琼 脂 糖 凝 胶 电 泳
一 实验目的
学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法
检测水稻总DNA的纯度与分子量
检测PCR的结果
二 实验原理
电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃ 开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动
二 实验原理
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带
琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系
可依据DNA分子的大小使其分离
DNA分子在电泳条件下的迁移演示.exe
Goodview可与DNA分子形成复合物，发射的荧光强度较游离的Goodview强度大10倍以上，且荧光强度与DAN含量成正比
示踪染料和分子量
标准
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参照物
二 实验原理
M 1 2 3 4
PCR产物的
琼脂糖凝胶电泳
三 实验材料、用具及试剂
提取的水稻总DNA和PCR产物
电泳仪，电泳槽，电子水平，移液器，枪头，三角瓶、点样板，微波炉等
琼脂糖，TAE电泳缓冲液， Goodview，载样缓冲液（Loading buffer）
四、实验步骤
1 制胶：
100ml(0.5×TAE)+0.8g琼脂糖 三角瓶(1/3) 煮胶 溶解，冷却至60℃(不烫手)，加Goodview，倒板(4-6mm)，室温下充分凝固，竖直拔下梳子
2 点样：
5μl水稻总DNA+1μ2 loading buffer=7μl
PCR产物+3μl loading buffer，混匀，吸取10μl
10μl ⅢMark DNA(λ DNA-HindⅢ )
3 电泳：电压3-5V/cm，约80-90V，注意电极方向
4 观察：紫外透射
分析
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仪下观察，时间不要太久
四、实验步骤
五 注意事项
1 倒胶时把握好胶的温度，不要高于60℃ ，否则温度太高会使制板变形
2 胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏点样孔
3 点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不要太多
4 Goodview有毒，切勿用手接触，更不要污染环境，胶勿乱扔
5 紫外线照射不要太久
六 作业
画出电泳图，分析观察到的结果
浙公网安备 33021202002483