人类口腔上皮细胞巴氏小体的观察邹方东教授助教：阳敏glorym@qq.com四川大学生命科学学院一、实验目的 掌握人体性染色质的检测方法； 观察人体性染色质的形态特征及存在部位；为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考条件； 了解雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应的机制1949年M.L.Barr等研究发现了雌猫神经细胞核膜内具有凝缩的深染小体（巴氏小体），而雄性个体细胞中则没有.进一步研究发现：所有哺乳类雌体细胞中都可以见到这一结构。巴氏小体是雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体，在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。细胞分裂间期细胞核中出现异固缩现象：浓缩、染色深、无活性；细胞分裂期可形成正常的染色体形态；复制时间比有活性的X染色体稍迟一些。Barr小体的数目=n-1（n为X染色体数目）正常女人的体细胞间期核中Barr小体为1；正常男人的体细胞间期核中Barr小体为0；XXX女人的体细胞间期核中Barr小体为2；XXXX女人的体细胞间期核中Barr小体为3。定义：具有两份或两份以上的基因量的个体与只有一份基 因量的个体的基因表达趋于一致的遗传效应.举例：雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化（失活）， 只有一条X染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色 体数目不同但基因产物的剂量是平衡的。①巴氏小体是一条失活的X染色体；哺乳动物雌性个体两条X染色体的其中一条在受精后失活；②两条X染色体中哪一条失活是随机的；在同一哺乳动物的体细胞中，有些父源X染色体失活，有些为母源失活。③失活在胚胎早期发生(人类在胚胎发育16天时)，失活的X染色体在以后分裂中不会复活；当生殖细胞形成时，失活的染色体可恢复。④杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。**可编辑X-染色质的形态表现为一结构致密的浓染小体；轮廓清楚；大小1～1.5μm；常附着于核膜边缘或靠近内侧；形状为凸形、三角形、卵形、短棒及双球形等。正常女性口腔黏膜细胞中出现率：30～50%。1、器材： 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、牙签等2、试剂： 改良苯酚品红、60%醋酸（盐酸）3、实验材料： 女生口腔黏膜细胞（男生为对照)（1）取干净载玻片，用记号笔在将涂细胞的一面右上角做好标记；（2）嗽口（三次），尽可能除去口中杂物；（3）用牙签刮取颊部粘膜上皮细胞，弃第一次刮取物，在同一部位继续刮取；（4）将刮得的细胞涂在干净载玻片上，反复几次，使玻片上的材料尽可能多些;（5）空气中干燥；（6）涂片区滴上100μl的60%冰醋酸(盐酸)固定5分钟；（7）吸去冰醋酸，滴20μl改良苯酚品红染色2分钟；（8）压片；（9）将玻片置于显微镜下观察。五观察在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。箭头所示为巴氏小体（女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）注意事项1．刮口腔上皮前要漱口；2．刮时用灭菌牙签的宽边，勿用一角，以免划破口腔；3．第一次刮下的脱落细胞用酒精棉球擦去，在原位重复刮一下制片；4．盛放酒精棉球的小广口瓶，瓶盖用完即时盖好；5．涂片略干再加改良苯酚品红；6．染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质体不易区分；7．可数细胞的标准：核质染色呈网状或颗粒状；核膜清晰，无缺损；染色适度，周围无杂质。五、作业 1．分别观察男女各50个可数细胞，计算显示X染色质所占百分比。 2．观察中选绘4-5个典型细胞，示明X染色质体的形成和部位。六、思考题 1、巴氏小体是怎么形成的？女性的卵母细胞含有巴氏小体么？ 2、你认为是什么原因造成了“剂量补偿效应”？**可编辑
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