[doc格式] 催产素对孕晚期胎鼠神经保护作用的研究

[doc格式] 催产素对孕晚期胎鼠神经保护作用的研究 催产素对孕晚期胎鼠神经保护作用的研究 248ChineseJournalofWomanandChildHealthResearch,2009,Vo1.20No.3 催产素对孕晚期胎鼠神经保护作用的研究 陈丽,于红,任慕兰 (1.东南大学临床医学院,江苏南京210009;2.东南大学附属中大医院妇产科,江苏南京210009) [摘要]目的研究孕晚期催产素对胎鼠海马的神经保护作用及其机制.方法将孕20天胎鼠全脑制作成厚2,3mm的 海马脑片.各组脑片经过药物人工脑脊液灌流后给予缺氧无糖模型15min,苏木素?伊红染色,尼氏染色和原位末端标记法检测 评价缺氧损伤程度.结果经过缺氧无糖后,10,,10,,10mol/L催产素+一氨基丁酸组CA1,CA3区尼氏染色神经元密度分 别为 81.27?4.57,83.33?5.75,79.53?5.03,38.53?6.56,33.60?4.21,32.93?3.65; 原位末端标记法凋亡神经元为4.87? 1.5l,5.47?1.33,6.07?1.28,3.07?1.39,1.80?0.67,2.13?0.74,对照组CA1,CA3区尼氏染色神经元密度为7O.17?4.95, 29.33?5.96;原位末端标记法凋亡神经元为l1.67?3.18,4.78?1.80.10 一,l0,,l0mol/L催产素+_y-氨基丁酸组cA1,CA3 区尼氏染色神经元密度与对照组cAl,CA3区相比差异有统计学意义 (t分别为一9.407,一8.864,一7.207,一5.427,一3.925, 一 3.817,均P<0.O1),l0一,10,,10moVL催产素+一氨基丁酸组 cAl,CA3区凋亡神经元数目与对照组CA1,CA3区相比差 异有统计学意义(t分别为17.428,18.041,16.931,4.761,17.213,13.859,均P<0.01).催产素+一氨基丁酸不同剂量之间差异 无统计学意义(P>0.05).结论催产素对孕晚期胎鼠海马有神经保 护作用,其机制可能与-氨基丁酸有关. [关键词]催产素;海马;神经保护;一氨基丁酸 doi:10.3969/j.issn.1673—5293.2009.03.004 [中图分类号】R338[文献标识码】A[文章编 号]1673—5293(2009)03—0248—04 Neuralprotectionofoxytocmonratfetalhippocampusinlatepregnancy CHENLi., YUHong2,RENMu.1an (1.ClinicalMedicalCollegeofSoutheastUniversity,JiangsuNanjing210009,Ch/na; 2.DepartmentofGynecologyandObstetrics,TheAffiliatedZhongdaHospitalofSoutheastUniversity,JiangsuNanjing210009,Ch/na) rAbstract]ObjectiveTostudyneuroprotectiveeffectofoxytocinonratfetalhippocampusinlatepregnancyanditsmechanisms.Methods Thebraintissuesofthefetalratsinlatepregnancy(2Odaysaftergestation)wer etakenandbrainsliceswitllthicknessof2,3mm containinghippoeampalstructureswereprepared.Afterperfusionwitllartificialcerebralspinalfluid(ACSF)(ingroupA,ACST containingnootherdrugs;ingroupB,ACSFcontaining10, mol/Lofgamma-amimobutyricacid(GABA);ingroupC,ACSFcontaining 10-6mot/LofOT. 10”mol/LofBIC(blockerofGABA)and10mol/LofGABA;ingroupD,ACSFcontainingrespective10-?, lOI7and10-8mol/LofOTandl0mol/LofGABA)for15min.thenbrainslicescontaininghippocampalstructuresingroupwerekept intheoxygenanduc0sedeprived(OGD)ACSFfor15mintoestablishahypoxicmode1.Thehematoxylin—eosinestaining,Nissl—staining andterminaldeoxynuleotidetrallsferase.mediateddU1’Pnickendlabeling(I’UNEL)techniquewereusedtoevaluatetheneuraldamage. ResultsAfteroxygenandglucosedeprivationfor15min.theneuraldensitiesinCA1andCA3areasofhippocampusinrespective10,, 10 一’and10-8mol/Lofoxytocin(OT)andGABAgroups(OT+GABAgroups)byNissl’sstainingwere81.27?4.57,83.33?5.75, 79.53?5.03.38.53-4-6.56.33.60-4-4.21and32.93-4-3.65respectively,whilethoseinthecontro1groupswere70.17-4-4.95and 29.33-4-5.96respectively.thereweresignificantdifferencesintheneuralden sitybetweendifferentOT+GABAgroupsandthecontrol group(t=一9.407,一8.864,一7.207,一5.427,一3.925and一 3.817respectively,allP<0.01).Thenumberofapoptosticneurons inCA1andCA3al”ea.9ofhippocampusinrespective10-6. 10andl0一mol/LofOT+GABAgroupswere4.87-4-1.51,5.47?1.33, 6.07?1.28.3.07-4-1.39,1.80?0.67and2.13?0.74respectively,whiletlloseinthecontrolgroupswere11.67?3.18and4.78? 1.80respectively.thereweresignificantdifferencesinthenumberofapeptosticneuronsinCA1andCA3Rressofhippocampusbetween differentOT+GABAgroupsandtIlecontrolgroup(t=17.428,18.o41,16.931,4.761,17.213and13.859respectively,allP< 0.01).BetweendifferentdosagesofOT+GABAgroupstherewerenostatisticaldifferencesinnumberofapoptosticneursons(allP> O.051.ConclusionOxytocinhasneuralprotectiveroleforratfetalhippocampusinlatepregnancy,andmechanismofactionmayberelated t0GABA. [Keywords]oxytocin(OT);hippocampus;neuralprotection;gamma—ami mobutyricacid(GABA) 妊娠晚期胎儿逐渐发育成熟面临分娩,而分娩过程对胎 脑来说是一种具有高损伤风险的应激性事件.因此临产前应 该有机制提醒胎儿预先为分娩做好适应性准备.胎儿的 中枢神经在晚孕期以及分娩过程也发生了适应性的变化.催 产素(oxytocin,OT)作为参与分娩的重要激素,不仅在母体分 娩过程中发挥重要作用,对胎儿也有着不可忽略的影响.分 娩过程中OT除了经典的促进子宫收缩作用以外,对于胎儿 [收稿日期】2009一O1—15 [作者简介】陈丽(1982一),女,在读硕士研究生,主要从事围产医学研究. [通讯作者】任慕兰,教授. 神经系统的影响还未知,故本实验对此加以研究. 1材料与方法 1.1动物与材料 1.1.1实验动物 8只SD大鼠,孕20天,体重400~450g,由南京市江宁区 青龙山动物繁殖场提供. 中国妇幼健康研究2009年第20卷第3期249 1.1.2试剂器材 人工脑脊液(artificialcerebralspinalfluid,ACSF)成分 (mmol/L)0’:葡萄糖10.0,NaC1124,KC13.3,NaH2PO4 1.25,MgSO2,NaHCO325,CaC122,通入含95%O2+5% CO,的混合气体30min,流量为200mlMmin,HC1调至pH为 7.35—7.45.一氨基丁酸(gamma—amimobutyricacid,GABA) (Sigma);荷包牡丹碱(bicuculine,BIC,GABA受体阻断剂) (Sigma);OT(上海第一生化药业);原位末端标记法 (TUNEL)试剂盒(Promega公司);数显恒流泵(上海沪西分析 仪器厂);混合气体95%O2+5%CO2,95%N2+5%CO2(南 京通广气体). 1.2方法 1.2.1离体脑片 孕鼠乙醚吸入麻醉,常规腹部消毒剖宫产逐个取出胚胎, 剥掉胎盘暴露出胎鼠立即断头,剥离出全脑,置于用混合气体 饱和的0,4cc的ACSF中降温1min.用刀片(上海飞鹰)冠 状面切割全脑制作2mm脑片,保留包含海马的脑片,共得包 含海马区的脑片33片.将脑片置于温度为32.0?0.5~C的 ACSF中,通人混合气体95%O,+5%CO2,流量为20OraL/rain, 孵育2,3h备用. 1.2.2分组给药 A(对照)组:ACSF灌流15min;B组:含GABA10mol/L的 ACSF灌流15min;c组:依次用含OTt0,mol/L,BIC10一mol/L, GABA10moVL的ACSF各灌流15min;D组:?依次用含OT 10一mol/L,GABA10.mol/L的ACSF各灌流15rain;?依次用 10,mol/LOT,GABA10.mol/L的ACSF各灌流15min;?依次 用10一mol/LOT,GABA10mol/L的ACSF各灌流15rain.数显 恒流泵控制药物ACSF的灌流速度为2mL/min,同时通人混合气 体95%O2+5%CO2,流量为200mL/min. 1.2.3缺氧无糖模型 药物ACSF灌流后的各组脑片经过缺氧无糖(oxygenand glucosedeprivtion,OGD)模型15min,即将95%O2+5%CO2的 混合气体换为95%N+5%CO的混合气体,并且将ACSF中 的葡萄糖(10.Ommo1./L)换为同浓度的蔗糖(10.Ommol/L), 诱导脑片的缺氧损伤.之后恢复供氧供糖ACSF灌流30min 后进行损伤指标评价. 1.2.4评价 1.2.4.1苏木素一伊红染色脑片经4%甲醛固定后,常规 石蜡包埋切片.用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗,苏木素染 色5min,伊红染色2min,梯度酒精脱水后二甲苯透明,中性树 胶封片.切片光镜20×10和40×10倍视野下观察各组海马 CA1,CA3区神经元排列,细胞形态变化以及细胞核情况. 1.2.4.2尼氏染色石蜡片晾干后依次经二甲苯脱脂梯度 酒精脱水,然后甲苯胺蓝染色30min,切片经梯度酒精分色脱 水后,二甲苯透明,中性树胶封片.比较各组海马CA1,CA3 区尼氏染色的神经元数目.光镜20×10倍下定位海马CA1, CA3区,然后40×10倍下随机选取不重叠的3个视野,计数 外形及内部结构完整的神经元数目并取均值. 1.2.4.3原位末端标记法凋亡具体操作按照试剂盒说明 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf .石蜡包埋组织切片后依次经过二甲苯,梯度酒精水合以 及蛋白酶K处理,切片标本再经过通透性处理后脱氧核糖核 苷酸末端转移酶(TdT)作用下生物素biotinylate标记的dUTP 与样本DNA的标记反应,然后加入连接了辣根过氧化酶的链 霉亲和素(Streptavidin—HRP)以及底物的显色反应,苏木素复 染后封片光镜观察.每张切片光镜20×10倍下定位海马 CA1,CA3区,然后40×10倍下随机选取不重叠的3个视野, 计数阳性细胞数,阳性染色为棕黄色,取平均值. 1.3统计学方法 用SPSS13.0统计软件包进行统计学分析.实验数据以 均数? 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差(?S) 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示,组问行t检验及方差分析检验显 着性. 2结果 2.1苏木素一伊红染色结果比较 光学显微镜下,细胞核呈深蓝色,胞浆呈淡红色.A组,B 组,C组病理改变明显,细胞排列紊乱,层次不完整,稀疏分布 不均匀,片状坏死,细胞肿胀,空泡变性,核固缩,胞质浓缩核 膜不清,核仁消失.D组海马层次较清楚,排列较整齐,细胞 形态规整,偶见肿胀细胞或核固缩,坏死,见图1,图2. 图1对照组(HE×400倍) Fig.1MorphologyofcellsinthecontrolgroupbyHE staining《HE×400) 图2OT(10)+GABA组(HE×400倍) Fig.2MorphologyofcellsinOT(10)+GABAgroup byHEstaining(HE×400) 2.2尼氏染色结果比较 比较B,c,D组与A组CA1和CA3区神经元密度.结果 显示:D组神经元密度比A组高,且差异有统计学意义(P< 0.01),D组不同剂量之间神经元密度比较无显着差异.B,C 组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05),见表1. ChineseJournalofWomanandChildHealthResearch,2009,Vo1.20No.3 表1尼氏染色海马CA1,CA3区神经元密度(?S) Table1TheneuraldensityinhippocampusCA1andCA3areasbyNissl’8stain ing{)~?S) 注:与A组比较,P<0.01. 2.3原位末端标记法凋亡程度比较 比较B,C,D组与A组CA1和CA3区神经元凋亡程度. 结果显示:D组CA1,CA3区凋亡神经元数目较A组少,且有 统计学意义(P<0.O1),D组不同剂量之间神经元凋亡数目无 剂量依赖相关性.B组CA1区,C组CA1和CA3区凋亡神经 元数目与A组比较差异无统计学意义(P>0.05).B组CA3 区神经元凋亡数目较A组CA3区多,差异有统计学意义(P< 0.05),见表2. 表2海马CA1,CA3区神经元凋亡数目(?S) Table2ThenumberofapoptostieneuronsinhippocampusCA1andCA3areas (?S) 注:与A组比较,尸<0.05,”P<0.O1. 3讨论 离体脑片排除了血压,温度,电解质和血脑屏障等因素的 干扰,在ACSF缺氧无糖中诱导的脑片损伤,是模拟脑缺氧的 一 种简便的体外模型,已广泛应用于脑缺氧损伤机制和药物 保护作用的研究j.本实验利用离体脑片诱导缺氧无糖模型 来研究催产素的神经保护作用及其机制. GABA是广泛分布于中枢神经系统内重要的神经递质, 在神经元不同的阶段发挥不同的效应.对于成熟神经元, GABA是重要的中枢抑制性神经递质,发挥超极化抑制作用. 赵彤等的实验研究以神经系统发育已成熟的成年大鼠为对 象,在急性缺氧后,GABA可以明显提高海马神经元的抗缺氧 能力.对于幼稚神经元,GABA在其发育过程中发挥兴奋性 效应,是一种兴奋性神经递质,起重要神经营养作用.本 实验研究对象为胎鼠,神经系统发育未成熟,GABA为兴奋性 神经递质,故急性缺氧中B组与A组相比未能显示出抗缺氧 能力.然而,在急性缺氧环境中,GABA对于幼稚神经元的去 极化兴奋作用是否会加重海马神经元的缺氧损伤还不清楚, 需要进一步的研究. 分娩过程对于胎儿来说是一种急性应激事件,此时胎儿 的神经系统发育并未成熟,GABA仍以发挥兴奋性神经营养 作用为主.AnonsI6发现在分娩前一段时间内海马脑片中 GABA能够兴奋细胞的比例下降.Tyzio等实验研究显示, 妊娠晚期0T能够引发胎鼠海马神经元中GABA作用由兴奋 到抑制的短暂改变.此外,陈静芳等的动物实验显示0T 能够抑制大鼠大部分海马CA1区神经元自发以及诱发的放 电活动.本研究在急性无糖无氧环境中,单独B组并不能减 少神经元的缺氧损伤,OT联合GABA组能够降低幼稚神经元 的损伤,初步显示出0T对幼稚神经元的保护作用;而c组, BIC阻断GABA受体通道后神经元损伤无明显降低,说明在 幼稚神经元中阻断GABA受体通道后OT抗缺氧神经保护作 用消失,显示了OT的神经保护作用的发挥与神经递质GABA 有关. OT是参与分娩与泌乳的经典激素,也是一种重要的神经 递质j,其对胎儿的中枢也发挥重要作用.虽然过量的外源 性OT的使用导致过强的子宫收缩会加重胎儿的宫内缺氧,但 有报道显示宫内窘迫的胎儿其OT浓度远远高于母体OT浓 度.说明缺氧环境中胎儿可能自身合成OT来抵御分娩中 伤害性事件.分娩中非强直性子宫收缩引起的胎盘血流量降 低形成的缺血缺氧环境可能促使胎儿中枢合成更多的OT来 抵御伤害.由此可见OT在一定范围浓度内引发的子宫收缩 可以促使其对胎儿神经保护作用的发挥. 孕晚期OT使幼稚神经元GABA的抑制性改变来减少神 经元活动和代谢需要,增加了胎儿对分娩过程中缺氧和低血 糖的耐受力,发挥对胎儿海马的神经保护作用.本研究结果 对胎儿神经保护提供了新的靶点,为降低临床分娩中胎儿脑 缺氧损伤所致的新生儿缺氧缺血性脑病的发病提供了新方 向.本研究尚有很多有待进一步拓展的工作,如:需要在进一 步的动物实验中扩大OT浓度梯度范围,寻找窗口剂量;胎盘 屏障对OT作用浓度的影响.夕源性OT对于内源性OT的影 响;在幼稚神经元中0T对于神经递质GABA效应的影响及其 具体的机制等.此外采用循证医学的方法跟踪研究对象在神 经系统发育过程中的远期差异可望为本研究提供更有力的临 床证据. [参考文献] [1]BrownCH,GrattanDR.Doesmaternaloxytocinprotectthefetal brain[J]?TrendsEndocrinolMetab,2007,18(6):225~26. [2]PuglieseAM,CoppiE,VolpiniR,eta1.RoleofadenosineA3 nOtorsonCA1hippocampalneurotransmissionduringoxygen— glucosedeprivationepisodesofdifferentduration[J].Biochem Pharmacol,2007,74(5):768-779. 中国妇幼健康研究2009年第20卷第3期251 [3]刘振伟.实用膜片钳技术[M].北京:军事医学科学出版社,2006: 148-152. [4]赵彤,王福庄,黄燕华,等.GABA对大鼠海马脑片缺氧损伤的保 护作用[J].中国应用生理学杂志,2003,19(1):16—18. 『5]RepresaA.BenAY.Tmp~cactionsofGABAonneuronal development[J].TrendsNeurosci,2005,28(6):278-283. 『61Anons.GABAsignalinginfetalbrain:Inhibitoryswitchduring deliverylJ1.Neurosci,2007.13(3):194. 『7]TyroR,CossartR,KhalilovI,eta1.Maternaloxytocintriggersa transientinhibitoryswitchinGABAsignalinginthefetalbrainduring delivery『J].Science.2006.314(58o6):1788-1792. [8]陈静芳,胡祁生,王勇,等.催产素抑制大鼠海马CA1神经元电 活动[J].基础医学与临床,2004,24(3):306-308. f9fGimplG.FahrenholzF.Theoxytocinreceptorsystem:structure, function.andregulationfJ].PhysiolRev,2001,81(2):629-683. 『101CarbillonL.Commenton”maternaloxytocintriggersatransient inhibitoryswitchinGABAsignalinginthefetalbrainduring delivery”[J].Science,2007,317(5835):197. [责任编辑:黄燕萍] 产科医护人员接受及给予人性化服务的状况研究 游)11,丁辉,陶曼枫,冯静,王斌,石琦 (1.首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院,北京100026;2. 卫生部妇幼保健与社区卫生司,北京100026) [摘要】目的了解产科医护人员接受及给予人性化服务的状况,为改 善医护人员服务状态提供依据.方法在北京,上 海,深圳6个综合医院和妇幼保健院进行定性和定量调查,对3O名门 诊早上9点进入医院接受产前检查的孕妇和58名产科医护 人员进行访谈,对120名门诊孕晚期孕妇进行问卷调查.结果门诊医生每3,6分钟接诊1名就诊者,对就诊者想了解的病情 解释少.大多数门诊出诊医生没有时间上厕所及喝水,中午没有时间休息,大多数医院没有为出诊医生提供饮水和工作餐等便捷 服务.从孕妇的角度分析,医生对孕妇的微笑次数多于咨询台,分诊台,挂号室,收款台的工作人员,差异有显着性(t=3.426,P< 0.05);孕妇对医生服务态度的满意度得分(3.93?0.64)比对护士和前台工作人员(3.43?0.77)高,t=2.730,P=0.01.但孕妇 对”医生看病时是否称呼您的名字”,”看病时是否告诉您相关的保健知识”,”看病所用时间”较为不满意;认为医生的接诊量过 大.结论医生能够热情的为就诊者服务,但是医生接诊量大,自身得到的人性化服务不足,就诊者对接诊量,看病时间和获取知 识方面不满意.医院过多注意对就诊者的人性化服务,疏忽了对医护人员的人文关怀服务,呼吁加强对医疗人才的保护. [关键词】人性化服务;产科医护人员;微笑;接诊量;满意度 doi:10.3969/j.issn.1673—5293.2009.03.005 [中图分类号]R715.5[文献标识码]A[文章编号】1673—5293(2009)O3—0251一o3 Astudyoncurrentsituationofreceivingandperforminghumanizationservic es ofobstetricstaffsin6hospitalsinChina YOUChuan,DINGHui,TAOMin.feng,FENGJing,WANGBin,SHIQi (1.&MCHHospital,The&Obsta6caland~necoiogicalHospitalof(MedicalUniversity,&略1~026,China; 2.DepartmentofMCHandCommunityHealth,MinistryofHealthofChina,Be~.ng100026,China) 『Abstract]objectiveToinvestigatecurrentsitiationofreceivingandperforminghumanizationservicesofobstetricstaffs(doctorsand nurses).so818toprovideabasisforimprovingservicestatusofmedicalworkers.MethodsThequalitativeandquantitativeinvestigationsof humanizationservicesofobstetricworkerswereconductedin6generalandMCHhospitalsinBeijing,ShanghaiandShenzhencitiesovera periodfromSeptembertoDecemberin2004.30pregnantwomenwhocanletothesehospitalstoreceiveprenatalexaminationat9amand 58obstetricdoctorsandnurseswereinterviewed.and120pregnantwomenintl1e3rdtrimesterofpregnancyinclinicwereinvestigatedwith aquestionnaire.ResultsMostdoctorsmetapatientper3—6minute,theyalmo sthadnotimetoexplainmoreaboutthedisease.Most clinicdoctorshadnotimetogototoiletorhaveadrink.hadnotimetotakearestinthenoon.Mosthospitalsdidnotsupplyconvenient servicesofdrinkingoreatingforsuchbusydoctorsandnurses.Frompregnantwomen’sview.t}leobstetricdoctorsgavemuchmoresmiles toclientthanworkersinconsultation.register.receptionandcashdesks,tIlereweresignificantdifierences(t=3.426.P<0.05),and t}leobstetricdoctorsobtainedhighersatisfactionSCOreS(3.93?0.64)frompregnantwomenthannursesandworkersinotherservice stations(3.43?0.77)(t=2.730.P=0.01).Butpregnantwomenwereunsatisfactorywith”Didtlledoctorcallyournamewhenyouvisit her?”,”Didthedoctortellyousomehealthcareknowledge?”,”Wastl1evisittimeenouforyou?”,山eyalsocomplainedthattlle doctorshavetomeettoomuchpatientstohavemoretimestodo山 ese.CondusionTheelihieobstetricdoctorsservedthepatients zealously.buttheyhavetomeettoomuchpailentsandcann’treceiveenouhumanizationservicesthemselves.Thevisitorsare unsatisfactoryintoomuchmeetingnumbersofthedoctor.visittimeandacquirementofrelatingknowledge.Thehospitalspaymore attentioninhumanizationservicesofthedoctorsandnursesfor出 epatients.buttlleyUSUallynellecthumanizationservicesfortheirstaffs. 1Keywordslhumanizationservice:obstetriedoctorandnursesmile:meetnumber:satisfaction “人性化服务”的概念于2000年11月在巴西西阿拉 (Ceara)召开的世界人性化分娩大会上,被写进西阿拉宣言, 明确定义为:人性化是指通过人与人之间交流和关爱方式,使 人们能够理解生活的基本意义,感受到人情的温暖,并和以下 【收稿日期]2008—12—14 [基金项目]卫生部妇幼保健与社区卫生司妇幼卫生政策研究课题资助项目(2005) [作者简介]游JII(1968一),女,副主任医师.主要从事妇幼保健,医院人性化服务和健康传播的研究. 【通讯作者]丁辉,主任医师.