Agilent1100高效液相操作规程
基础医学实验教学中心
Agilent1100型制备高效液相色谱操作规程 一、 操作步骤
(一) 开机:
1( 打开计算机，进入windows画面，并运行Bootp Server程序。 2( 打开1100 HPLC各模块电源。
3( 待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，HPLC
自动与1100通讯，进入工作画面。
4( 从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面，单击
“View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，
“System diagram”，“Sampling diagram”，使其命令前带有“?”
标志，来调用所需的画面。
5( 把流动相放入溶剂瓶中。
6( 打开Purge阀。
7( 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，
进入泵编辑画面。
8( 设Flow:如5ml/min，单击OK。
9( 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，
选中On，单击Ok，则系统开始Purge，直到管线内(由溶剂瓶到
泵入口)无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所有要用通道无
气泡为止。
10( 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中off，单击ok关泵，关闭Purge Valve。
11( 单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow:如1.0ml/min。
12( 单击泵下面的图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击ok。
(二) 数据采集方法编辑
1( 开始编辑完整方法:
从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，选中除“Data analysis”外的三项，单击ok，进入下一画面。
2( 方法信息:
在“Method Comments”中加入方法的信息(如:方法的用途等)。单击Ok进入下一画面。
3( 泵参数设定:
在“Flow”处输入流量，如1.0ml/min”，在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击Ok进入下一画面。 4( DAD检测器参数设定:
输入检测波长、参比波长(检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽 BW:一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW:至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width(Response time):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。选中所用
的灯。)点击Ok进入下一画面。
5( 在“Run time checklist”中选中“Data acquisition”单击Ok。 6( 单击“method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名，如
“test”，单击Ok。
7( 从“Run Control”菜单中选择“Sample info”选项，输入操作者姓
名，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。
区别:Manual—每次做样之前必须给出新名字，否则仪器将上次的数
据覆盖掉。
Prefix—在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的
起始位，仪器会自动命名。
8( 从Instrument菜单选择System on。
9( 等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Run method”，
进样。
(三)数据分析方法编辑:
1. 从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析画面。 2. 从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，点击Ok。 3. 做谱图优化，从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项，从
“Ranges”中选择“Auto scale”及合适的显示时间，单击OK，或选择
“Use Ranges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。 4. 积分:
, 从“Integration”中选择 “Auto integrate”,如积分结果不理想,再
从菜单中选择“Integration Events”选项，选择合适的“Slope s
ensitivity”，“Peak width”，“Area reject”，“Height reject”。
, 从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项， 则数据被积分。
, 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
, 单击左边“?”图标，将积分参数存入方法。
5.打印报告
(四)关机:
1. 关机前，用100,的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系
统10分钟(如甲醇)，然后关泵。
2. 关掉Agilent 1100电源开关。
3. 关闭电脑。
二、注意事项
1( 色谱柱使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，
如pH值范围、流动相类型等;必须使用保护柱;色谱柱长时间不
用时，柱内应充满溶剂，两端封死保存。
2( 流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水(易长
菌)。
3( 仪器运行时，泵头必须用10%异丙醇水溶液虹吸冲洗，不能干
涸。
4( 注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限
会自动停泵。
5( 对于手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲洗进样口同时搬
动进样阀数次每次数毫升
6( 若使用含盐流动相，开机时必须先用10%甲醇水溶液冲洗20
分钟以上再换上含盐流动相。
7( 溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，
当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用35%稀硝酸
溶液浸泡后再洗涤。
8( 检测器的灯有使用寿命限制，一般在正式进样分析前30min
左右开启D灯或W灯，分析结束，立即关灯。
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