柱层析
柱层析:
硅胶的预处理:
以浓盐酸浸泡硅胶14小时，然后用蒸馏水洗涤硅胶4次后，进行减压抽滤后不断加蒸馏水冲洗。在1小时之后，抽滤的水呈中性，但仍然含有氯离子。经过4小时不断的冲洗才使得抽滤液中基本不含氯离子。晾干一周后，在110?烘箱中活化2小时。
活化后的硅胶加石油醚浸泡并搅拌均匀。在装柱时，宜使用口径较大的玻璃漏斗置于层析柱上部，注入1/2高的石油醚，打开下部活塞，然后尽量均匀地将硅胶倾入漏斗，这样可以防止层析柱中形成断层(这一步是实验的关键步骤)。
装柱子(添硅胶)时，有两种方法:即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。不论干法还是湿法，硅胶(固定相)的上
表
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面一定要平整，并且硅胶(固定相)的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂走柱子，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手 摸柱子明显感觉到)，容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平 整地通过，当然也就谈不上分离了。解决的办法是:第一、硅胶一定要填结实;第二、一定要用较多的溶剂"走柱子"，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。 也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。
上样也有干法和湿法之分:干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在
加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量)将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量 芗 洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法。
上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。
网友建议:
1. 普通的硅胶是正相，而不是反相。反相硅胶主要用于HPLC，是键合非极性侧
链(如C8，C18)的硅胶，主要是用于极性物质的分离(防止不可逆吸附或
者保留时间过长)。TLC的洗脱剂和柱色谱不同，一般走柱子的洗脱剂用来做
薄层板时Rf不要大于0.15，不然下的太快不易分纯。
2. 湿法装柱溶剂用你的洗脱剂就可以了，对于样品的溶解不是问
题
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，干法上样
就可以了，用适量乙酸乙酯溶解然后再与适量硅胶(不得过装柱硅胶体积的
1/10)拌匀，挥干(尽量不加热)，然后上样。
3. 湿法上柱的装柱溶剂一般选用洗脱液中极性小的溶剂装柱,比如用氯仿/甲醇
洗脱做洗脱液的话装柱溶剂应为氯仿.
4. 极性指数:环己烷和石油醚,0.2 ，正己烷 0 ，甲苯 2.4，二甲苯 2.6，苯
2.7，乙醚 2.8，二氯甲烷 3.1，异丙醇 3.9，正丁醇 3.9，四氢呋喃 4.0，
氯仿 4.1，乙酸乙酯 4.4，甲醇 5.1，乙腈5.8，乙酸 6.0，水 10.2
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