实验八:类胡萝卜素的提取
1.初步了解天然化合物的提取方法。
2.掌握薄层色谱(TLC)的原理、用途及使用方法。
利用类胡萝卜素在乙醇及石油醚中的溶解性,使番茄红素的红色
素和β-胡萝卜素的黄色素得以富集。
实验室
17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划
常用的薄层色谱,其原理是利用混和物中各组分在不相混
溶的两相即流动相(展开剂)和固定相(吸附剂)中吸附和解吸的能
力的不同,也可以说在两相中的分配不同,当混合物随流动相(展开
剂)流过固定相(吸附剂)时,发生了反复多次的吸附和解吸的过程,
从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
:番茄酱、乙醇、石油醚、丙酮、饱和食盐水、无水硫酸钠、硅
胶、CMC溶液
圆底烧瓶、球形冷凝管、分液漏斗、锥形瓶、毛细管等
在50 ml(或100 ml)圆底烧瓶中称取4 g克番茄酱(一勺子),加入10 ml95%的乙醇,水浴加热回流3~5min。冷却后过滤(普通过滤),将滤纸和滤渣转移到烧瓶,再加10 ml的石油醚(60~90)
饱和食盐水摇匀,分出有机层,加无水硫酸镁干燥。 加热回流3min,过滤,合并两次的滤液,加5ml
(1)制板 将5g硅胶G(GF254)在搅拌下慢慢加入12ml0.5% 的羧甲基纤维素钠水溶液中,调成糊状,然后将其倒在洁净的玻璃片上,
用手轻轻振动,使涂层均匀平整,晾干。
标准
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:无纹路,无团粒,无
可看到玻璃的薄的涂料点。
(2)活化 薄层板经自然晾干后,再放入烘箱活化,进一步除去水
分。
(3)点样 用铅笔(最好用2B铅笔)在层析板上距末端1cm处轻轻画一横线,然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样。若颜色浅,可
重复点样,需前次样点挥发干后进行。样点直径不应超过2mm,否则易拖尾影响测定。样点间距在1~1.5cm为宜, 太近易重叠。 (4)展开缸内壁贴一片环绕周长的滤纸,倒入展开剂,液面高度约
5mm。滤纸下面浸入展开剂中,以使层析缸被展开剂饱和。待样点干
燥后,将层析板点样一段放入层析缸中,样点不得浸泡在展开剂中,
盖好瓶盖。待展开剂上升至前沿约1cm处取出,迅速在展开剂最前沿
处画一横线。晾干,量出展开剂和样点移动的距离。 (5)计算比移值Rf 。
Rf =样点移动的距离/展开剂移动的距离
对于一种化合物,当展开条件相同时Rf值是一个常数。Rf可用作定性
分析
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的依据。
1.展开剂的正确选择。
2.画点样起点线时应尽量避免划破硅胶,且起点线离边缘的高度要
大于展开瓶中的展开剂高度,以避免样点浸入展开剂。 3.开始展开后,则不能再移动展开瓶。 4.一根毛细管不能点多个样品。
5.从展开瓶中拿出的薄层板应迅速划好终点线,否则展开剂挥发不利
于计算比移值。