[word格式] 槐米中芦丁的提取及其与人血清白蛋白荧光光谱研究

[word格式] 槐米中芦丁的提取及其与人血清白蛋白荧光光谱研究 槐米中芦丁的提取及其与人血清白蛋白荧 光光谱研究 2008年12月 第22卷第4期总74期 北京联合大学(自然科学版) JournalofBeijingUnionUniversity(NaturalSciences) Dec.2o08 V01.22No.4SumNo.74 槐米中芦丁的提取及其与人血清白蛋白 荧光光谱研究 黄汉昌,张艾,姜招峰 (1.北京联合大学应用文理学院,北京100083; 2.北京联合大学生物活性物质与功能食品北京市重点实验室,北京100083) [摘要】目的:研究槐米中的芦丁提取及其与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.方法:在有/无 超声协助作用下,采用热水浸取一冷水结晶及热碱液浸取一冷酸液结晶的提取方法,考察芦丁的 提取效果;荧光光谱法测定芦丁对人血清白蛋白发射荧光光谱的影响.结果:热碱液浸取一冷酸 液结晶方法芦丁提取率高于热水浸取一冷水结晶法,超声对提取率 影响不明显;随芦丁浓度的增 加,HSA的内源荧光强度有规律地降低.结论:热碱液浸取一冷酸液 结晶方法为较好的芦丁提取 方法;芦丁与HSA能发生相互作用,改变人血清白蛋白的分子构象, 芦丁对HSA的内源荧光有淬 灭作用. [关键词]芦丁;人血清白蛋白;荧光光谱 [中图分类号]TQ932[文献标识码]A[文章编 号]1005—0310(2008)04—0011-04 AStudyonExtractionofRutinFromFlosSophoraeImmaturus andFluorescenceofHumanSerumAlbuminInteractedWithRutin HUANGHan.chang一,ZHANGAi,JIANGZhao—feng, (1.CollegeofArts&ScienceofBeijingUnionUniversity,Beijing100083,China; 2.BeijingKeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandFunctionalFoods,BeijingUnionUniversity,Beijing100083,China) Abstract:Aim:tostudytheextractionofRutinfrom171OSSophoraeImmaturusandtheinteractionbetweenHumanSe— rumAlbumin(HSA)andRutin.Methods:Rutin’SextractionfromFlosSophoraeImmaturusisinvestigatedbyhotwa- ter/basesolutionwithorwithoutultrasonicandcrystallizatingtheRutinincol dwater/acidsolution:emissionfluores. cenceofHSAindifferentconcentrationofRutiniSdetected.Results:themethodofhotbasesolutionleachingandcold acidsolutioncrystallizationiSbetterthanthatofhotwaterleachingandhotwatercrystallization.andtheextracted quantitiesofRutinarelittleaffectedbyultrasonic—aidedextraction.Thefluo rescenceintensitywi11bedecreasedwhen Rutin’SconcentrationiSincreasedinHSAsolution.Conclusion:hotbasesolutionleachingandcoldacidsolutioncrys. tallizationisagoodwaytoextractRutinfromFlosSophoraeImmaturus.ThemolecularconfigurationofHSAwillbeal— teredwhenitinteractswithRutin.andtheendogeneticfluorescenceofHSAwi11bequenched. Keywords:Rutin;HumanSerumAlbumin(HSA);fluorescencespectrum [收稿日期]2008—09—12 [作者简介]黄汉昌(1975一),男,广东省紫金县人,北京联合大学应用 文理学院助理研究员,主要从事生物化学及分 子生物学方面的研究. [通迅作者]姜招峰(1956一),男,黑龙江哈尔滨人,北京联合大学教授, 博士,主要从事生物化学及分子生物学,自由 基生物学方面的研究. 12北京联合大学(自然科学版)2008年12月 芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutinoside),是黄酮类 生物活性物质,普遍存在于多种植物中,现已发现 至少在70种以上植物中含有芦丁成分,如烟叶,槐 花,荞麦和蒲公英等,其中以槐米和荞麦叶的含量 较高.芦丁具有维持与增强毛细血管抵抗力,降 低其通透性,促进细胞增生和抗炎,抗过敏,利尿, 降血脂等作用,临床上用于治疗毛细血管引起的出 血症,并常作为高血压的辅助治疗药,国外也常用 芦丁做食品及饮料的染色剂.开展槐米中芦丁 提取方法的研究,对槐米的开发与利用具有重要的 指导意义.人血清白蛋白(HSA)是血浆中含量最 丰富的载体蛋白,是生物活性物质发挥生物效应的 重要载体和靶向分子.本文就槐米中芦丁的提取 方法及芦丁与HSA相互作用的荧光光谱进行了研 究,并 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 了芦丁与HSA的相互作用机制. 1实验材料与实验方法 1.1实验材料 国槐槐米,夏季开花季节后采摘晒干;人血清 白蛋白HSA(96%,99%,MERK公司);甲醇(色谱 纯,北京化学试剂公司);磷酸钾盐缓冲液(pH= 7.40,内含NaC1溶液0.5mol/L). Waters1525仪器高效液相色谱(Waters公司), UV一2450紫外可见分光光度计(日本岛津公司), RF一5301荧光分光光度计(口本岛津公司). 1.2实验方法 1.2.1芦丁的提取 热水提取一冷却结晶法:准确取槐花粗粉 20.00g,置于l000mL烧杯中,加入开水500mL,搅 拌,加热到微沸,保持30min,抽滤并收集滤液(先 用纱布过滤,除掉粗粉末,再用滤纸抽滤,至无颗粒 物).此过程重复2次.收集两次滤液,室温静置 12h后抽滤.沉淀物于65?真空干燥,即得芦丁粗 品.将粗品置于蒸馏水中,煮沸至芦丁全部溶解, 趁热抽滤,冷却至20%后静置12h,析出结晶,离心 分离,得精制芦丁,重复结晶操作3次. 酸液浸取一碱液结晶法.:准确称取槐米粗粉 2O.O0g,置1000mL烧杯中,加入开水300mL,加入 0.4%的硼砂水溶液200mL,不断搅拌下用石灰乳 调节提取液pH8,9.微沸下,搅拌提取30rain,趁 热过滤,收集滤液.重复提取2次,合并两次滤液. 用稀HC1调节滤液pH3,4,室温静置12h后抽滤, 沉淀用pH3,4的浓HC1洗涤2次,蒸馏水洗涤两 次至中性.沉淀物于65?真空干燥,即得芦丁粗 品.将粗品置于蒸馏水中,煮沸至芦丁全部溶解, 趁热抽滤,冷却至20~C后静置12h,析出结晶,离心 分离,得精制芦丁,重复结晶操作3次. 超声协助提取法:在超声作用下,重复以上热 水提取一冷却结晶法及酸液浸取一碱液结晶法提 取芦丁的操作. 1.2.2芦丁的鉴定 町见一紫外分光光度法:精密称取芦丁样品 6.0mg于50mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻 度,摇匀配成0.12mg/mL的芦丁样品储备溶液.将 芦丁储备溶液稀释至合适的浓度于分光光度计中 作600,200rim芦丁吸收光谱扫描. 高效液相(HPLC)法测定芦丁纯度:色谱柱为 cl8柱(粒径5m,4.6mm×25em),流动相为甲 醇溶液,流速为1.0mldmin.柱温40?,进样量为 20L,检测波长为254nm. 1.2.3芦丁与人血清白蛋白的相互作用 荧光光谱测定:配制0.1mol/L,pH7.40的磷酸 钾盐缓冲液(内含0.1mol/LNaC1,维持离子强度); 在一系列10mL的比色管中,加入一定体积的HSA 溶液,然后依次加入不同体积的芦丁溶液,以缓冲 溶液定容,摇匀.静置2h后,测定HSA溶液的内 源荧光强度变化情况.仪器条件:激发波长为280 nm,狭缝宽度2.5nm,发射光谱波长300, 4500iqm,狭缝宽度5nm. 2实验结果与讨论 2.1芦丁提取方法的比较 在有/无超声协助作用下,热水浸取一冷却结 晶法及热碱液浸取一冷酸液结晶法分别提取槐米 中的芦丁,实验结果见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1.热碱液浸取一冷酸液 结晶法提取率大于热水浸取一冷却结晶方法. 表1不同芦丁提取方法的比较 提取方法提取样品含量/g 热水浸取一冷却结晶法 超声协助热水浸取一冷却结晶法 热碱液浸取一冷酸液结晶法 超声协助热碱液浸取一冷酸液结晶法 1.98 2.0l 2.8O 2.85 芦丁难溶于冷水(1:800),而略溶于热水(1: 200),可以利用芦丁在冷,热水中的溶解度相差 较大的性质,热水浸取槐米中的芦丁,将提取液冷 却结晶,得到芦丁成分.芦丁属于黄酮类化合物, 含有多个酚羟基,易溶于碱液,并且随温度升高溶 解度增大;而在酸性溶液中溶解度比较小,并且随 第22卷第4期黄汉昌等:槐米中芦丁的提取及其与人血清白蛋白荧 光光谱研究l3 温度降低而减小.可以利用芦丁在冷酸热碱水溶 解度相差悬殊的原理,用碱性水溶液浸取槐米中的 芦丁,酸性水溶液沉淀提取液中的芦丁成分.超声 协助提取法主要依靠超声波的空化作用加速芦丁 的浸取,另外超声波的次级效应,如机械振动,扩散 等也加速芦丁的扩散释放并使其充分与溶剂混合, 缩短提取芦丁的时间.但超声协助提取对芦丁的 提取率影响不大. 2.2芦丁的鉴定 将芦丁精制品配制成0.012mg/mL的甲醇溶 液,在600,200nm波长下作光谱扫描,图谱见图1 一 A,与文献报道的芦丁对照品的光谱扫描图谱(图 1一B)相同.实时光谱扫描监测芦丁样品的 HPLC柱后流出物的吸收光谱(见图2).在前13 min,没有出现吸收峰,14min后有吸收峰,光谱与 芦丁 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品的吸收光谱相同,说明出峰样品为芦 丁,其后未检测到明显的样品峰.HPLC实验分析 表明,提取样品中的芦丁纯度很高. 1O 08 葵 督 O4 O2 0 . 02 波长/nm 图1芦丁的紫外一可见吸收光谱 2.3芦丁对人血清白蛋白荧光光谱的影响 人血清白蛋白中含有色氨酸,酪氨酸,使其具 有很强的内源荧光性,当某些小分子如药物与蛋白 质结合后,会导致其荧光强度下降,这种现象称为 荧光猝灭作用.在280nm激发波长下,芦丁对人 血清白蛋白的荧光发射光谱的影响见图3.芦丁溶 液本身不产生荧光,因此,研究中不用考虑”内滤光 效应”的干扰.固定HSA的量,改变芦丁与HSA的 00 图2芦丁样品的I-IIPLC及实时紫外光谱扫描图谱 含量比例,随着芦丁浓度的增加,HSA的内源荧光 强度有规律地降低,表明二者之问存在相互作用, HSA发射的荧光能量向芦丁发生了转移,芦丁对 HSA的荧光有淬灭作用.HSA在345nm附近的发 射峰可归属于其色氨酸残基的发光,而色氨酸残基 的最大发射波长与其所处的微环境有关_8j,HAS 荧光发射峰位及峰形随芦丁浓度的增加发生蓝移, 表明芦丁的加入改变了HSA的构象. 图3不同芦丁浓度中HSA内源荧光强度 (1,6分别表示芦丁与HSA摩尔比(0:1,5:1, 10:1.20:1,30:1,40:1)×10mollL;7一代表芦 丁空白溶液,不含HSA的芦丁溶液) 3结论 芦丁是重要的黄酮类生物活性物质,槐米中含 有丰富的芦丁成分,热碱液浸取一冷酸液结晶的提 取方法能方便有效地从槐米中提取芦丁成分,提取 率高.HSA是血浆中含量最丰富的载体蛋白,是生 物活性物质发挥生物效应的重要载体和靶向分子. 芦丁对HSA内源荧光有淬灭作用,表明其与HSA 能发生相互作用并改变了HSA的分子构象.以芦 l4北京联合大学(自然科学版)2008年12月 丁为黄酮类物质的分子模型,开展黄酮类物质与 HSA分子相互作用的研究,探讨黄酮类物质与蛋白 [1] [2] [3] [4] [5] [6 质的相互作用机制,对揭示黄酮类药物药效具有重 要意义. [参考文献] 龙全江,杨韬.芦丁的研究概况及展望[J].中国中医药信息杂志,2002,9(4):39—42 盂祥颖,郭良,李玉新,等.芦丁的来源,用途及提取纯化方法[J].长春中医学院,2003,19(2):61—64. 张宏志,管正学,王建立.荞麦中天然芦丁的提取方法研究[J].内蒙古农牧学院,1997,18(2):26—29 舒晓宏,冯梅,陈华,等.槐花米中芦丁提取最佳pH值的实验研究[J].大连医科大学,2005,27(2):91—92 赵文彬,许玉华,王鲁石,等.芦丁的纯化及其含鼍测定[J].时珍国医国药,2007,18(4):876—878. 胡杰,邓宁.芦丁提取工艺的综述[J].中国食品添加剂,2006(5):94—99. [71栾尼娜,吴锦绣,宋玉民,等.芦丁与血清白蛋白结合作用的热力学 研究(I)[J].光谱学与光谱分析,2008,28 (14),856—859. [8]马贵斌,高飞,任斌知,等.荧光法研究药物分子与人血清白蛋白的结合作用[J].化学,1995,53(12):1193— 1197. ? 简讯? (责任编辑李亚青) ++十十++.+.+” + + + + 《北京联合大学(自然科学版)》获第2届中国高校特色科技期刊奖 j2008年12月,在教育部科技司和中国高等学校自然科学研究会开展的第2届”中国高校精 ?品?优秀?特色科技期刊奖”评比活动中,《北京联合大学(自然科学版)》被评为特色期刊,同时,学 {报编辑部被评为高校科技期刊先进集体.此次评选活动从全国各地500余家申报的高校科技期刊 i中,评选出精品期刊65种,优秀期刊100种,特色期刊50种,分别从期刊的离均差率,总被引频次,影 j响因子,他引总引比,基金 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 比,平均引文数,论文下载率,被国内外重要检索系统收录数以及期刊 }的编校,印刷质量等方面进行评比.《北京联合大学(自然科学版)》紧跟学校的发展,从办刊宗 ;旨,办刊定位,编辑方针,出版策略等方面为学校发展应用性教育,培养应用性人才服务,立足于办应 i用性学术期刊,经过多年努力,逐步构建起应用性大学的个性与特色. j编辑部以理论研究为先导,以栏目建设为突破,根据应用型的办学特点,在栏目设置上与学 }校的重点学科或专业,重点实验室紧密结合,与北京地区的区域技术经济发展紧密结合,强调应用性, ?实践性,开放性,创新性,京都性,特别重点强调应用性和立足于为区域技术经济发展服务;以数字化 ;建设为契机,抓住机遇,通过互联网进一步优化学术研究及传播的环境,聚合学术研究及传播的资源, !更加开放地形成办刊优势,丰富应用性学术期刊的办刊实践. }在学校领导的关心和支持下,通过编辑部成员的共同努力,几年来,质量有了明显地上 {升,如影响因子由2004年的0.019增长到2005年的0.153,再到2006年的0.322.从影响因子的排名 {情况看,在其所划分为同级同类的39所综合高校主办的自然科学 类大学的排序中,从2004年的 j37位上升到2005年的29位,再到2006年的8位,上升幅度明显,反 映出的社会影响逐年增加,办 i刊质量大幅提高,社会效益显着. + + + + ++++++++++.+++.++++.+++ + (北京联合大学编辑部供稿); + *- 4--一+一十+.++++—++++++.+