治疗性单克隆抗体的研究进展

治疗性单克隆抗体的研究进展 张鑫1，陈晓辰1(1．北京中医药大学100102) 【摘要l治疗性单克隆抗体的迅速发展给人类带来了福音，其在以肿瘤为主的多种疑难疾病的治疗 中发挥了无可替代的作用，虽然在发展过程中出现过种种问题，但是总体情况是令人欣慰的。从鼠 源抗体到如今的全人抗体，治疗性单克隆抗体的发展还包括了改型抗体、人源化抗体等不同发展阶 段．本文对单克隆抗体药物的发展加以叙述，对近五年上市的单抗新药加以综述，并对其在新药领 域的开发前景进行展望． 【关键词l单克隆抗体；治疗；新药 单克隆抗体是指由一个B淋巴细胞克隆产生的抗体。每一个B细胞表面的抗原受体只特异性的 识别一种抗原决定簇，因此，一个B细胞克隆卉生的抗体是同一克隆的。但由于B淋巴细胞在体外 很难培养，单克隆抗体便无法大量获得。1975年，Kohler和Milst发表的‘分泌预定特异性抗体的 融合细胞的连续培养》这一著名论著，开创了具有划时代意义的新技术——带l用B淋巴细胞杂交瘤 产生单克隆抗体(mAb)[rio1982年，单克隆抗体首次被用以人体治疗，其在治疗中凸显出的优点值得 肯定，与此同时，鼠单克隆抗体对人体的毒副作用也限制了其在治疗中的进一步应用。在接下来几 十年的时间里，生物技术的发展带动了单抗的发展，克服了鼠源单抗的弊端，增加了单抗新的生物 学功能，其应用领域也得到了拓宽。本文就单克隆抗体的发展、新药加以综述，并对其将来更好的 发展提出希望。 l单克隆抗体药物类型 单抗药物一般分为以下几类：治疗肿瘤的单抗药剂、抗肿瘤单抗偶联物、治疗其他疾病的单抗。 治疗肿瘤的单抗药剂较常见，比如利妥昔单抗、曲妥珠单抗等。抗肿瘤单抗偶联物又称免疫偶联物， 其由单抗和具治疗作用的物质两部分组成，根据治疗作用的物质的不同，可以分为放射免疫偶联物、 化学免疫偶联物、免疫毒素等。 2单克隆抗体的发展 2．1鼠单克隆抗体 最早用于治疗的是鼠单克隆抗体，但其存在的弊端：因其作为异种蛋白应用于人体可产生人抗 小鼠抗体(humananti-mouseantibody，HAMA)，HAMA既可诱发超敏反应，影响治疗效果，也不能 有效地激活人体的生物效应功能，在人体内半衰期短，在很大程度上限制了其在治疗范围内的应用。 同时，鼠单克隆抗体的制备过程存在着人道主义争议。为了解决鼠抗体存在的问题，科学家对其进 行了改造，使其人源化。 2．2鼠抗体的人源化改造 鼠抗体的人源化主要 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 包括人一鼠嵌合抗体(chimericantibody)、改型抗体(rebody antibody)、表面氨基酸残基的“人源化”、小分子抗体、双特异抗体(bispecificantibody，bisAb)幅1． 人一鼠嵌合抗体是目前来说较为成熟的基因工程抗体。它是利用DNA重组技术将鼠单克隆抗体的 轻、重链可变区基因插入含人体恒定区的表达载体中，转化为哺乳动物细胞表达出人一鼠嵌合抗体。 与鼠源性单克隆抗体相比较，其在人体内的半衰期长，免疫原性低，生物学功能强，同时也可根据 需要更换免疫球蛋白恒定区基因类别、型、亚型，从而改变抗体Fc段的功能。但是嵌合抗体仍然保 留着约30％的鼠源序列，还能引起不同程度的HAMA。 表面氨基酸残基的“人源化”：将鼠可变区片段(Fv)表面暴露的骨架区残基中和人Fv不同者 改为人源性，从而降低了其免疫原性，而不影响Fv的整体空间构象，更可靠地保留了亲本鼠单克隆 抗体的抗原结合特性。 2．3全人抗体 134 全人抗体技术的发展为肿瘤的免疫治疗开辟了一条全新的道路。与其它种类抗体相比，全人抗 体具有明显的优势：第一，其亲和力高、免疫原性低、不引起过敏反应可重复使用。第二：成本相 对较低且制备周期短、制备技术相对简单。乙i等哺1取人T、B细胞，在体外免疫B细胞并诱导使其永 生化后与T细胞经电融合形成杂交瘤细胞，体外培养，制备全人单克隆抗体。 3单克隆抗体药物 迄今为止，单抗药物已经有一定规模，比如治疗肿瘤的利妥昔单抗、曲妥珠单抗等。孙志强等 人用利妥昔单抗治疗非霍奇金淋巴瘤，6位患者的情况都比较乐观H1。曲妥珠单抗1998年在美国被 批准用于治疗HER2过表达的转移性乳腺癌(MBC)。刘静冰等人用曲妥珠单抗联合吉西他滨(GEM，健 择)治疗HER2阳性的硒C患者9例，取得较好效果晦1。 近五年来FDA批准上市的单抗药物主要有如下几种： 3．1依维莫司Afinitor Afinitor是一种口服药物，由诺华公司于2009年3月末宣布获得FDA批准用于一线治疗，并 且取得了不错的效果。该药用于治疗那些使用Sutent或Nexavar治疗失败的晚期肾细胞癌患者，其 靶向作用在作为肿瘤细胞分裂细胞和血管生成中心的调控器的mTOR蛋白，从而达到抑制肿瘤的作用 №’。除了单独用药用于治疗晚期肾细胞癌之外，还有与肢端肥大症治疗药SandostatinLAR联用治 疗小胰腺内分泌肿瘤的报道，结果显示84％的人达到了这缩小小胰腺内分泌肿瘤的治疗效果¨1。 最常见的副作用如下：口腔炎症、丧失精力、腹泻、食欲不振、呼吸急促、咳嗽、恶心、呕吐、 红疹及发烧。 3．2赛妥株单抗CertolizumabpegolCimzia 由美国UcB公司于2009年5月14日对外宣布获批上市的单抗药，用于治疗Crohn病和类风湿 性关节炎。Crohn病的治疗表明，该药可以减轻采用常规治疗不能完全缓解病情的中、重度克罗恩 病，而且该药对于那些不能耐受英利昔单抗或使用英利昔单抗无效的病人也有一定疗效Ⅲ。克罗恩 病又称局限性回肠炎、局限性肠炎、节段性肠炎和肉芽肿性肠炎。最常见的症状为腹痛、腹泻、营 养障碍，以致体重下降、发热等。便血、痔疮、肛门周围肿瘤、肛裂等肛门病变是其一大特征。由 于肠内细菌异常增殖、小肠及大肠异常运动而引起腹痛、腹泻，因而出现消化吸收能力下降的现象， 导致营养障碍，最后出现体重下降、贫血等现象。 两项国际性Ⅲ期临床研究涉及1300名中至重度克罗恩患者，结果显示按受本品治疗6周后，64 ％的病人产生临床反应，随后又对这些病人进行了进一步的研究。26周后研究结果显示：本品组和 安慰荆组中分别有62．8％和32．6％的病人仍可维持总的临床反应，且本品组中达到临床缓解的病人 数明显多于安慰剂组Ⅲ。从这些数据中我们可以看出，此药物对于治疗相应的疾病是比较有效果的， 对于患者来说也多了一种新的选择。但也并不是说赛妥株单抗就没有副作用了，有关临床研究显示， 该药物使用过程中出现的最常见的不良反应多为上呼吸道感染、发疹、尿道感染等，同时还伴有低 病发率的注射部位的疼痛。 3．3EculizumabSoliris 2007年在FDA的批准下上市。该药主要作用于人类补体系统末端蛋白C5上，抑制C5向C5a和 C5b的裂解以阻断炎症因子C5a的释放以及C5b-9的形成，保护哺乳动物细胞不受CSb一9介导的损 伤哺1。EculizumabSoliris主要用于治疗罕见血液病阵发性夜间血尿症(PNH)。 PNH是一种成年人疾病，红细胞不正常，一旦这些不正常的红细胞在血流中出现，就可能出现 溶血，导致贫血。根据严重程度不同，患者要忍受不同程度的疼痛、疲劳和虚弱，这就需要对患者 频繁输血，对于患者本身来说也是个很大的痛苦。 英国利兹教学医院的希尔曼(PeterHillmen)和同事检测了11位病人用eculizumab治疗，减 少了溶血，表现为乳酸脱氢酶下降，PNlt型红细胞的百分比降低。在开始eculizumab治疗前，每位 135 病人平均每月需要输2．1单位的血，治疗后显著下降到只需0．6单位。临床实验中，Soliris通常 耐受性良好。不良反应在临床研究中观察到：头痛，鼻咽炎，背部疼痛和恶心等。由于Soliris阻 断了机体正常的免疫系统，因此增加了患者对感染(特别是脑膜炎球菌感染)的敏感性，脑膜炎也 就顺理成章的成了最主要的副作用，对此相关机构已制定了特殊危险计划。 3．4帕尼单抗PanitumumabVectibix 2006年由FDA批准在美国上市，主要用于治疗结直肠癌，是第一个治疗直结肠癌的完全人源化 单克隆抗体药物。帕尼单抗是IgG2单克隆抗体，与表皮生长因子受体(EGFR)具有高亲和性阳1。EGFR 是位于细胞膜的蛋白酶受体，对维持细胞的生长、增殖等起关键作用。若其过度激活可以促使恶性 肿瘤细胞增殖、血管形成，促进转移，抑制凋亡n们。因该药可以与EGFR结合。因此可以抑制其转移 以及血管形成后肿瘤细胞的加速繁殖。 根据FDA的统计，EGFR可于70％的大肠直肠癌患者身上找到。Panitumumab与EGFR相结合，可 阻止其与表皮生长因子(EGFR)或转化生长因子a(TGF-alpha)结合，从而阻断癌细胞生长，起到 治疗的作用。 ． 据相关文献报道，所有转移性结直肠癌患者都应检测KRAS基因状态，并且只有KRAS野生型患 者才建议接受EGFR抑制剂帕尼单抗治疗u11。该药使用后易引起诸多不良反应。Yectibix的研究中， 有由感染所并发的严重皮肤疹、药物注射反应、腹痛、恶心、呕吐和便秘。与药物相关最常见的副 作用包括皮肤疹、疲惫、腹痛、恶心和腹泻，+最严重的副作用包括肺纤维化。 3．5lhuibizumabLucentis 2006获H)A批准上市。作用于人类血管内皮生长因子A，阻断VEGF-^的作用，．从而抑制眼部 小血管的增生，用于治疗湿性年龄相关性黄斑病变(wetAMD)。该病主要发生在60岁以上老年人群 中间，是首个能提高wetAMD患者视力的药物。 同时基因技术公司(Genentech)近期宣布RanibizumabLucentis可改善视网膜静脉阻塞(RVO) 患者的视力。本品可抑制一种在血管生成和血管通透性增高中具有重要作用的蛋白——-vEGF-A，从 而使视网膜分支静脉阻塞(branchRVO，BRVO)和视网膜中央静脉阻塞(centralRVO，CRVO)症状得到 缓解。该药的问世，解决了以往在治疗CRVO上的难题。 在一项针对397名BRVO患者的临床试验研究中，受试者随机接受药物治疗，以治疗6个月后患 者的视力改善程度作为评判 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ，结果显示，本品低剂量组、高剂量组病人的视力表成绩分别平均 改善了16．6和18．3个字母，而安慰剂组仅改善了7．3个字母(与安慰荆组相比，均为P 机制 综治信访维稳工作机制反恐怖工作机制企业员工晋升机制公司员工晋升机制员工晋升机制图 的最早环节中起关键作用，阻断a。整合素可防止 自身免疫细胞通过与中枢神经的微血管粘附而进入中枢神经系统，从而减轻炎症性脱髓鞘反应n引。临 床试验表明该药主要通过抑制粘附过程而防止出现新病灶，对已有病灶也有减轻炎症反应的作用， 从而减少复发。 那他珠单抗对复发型骼的疗效和安全性评价来自两项临床研究。在第一项研究中，与安慰剂相 比，本品可使Ms复发率降低66％。在第二项研究中纳入的是已经接受过13-1a干扰素(interferon beta-la，^vonex)治疗的患者，但患者在接受13一la干扰素治疗期间发病次数不低于1次。患者随 136 机接受本品或安慰剂治疗，同时2组患者仍继续接受13-Ia干扰素的治疗。研究显示，与Avonex 相比，本品能将MS复发率降低54％，由此可见其效果。 但同时关于那他珠的不良反应报道也很多：常见的不良反应则包括非严重性的感染、头痛、抑 郁、关节痛以及月经紊乱等，通常反应轻微。严重不良反应为感染，包括肺炎、暂时性的过敏反应、 抑郁以及胆石症，但不常见。 4展望 单克隆抗体的发展已使抗体制备技术进入了一个全新的时代，相关药物也被广泛应用到诸多领 域，如戒毒、血液性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤、器官移植等等，为广大患者带来了福音。在肯 定单抗药物优点的同时，我们也不能忽视其存在的问题。 用以治疗白血病、风湿性关节炎的新药TGNl412临床研究中出现极为罕见的不良反应n射，其中 6名受试者接受药物注射后不久，就出现了严重的过敏反应，其中2人出现生命危险。2009年12月 11日，BiogenIdec公司公布在研人类抗体CD-20单克隆抗体Ocrelizumab的首个III期临床使用 结果，同样出现了不良反应。虽然出现了不良反应，但是我们不能为之惧怕，新生事物成长的过程 中必然会经受挫折。 同时，单克隆抗体在中草药中的应用也颇具潜力n引：可以利用单克隆抗体对药物原材料进行检 测分析、用于实验室中提取高纯度的有效成分、用于实验室及药厂生产中质量的控制、中药真伪的 鉴定以及开发治疗药物。 随着生物医学和生物技术的不断发展，我们有理由相信，在不久的将来，会出现更高靶向性的 单抗和药效更强的“弹头”。同时，技术的成熟、科技的发展，单抗的副作用以及成本都将减小，为 其推广起了铺垫作用，物尽其用。 参考文献 [1]马东礼．单克隆抗体生产技术的现状与前景[J]．‘国外医学》预防、诊断、治疗用生物制品分册，2001，24(1)：16． [2]贾建桃，马丽菊，王秦秦．治疗性单克隆抗体研究新进展[J]．医学综述，2007，13(5)：325． [3]LiJ，SaiT，BergerM'eta1．HumanantibodiesforimmunotherapydevelomentgeneratedviaahumanB cellhybridomatechnology[J]．ProcNatlhcadSic，2006，103(10)：3557—3562． [4]孙志强。王季石，卢英豪eta1．自体造血千细胞移植联合利妥昔单抗治疗非霍奇金淋巴瘤6例[J]．中国组织工 程研究与临床康复，2010，14(6)：1140． [5]刘静冰。秦叔逵，刘秀峰eta1．曲妥珠单抗联合吉西他滨治疗眶R2阳性的转移性乳腺癌[J]．临床肿瘤学， 2009．14(10)：916-918． [6]FDA批准Afinitor用于治疗使用Sutent或Nexavar治疗失败的晚期肾细胞癌患者[J]．齐鲁药事，2009，28(5)： 274． [7]诺华肾癌治疗药hfinitor能缩小胰腺内分泌肿瘤[J]．临床合理用药，2009，2(13)：3． [8]DaneseS，StefanelliT，OmodeiP，ZatelliS，80nifacioC，BalzariniL’RepiciA，MalesciA．Successful treatmentoffistulizingCrohn’sdiseasewithcertolizumabpegol[J]．InflamBowelDis．2008Feb，14(2)： 292—293．[9]范明．抗TNF抗体产品CertolizumabPegol[J]．科学进展，2006，30(8)：381． [10]王妍，李世敏．美国FDA2005--2007年批准和待批准生产的生物制品[J]．中国生物制品学杂志，2008，21(6)： 539—544． In]沈林．化疗联合贝伐单抗及帕尼单抗与化疗单纯联合贝伐单抗在治疗转移性结直肠癌作用中的比较[J]．循证 医学。2009，9(3)：141-143． [12]刘慧龙．EGFR单抗治疗结直肠癌研究进展[J]．临床肿瘤学杂志，2008，13(10)：948-953． [13]SiddiquiAD，Piperdi&AnnSurgOncol，KRASmutationincoloncancer：amarkerofresistanceto EGFR-Itherapy[J]．2010Apr：17(4)：1168-76．Epub2009Nov20．Review． [13]2010年有望上市或增加新适应证的4个药物[J]．药学进展，2010，34(2)：95． [IS]CoylePK．Roleofnatalizumabinthetreatmentofmultiplesclerosis[J]．AmJManagCare．2010Jun； 16(6Suppl)：8164-70． [16]新药TGNl412临床研究中出现极为罕见的不良反应[J]．中国处方药，2006，N049：70-71． [17]朱学泰。马瑞君，谢溱．单克隆抗体在中草药研究中的应用前景[J]．中草药，2005，36(6)：945—947． 137