肥达反应实验
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肥达实验操作
步骤
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肥达实验操作步骤
1. 血清稀释:《1:20倍》0.25ml(血清)+4.75ml(生理盐水)
?混匀分别装入5支试管各0.5 ml(横排)再加2.5 ml(生理盐水)混匀加入第二排(1:40)至稀释倍数为1:320。
2. 菌悬液稀释:《1:10》?0.3 ml菌悬液(使用前混匀)+2.7
ml?生理盐水?混匀加入个试管中各0.5ml混匀(纵排)。
3. 空白对照:取5支试管各加0.5ml生理盐水+0.5ml已稀释
好的菌悬液混匀放入37.0?水浴箱12h观察结果。
篇二:肥达反应
肥达氏反应
肥达试验是一种试管凝集反应。 用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。
[项目名称]肥达氏反应
这项化验是检查患者是否被伤寒或副伤寒杆菌感染。
[别名]伤寒杆菌凝集试验
[英文缩写]WR
[参考值]
伤寒杆菌凝集价H1:160,O1:80;
副伤寒凝集价A1:80,B1:80,C1:80
[临床意义]机体感染伤寒、副伤寒杆菌后会产生相应抗体,正常人因隐性感染或,血清中可含有一定量的抗体。一般当H?1:160,O?1:80,副伤寒凝集价?1:80时,才有诊断意义。病程中应每周复查一次,如病人H与O的凝集价均高于参考值或较原凝集价升高4倍以上,则患伤寒的可能性很大。若H凝集价高而O低于正常值,则可能是以往预防接种疫苗的结果或非特异性回忆反应所致。
伤寒、副伤寒血清凝集试验(肥达氏试验)
正常范围:0,1:80 H,1:160
A、B、C均,1:80
检查介绍:本试验(又称肥达Widal试验)可协助诊断伤寒、副伤寒。一般病人抗体多在发病后1周出现,以后逐渐上升。
临床意义:O、H凝集价均有增高者可诊断伤寒;O及A、B、C(其中之一项)凝集价增高时,可诊断甲、乙、丙的某一种。最有意义者系其凝集价逐渐上升并超过参考值。
三、肥达反应
【原理】
肥达试验是一种试管凝集反应。用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊
断的参考。
【材料】
1.患者血清1:10稀释
2.伤寒杆菌O菌液、H菌液、甲、乙型副伤寒H菌液
3.生理盐水、试管、吸管、56?水箱等
【
方法
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】
1.取清洁小试管32支,分成4排,每排8支,依次编号。
2.于小试管内各注入0.5ml生理盐水。
3.于每一排第一管内加入1:10稀释的患者血清0.5ml,用1ml吸管吹吸三次,混匀,吸出0.5ml注入第二管作对倍稀释,„„依次稀释至第7管,弃去0.5ml,第8管为对照。
4.从第8管开始,从后向前,第一排各管内注入伤寒杆菌H菌液0.5ml;第二排各管注入伤寒杆菌O菌液0.5ml;第三排各加入甲型副作寒杆菌H液0.5ml;第四排各管加入乙型副伤寒杆菌H菌液0.5ml;
5.加完菌液后,振荡试管架,混匀,置于56?水浴箱2~4小时,放冰箱过夜,或放置37?水浴箱18小时后观察结果
肥达氏反应操作表 单位:ml
【结果与分析】
先观察对照管,正确结果应无凝集现象,再观察各试验管的凝集现象,凝集程度以“ ”多少表示之。
( )最强,上液澄清,细菌全部凝集沉淀于管底。
( )强,上液轻度混浊,细菌大部分凝集沉淀于管底。
( )弱,上液混浊,细菌少部分凝集。
(-)不凝,液体呈乳状与对照管相同。
效价判定:以能出现“ ”凝集现象的血清最高稀释度为该血清的凝集效价。
般认为O抗体效价在1:80以上,H抗体效价在1:160以上,有辅助诊断意义。但在分析结果时,应注意以下两点:
(1)非肠热症患者,由于曾接种过伤寒,副伤寒疫苗或以往在流行区有过隐性感染或患过伤寒,副伤寒,以及回忆反应等原因,也可呈现阳性结果。不过,由这些原因所引起的阳性反应主要是H抗体升高,O抗体效价一般不高,同时,每隔5~7天试血一次,其抗体效价
一般不会随病程而升高。上述这些都有别于现症感染。
(2)少数肠热症患者,由于发病初期曾使用大量抗生素,或机体有免疫缺陷病,或机机反应性极弱等原因,抗体效价可以很低,甚至为阴性结果。
因此不能只根据肥达氏试验的结果去作简单肯定或否定的结论,必须结合当地流行情况,既往接触史,以及临床症状和体征,作出正确的判断。
篇三:肥达氏反应的操作规程
肥达氏反应的操作规程
[实验原理]
本法是以伤寒O,H;甲、乙、丙副伤寒分别培育,经甲醛处理杀死后,做成菌液供肥达氏应用,用以伤寒的辅助诊断。
[操作方法]
1、取康氏试管,排成5×7形式,5 排分别编成O,H,A,B,C;
2、另取大试管一支,加入病人血清0.25ml,用4.75ml生理盐水作1:20稀释,取2.5ml该稀释血清于每排第一管内分别注入0.5ml;
3、再取2.5ml生理盐水把大试管内血清作2 倍稀释,取2.5ml该稀释血清于每排第二管内分别注入0.5ml,以此类推,每排最后一管加0.5ml生理盐水作阴性对照,各稀释度:1/20,1/40,1/80,1/160,1/320。然后于前六管中逐管加入1:10稀释的各菌液0.5ml,各终稀释度:1/40,1/80,1/160,1/320,1/640。
4、充分振荡混匀,于37?放置16-20小时判定结果。
[结果判定]
根据凝集反应的强弱和有无,分别以4+,3+,2+,1+,-,记录,以呈现(2+)的血清最高稀释度为终点效价。
4+:液体清澈透明,菌体全部被凝成块,沉于管底。
3+:液体较透明,大部分菌体被凝集而沉于管底。
2+:液体稍透明,管底有少量凝集沉淀物。
1+:液体较混浊,可见极少量凝集物。
-:液体混浊,细菌因重力下降于管底呈边缘光滑圆点(与对照管相似)。
[结果分析]
?)首先应考虑当地正常人效价(正常效价)。一般以单份血清
凝集效价:0效价应达1:80以上、H效价应在1:160以上,PA和PB应达1:40以上方有诊断价值;若病程中第2次血清效价比第1次高4倍以上亦有诊断价值。
?)由于H凝集素在血内保持时间较久,0凝集素较短暂,所以曾接种过伤寒、副伤寒菌苗者,
0凝集效价在诊断上较重要。
?)真正的伤寒病人,0凝集素常较H凝集素出现早、但维持时间较短;H凝集素出现较晚、但效价较高且持续时间较长。
?)回忆反应:过去曾接种过伤寒、副伤寒菌苗或患过伤寒、副伤寒病,近期又发生感染如流感、肝炎、结核病等,可非特异地产生较高的H凝集素和较低的0凝集素,此现象称为回忆反应。 ?)若0效价高而H不高(对正常效价而言),则可能是感染早期或与伤寒杆菌0抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。
?)确诊为伤寒的患者中,约有10%的患者该试验始终阴性或效价不高,故阴性结果不能排除伤寒的诊断。
?)采血时间不同,肥达式反应的阳性率也不同。发病第1周约为50%;第2周80%;第4周90%以上。恢复期效价最高,以后逐渐下降,直至转阴。一般以双份血清(急性期和恢复期)对比,效价有明显上升者作为新近感染的指征。
[注意事项]
1、应在光亮处观察管底凝集状态,轻轻摇动判定结果,不能剧烈振荡。
2、菌液稀释后应及时使用。
3、菌液中有摇不散的凝块时,不能使用。
4、应在标签载明的有
效期内使用。