L—天门冬酰胺酶是酰胺基水解酶（word）可编辑
L—天门冬酰胺酶是酰胺基水解酶，是从大肠杆菌菌体中提取分离的酶类药物，其商品名 Elspar ，用于治疗白血病。
性状呈白色粉末状，微有吸湿性，溶于水，不溶于丙酮、氯仿、乙醚及甲醇。 20 ,水溶液贮存 7 天， 5 ? 贮存 14 天均不减少酶的活力。干燥品 50 ? 、 15min 酶活力降低 30 ,， 60 ? 、 1h 内失活。最适 pH8.5 ，最适温度 37 ? 。
L —天门冬酰胺酶的产生菌是霉菌和细菌，故可作制造酶的原料。
( 二 ) 生 产 工 艺
1 (工艺路线:
L —天门冬酰胺酶生产的工艺流程见图 5 — 1 。
[种子培养][菌种培养][发酵][压滤、风干]玉米浆肉汤培养基 玉米浆丙酮种子菌种发酵液大肠杆菌肉汤菌种 37?,24h37?,4~8h37?,6~8h
[提取][精制]
甘氨酸硼酸缓冲液醋酸聚乙二醇 无热原酶液酶溶液粗酶提取液干菌体pH=4.2~4.4?，30min60pH=8.3?，37不同pH值处理
无菌 分装
门冬酰胺酶冻干制剂
图 5 — 1 门冬酰胺酶生产工艺流程图
2 (工艺过程:
? 菌种培养 采取大肠杆菌 AS1-375 ，普通牛肉培养基，接种后于 37 ? 培养 24h 。 ? 种子培养 16 ,玉米浆，接种量 1 ,, 1.5 ,， 37 ? 通气搅拌培养 4 , 8h 。 ? 发酵罐培养 玉米浆培养基，接种量 8 ,， 37 ? 通气搅拌培养 6 , 8h ，离心分离发酵液，得菌体，加 2 倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉。 ? 提取、沉淀、热处理 每千克菌体干粉加入 0.Olmol , L pH8.0 的硼酸缓冲液 lOL 37 ?保温搅拌 1.5h ，降温到 30 ? 以后，用 5mol , L 醋酸调节 pH4.2 , 4.4 进行压滤，滤液中加入 0.2 倍体积的丙酮，放置 3 , 4h ，过滤，收集沉淀，自然风干，即得干粗酶。取粗制酶，加入 0.3 ,甘氨酸溶液，调节 pH8.8 ，搅拌 1.5h ，离心，收集上清液，加热到 60 ? 30min 进行热处理。离心弃去沉淀，上清液加 2 倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，用 0.01mol , L ， pH8.0 磷酸缓冲液溶解，再离心弃去不溶物，得上清酶溶液。
? 精制、冻干 上述酶溶液调节 pH8.8 ，离心弃去沉淀，清液再调 pH7.7 加入 50 ,聚乙二醇，使浓度达到16 ,。在 2 , 5 ? 放置 4 , 5 天，离心得沉淀。用蒸馏水溶解，加 4 倍量的丙酮，沉淀，同法反复 1 次，沉淀用 pH6.4 ， 0.05mol , L 磷酸缓冲液溶解， 50 ,聚乙二醇反复处理 1 次，即得无热原的 L —天门冬酰胺酶。溶于 0.5mol , L 磷酸缓冲液，在无菌条件下用 6 号垂熔漏斗过滤，分装，冷冻干燥制得注射用 L —天门冬酰胺酶成品，每支 1 万或 2 万单位。
( 三 ) 检测 方法
L —天门冬酰胺酶催化天门冬酰胺水解释放游离氨，奈斯勒试剂与氨反应后形成红色络合物，可借比色进行定量测定。
取 lml0.04mol , L 的 L —天门冬酰胺， 0.5mol , LpH8.4 的硼酸缓冲液， 0.5ml 细胞悬浮液或酶液，于 37 ? 水浴中保温 15min 后加 0.5ml15 ,三氯醋酸，以终止反应沉淀细胞或酶蛋白，离心取上清液 1ml 。加 2ml 奈斯勒试剂和 7ml 蒸馏水 15min 后，于 500nm 波长处比色测定产生的氨。
活力单位定义:每分钟催化天冬酰胺水解 1umol 氨的酶量定为一个活力单位。 -------------
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