高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的不确定度评定

高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的不确定度评定【摘要】目的：全面地 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的不确定度来源和影响不确定度的因素。方法：根据检测过程，建立数学模型，分析影响不确定度因素的来源，通过对不确定度进行量化分析，得出扩展不确定度。结果：高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的扩展不确定度为1.843%。结论：高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的不确定度主要由 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液浓度校正、标准溶液的配制和方法总重复性引入。【关键词】高效液相色谱法；维生素A；数学模型；不确定度【Abstract】Objective：ComprehensivetoanalyzethesourcesandinfluencingfactorsofcontentuncertaintyofVitaminAinhealthfoodbyHPLC.Methods：Accordingtothetestingprocess，amathematicalmodelwasestablishedtoanalyzethesourcesandinfluencingfactorsinuncertainty，throughthequantitativeanalysisofuncertainty，obtainedtheexpandeduncertainty.Result：TheexpandeduncertaintyofVitaminAinhealthfoodbyHPLCwas1.843%.Conclusion：ThemainsourcesofuncertaintyofVitaminAinhealthfoodbyHPLCwasregulatingtheconcentrationofstandardsolution，preparationofstandardsolutionandtherepeatabilityofmethod.【Keywords】HPLC；VitaminA；Mathematicalmodel；Uncertainty引言维生素A能够调节人体的多种生理机能，增强机体免疫能力，在调节体内各方面的代谢及促进骨骼的生长发育上有着极其重要的作用，同时它也参与视网膜视紫质的合成与再生，维持正常的视觉反应，以降低夜盲症和视力减退的发生[1，2]。而维生素A摄入过量也会引起副作用，可损害脑组织等，因此维生素A制剂含量的控制十分重要[3]。本文根据JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[4]，并参考JJG196-2006《常用玻璃量器检定规程》[5]，结合检测方法和数学模型，对高效液相色谱法测定保健食品中维生素A的含量进行不确定度评估，找出不确定度主要来源，为方法的优化和评定测量结果提供依据。研究部分1.提要1.1测量方法：GB/T5009.82-2003。1.2基本原理：试样经过高温皂化、提取处理后，用乙醚萃取，蒸干乙醚后用乙醇定量溶解。利用高效液相色谱仪对样品中的维生素A进行分离和测定。2.材料与方法2.1材料2.1.1仪器设备：Agilent-1260高效液相色谱仪；KQ-500VED型超声仪；EMS-50型恒温水浴锅；UV-2450紫外分光光度计；R-202旋转蒸发仪；XP-205分析天平；MS-304S分析天平。2.1.2试药：乙醇（AR）；抗坏血酸（AR）；氢氧化钾（AR）；乙醚（AR）；无水硫酸钠（AR）；甲醇（色谱纯）。芘（厂家：DR，批号：01116，纯度：99.0%）；维生素A（厂家：SIGMA，批号：BCBG2044V，纯度：98.0%）。2.2色谱条件：色谱柱：CNWAthenaC18-WP（5μm，150mm×4.6mm）；流动相：甲醇：水=（94：6）；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；检测波长：300nm。2.3分析步骤：2.3.1内标溶液的配制精密称取芘内标物49.28mg至1000ml容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为内标溶液。2.3.2标准储备母液的配制精密称取维生素A对照品12.35mg至100ml容量瓶，用乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备母液。2.3.3标准溶液的配制精密量取标准储备母液0.5mL，1.0mL，2.0mL，3.0mL，5.0mL，置于25mL棕色容量瓶中，精密加入内标溶液3mL，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得5个不同浓度的标准溶液。2.3.4标准溶液的浓度校正精密量取1mL标准储备母液至50mL容量瓶中，加入适量乙醇摇匀并定容至刻度，以乙醇为空白，在325nm波长处测定，其平均吸光度为0.4376。维生素A的吸光系数为1835。2.3.5样品处理2.3.5.1皂化本实验样品为维生素A维生素D软胶囊（儿童型）。取20粒样品，挤出 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 物，搅拌均匀。精密称取试样0.1g，置于250mL锥形瓶中，用约50mL乙醇使其溶解，直到颗粒物分散均匀为止。加入25mL10%抗坏血酸水溶液、3mL内标溶液、10mL氢氧化钾水溶液（1：1），混匀。于沸水浴回流60min，使皂化完全。取出立刻冷却至室温。2.3.5.2提取及浓缩用50mL的水分两次将皂化液全部转入500mL分液漏斗中，加入100mL乙醚，轻轻摇动，排气后盖好瓶塞，室温下振荡约10min后静置分层，将水相转入另一500mL分液漏斗中，按上述方法进行第二次萃取。合并醚液，用水洗至近中性。醚液通过无水硫酸钠过滤脱水，滤液收入500mL圆底烧瓶中，于旋转蒸发仪上在50℃±2℃充氮条件下蒸至近干（绝不允许蒸干）。残渣加入适量乙醇，超声波提取溶解，将乙醇转移到25mL容量瓶中，用乙醇洗涤圆底烧瓶数次，洗涤液全部转移到同一25mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，摇匀，过滤，即得供试品溶液。2.3.5.3测定待仪器稳定后，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定。3.数学模型式中：X—样品中维生素A的含量，mg/100g；M—样品的质量，g；V—样品的稀释体积，mL；C—样品溶液中维生素A的浓度，μg/mL。由实验过程和数学模型可以看出，影响维生素A测定结果的不确定度因素有：除了样品的质量，样品的稀释体积，样品溶液中维生素A的浓度之外，还有高效液相色谱仪进样的重复性，样品处理过程的一致性和高效液相色谱仪积分面积重复性等因素对测定结果产生影响。故不确定度的来源可以归纳为以下几个方面：3.1重复测定导致的不确定度ur（1）：包括样品处理过程的一致性所产生的不确定度；3.2高效液相色谱仪所产生的不确定度ur（2）：包括进样的重复性、液相色谱仪积分面积重复性所产生的不确定度；3.3样品称量所产生的不确定度ur（3）；3.4样品定容体积所引入的不确定度ur（4）：包括容量瓶体积所产生的不确定度；温度变化所产生的不确定度；内标溶液加入体积的不确定度；3.5标准溶液配制所引入的不确定度ur（5）：包括标准溶液配制过程中容量瓶体积产生的不确定度；稀释5个不同浓度标准溶液过程中刻度吸管所产生的不确定度；内标溶液加入体积所产生的不确定度；温度变化所产生的不确定度；3.6标准溶液浓度校正所产生的不确定度ur（6）：包括紫外分光光度计产生的不确定度；温度变化产生的不确定度；校正标准溶液浓度时所使用的移液管、容量瓶所产生的不确定度；3.7由于标准溶液的浓度由吸光度来校正，且内标溶液的浓度对测量结果不产生影响，故维生素A对照品的称样量及纯度，芘内标物的称样量及纯度，均不参与评定。4.各分量不确定度评定4.1重复测定导致的不确定度ur（1）4.1.1样品处理过程的一致性，采用平行测定10次的结果进行评定，属于A类评定，按照实验方法对样品平行测定。结果如下：维生素A含量测定的标准偏差为：1.231标准不确定度：u（4.1.1）===0.3893相对标准不确定度为：==0.4768%4.2高效液相色谱仪所产生的不确定度ur（2）4.2.1进样的重复性，液相色谱仪积分面积重复性，采用同一个样品重复进样10次，以维生素A和芘的峰面积的比值来进行评定（n=10）。属于A类评定。结果如下：维生素A和芘的峰面积比值的标准偏差为：0.007773标准不确定度：u（4.2.1）===0.002459相对标准不确定度为：ur（2）===0.2014%4.3样品称量所产生的不确定度ur（3）4.3.1使用XP-205分析天平进行称量，天平的校准证 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 给出的测量结果示值误差的扩展不确定度U=0.06mg，k=2，属正态分布，样品的称样量m=105.77mg，则有：标准不确定度为：相对标准不确定度为：ur（3）=4.4样品定容体积引入的不确定度ur（4）4.4.1样品定容过程只用到25mL的容量瓶，由25mL容量瓶的校准证书可知，这些容量瓶都属于A级，测量结果的扩展不确定度U=0.01mL，k=2，属于正态分布，则有：标准不确定度为：u（4.4.1）===0.005mL相对标准不确定度为：ur（4.4.1）==0.02000%4.4.2由于本实验室温度在20±5℃的范围内波动，假设温度变化为5℃，该温度引起的不确定度可通过估算温度范围和体积膨胀系数计算，液体的体积膨胀明显大于容量瓶的体积膨胀，故只考虑前者即可。设温度为矩形分布，换算系数为，水的膨胀系数为/℃，则有：相对标准不确定度为：ur（4.4.2）=5××100%=0.06063%4.4.3样品溶液中内标溶液的加入只用到3mL的单标线吸量管，由校准证书可知，实验中所用的3mL单标线吸量管，属于A级，测量结果的扩展不确定度U=0.002mL，k=2，属于正态分布，则有：标准不确定度为：u（4.4.3）===0.001mL相对标准不确定度为：ur（4.4.3）==0.03334%则，样品定容体积所引入的不确定度ur（4），为ur（4.4.1）、ur（4.4.2）和ur（4.4.3）的合成，即：4.5标准溶液配制所引入的不确定度ur（5）4.5.1标准溶液配制过程中，需要用到5个25mL的容量瓶。参照4.4.1中相对标准不确定度的计算方法，则有：标准不确定度为：u（4.5.1）===0.005mL相对标准不确定度为：ur（4.5.1）=5=0.1000%4.5.2移取标准溶液所用的5mL刻度吸管，从校准证书可知，该刻度吸管属于A级，吸量结果的示值误差为：0～1mL为0.010mL，1～5mL皆为0.014mL，按三角分布转化成标准不确定度。配制过程中，分别移取了0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL。则5mL刻度吸量管所产生的不确定度为5次移取标准溶液的标准不确定度的合成，即：