂的热潮  异体酶的抗原性将会得到解决  酶活性的控制方面将会有较大突破，其中酶抑制剂和激活剂仍将受 到极大重视，并在临床及工农业生产中发挥重要作用  化学合成工业中，酶法生产将有更重大的贡献  模拟酶、酶的人工设计合成、抗体酶、杂交酶将成为活跃的研究领 域。  非水系统酶反应技术仍将是研究热点之一。 第五节酶工程与蛋白质工程  新酶的发现和开发、酶的改造和酶的高效应用是当今酶工程发展的 主攻方向和前沿阵地。  蛋白质工程，又被称为是第二代基因工程，它是在基因工程的基础 上，结合蛋白质结晶学、计算机辅助设计和蛋白质化学等多学科的 基础知识，通过对基因的人工定向改造等手段，从而达到对蛋白质 进行修饰、改造、评价以产生能满足人类需要的新型蛋白质的技术。  酶是具有生物催化功能的蛋白质和核酸，绝大多数的酶具有蛋白质 本质。因此，蛋白质工程的研究方法促进了现代酶工程的发展，特 别是在酶的改造方面扮演了重要的角色，是现代分子酶工程的重要 构成元素。 10 第六节课程的学习目标  课程名称：《酶（蛋白质）工程》  以酶工程原理和技术为学习主线，掌握酶的生产与应用的基本理论、 基本技术以及酶的改造技术的研究和应用，进一步了解酶在各行各业 中实际应用的最新发展和发展趋势。在以后的毕业环节和工作中能够 自觉地应用这些技术方法，尤其是思想来指导自己的工作。  通过酶的改造的基本理论和技术的学习，学会“如何从蛋白质结构与功 能之间的密切相关性出发，通过对蛋白质分子的设计和改造，生产能 满足人类需要的新型蛋白质的”。了解蛋白质工程的核心技术思想  通过蛋白质技术在现代酶工程中的应用，理解生物技术各相关技术之 间是如何相互联系，相互渗透的。 第七节课程的教学安排  第一章 绪论  第二章 酶学基础概论  第三章 酶生物合成的基本理论——蛋白质的生物合成  第四章 酶的生物合成法生产  第五章 酶的提取与分离纯化技术  第六章 酶的分子修饰  第七章 酶（细胞）的固定化  第八章 酶的非水相催化  第九章 酶的应用  第十章 酶生物反应器和酶传感器 酶的生产 酶的改性 酶的应用 教材与参考书目  教材  《酶工程原理与技术》 郭勇主编 高等教育出版社  参考书目  《酶工程》 罗贵民主编 化学工业出版社  《蛋白质工程》 汪世华主编 科学出版社  《Protein Purification Protocols》(Second Edition) Edited by Paul Cutler Humana Press. 本章思考题:  1. 何为生物技术？生物技术与酶工程有何关系？  2. 学习和研究酶与酶工程的意义何在？  3.什么是酶学？什么是酶工程？ 酶工程的主要任务 是什么？包括哪些研究内容？  4.了解酶学研究历史对理解酶学与酶工程的关系？  5. 酶工程与蛋白质工程有何不同？有何联系？