钼蓝比色法测定食品中的还原型维生素C

一 } 《食品与发酵工业 》 Food and Fermentation Industries 1 99g No．5／ J 7．3 钼蓝比色法测定食品中的还原型维生素 C ／ 徐茂军 马卫兴 华士川I ——— ．海工享磊— i化学系) 摘 要 ：食品中的还原型缨生素 C(Vc)能将磷钼酸盐定量还原成亮蓝色的钼蓝络合物 ，通过比色即可测定 出食品中的还原型维生素 C的量。本文详细研究了影响显色反应的各种因素，结果表明，在酸性介质中，维生 素 C与磷钼酸盐的反应速 度快 且反应体 系的嗳光度稳定。在本文试验条件下 ，Vc浓度在 0～150 g，25ml范围 内服从比耳定律 应用车法测定韭菜、桔子晶等食品中的还原型Vc，并与 2，6-二氯靛酚法测定结果比较，基本 一 致。本文通过试验建立了一种测定食品中还原型 Vc的新 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 、 ／ ，， 关键词：堂 t选 ， 分析 ’ J 还原型维 生素 C的测定方法很多，有碘 量法 ]、2，6-二氯靛酚法[ 、电位滴定法 、流 动注射分析法 、原子吸收法 ]、杂多酸光度 法_6]、新亚铜试剂法 等。目前，在食品分析 中经常使用的是 2，6-二氯靛酚滴定法，由于 该方法需使用进 口试剂 ，且每次测定前需对 染料进行标定，操作繁琐，而且用该法测定桔 子等样品中维生素 C时，常因样品本身有色 而使滴定终点难以判断，增加操作误差。由于 磷铝酸盐经还原剂还原后可以生成亮蓝色的 钼蓝络合物 ，因此，从理论上讲，可 利 用 食品中维生素C的还原性将磷钼酸盐还原成 钼蓝络 合物，通过 比色测 定食 品的还原 型 vc。目前国内外尚未见到利用钼蓝比色法测 定食品中还原型 Vc的研究报道 。本文详细研 究了介质、pH等因素对 钼蓝显色 反应的影 响，确定了钼蓝比色法测定食品中还原型 vc 的最佳试验条件，从而建立了一种测定食品 中还原型 Vc的新方法。该方法操作简便快 速 ，不需使用特殊 的仪器设备 ，特别适用于大 批样品的检测分析。 实 验 部 分 一 、测定原理 磷酸盐和钼酸盐在酸性介质中反应生成 磷钼酸盐并被还原型 vc还原成亮蓝色的钼 蓝络合物 ，反应式如下： 24(Nit )2Mo仉 +2H PO丌一21H2sd 一^ — 2Z(nn‘)sP仉 ·I2MoO3]+2I(NH ) 0‘+24H~O H O-- C] I (NH．) ．．12MoO +H0～ +3Ha — — H一 J I H0 一 C～ H J CHzOH (还原型 VC) O = C ——一 1 I o— C I 3NH·CI+2HzO+ (MozO5·4MoO )：．}Ⅱ ‘ +o=c1 Ol I l (钼蓝) H—C．— 140-- C— H l CH~OH (脱氢抗血酸) 维普资讯 http://www.cqvip.com 若反应体系中钼酸盐和磷酸盐都过量， 则钼蓝的生成量，即溶液蓝色深浅应与还原 型 Vc的数量成正 比，通过比色即可测定食品 中的还原型 vc的含量 。 二、主要仪器及试剂 1，722型光栅分光光度计 (I-海第二分 析仪器厂)。 2．vc标准液；准确称取 0．2500gVc标准 样 ，以适量 的 pH4，0缓冲液 溶解并定 容至 250ml，摇匀，即成 lmg／ml的 Vc贮备液。用 时稀释成 100~g／rm的使用液(现用现配)。 3．钼 酸 铵 溶 液：称取 30．00g钼 酸 铵 r(NHd)s·Mo O“·4H20]溶 于 300ml水 中， 另取浓硫酸 75ml慢慢加入 100ml水中，冷却 后加水至 200ml，然后 加入到 300ml钼 酸铵 溶液中。最后加水至 1000ml。 4，磷酸盐溶液：称取 4．39g磷酸二氢钾 (KH PO )，加水溶解后定容至 1000ml。 三、标准曲线绘制 分别吸取 0．目、1．0、3．0、5．0、7．0、9．0、 11．0、1 3．0、15．0ml Vc使用液于 25mi比色管 中，依次分别加 2．0mi钼酸铵、2．0ml磷酸盐 溶 液，加 水 至刻 度 ，混 匀后 放置 20rain，于 690rim处以 ]cm比色皿测吸光度 根据测定 结果绘制工作曲线。 四、样品中还原型 Vc测定 准确 称取适量样 品 (使 Vc含量 在 5～ 150mg之间)，加少量 pn4．0缓冲液 ，于研钵 中研细，定容至 ]00ml，过滤，弃去最初几毫 升滤液。吸取适量滤液于 25ml比色管中，以 下操作同“标准曲线绘制”。 五、样品中还原型 Vc的计算 根据样品溶液的吸光度值 ，从工作曲线 上查出对应的含量，按下式计算样 品中还原 型 Vc含量 ： 导× x100 还原 型 vc(rng／10O~)一 而 式中 C： 测定用样液中 Vc含量( g) rt： 测定样液体积(rod ： 样液定容总体积 (m1) Ⅳ： 样品重量(g) 结 果 与 讨 论 一 、 吸收光谱 25ml比色管中依次加入 5．0ml Vc标准 液 ，2．0rnl钼酸铵液、2．0ml磷酸盐溶液 ，用水 定容 至刻 度，以不加 Vc的空 白为参 比，在 500~800nm区间内测定吸光度值 ，并绘制成 吸收曲线(图 1)。 圈 1． 吸收光谱 由图 】可见 ，络合物的最 大吸收波长为 690rim 。 二、介质 pH对吸光度的影响 酸碱度对吸光度的影响如图 2所示。 图 2． pH对吸光度的影响 在 pl{< ．5的酸性介质中，体系的吸光 度值最大且稳定，而在 DH>6．0的介质中， 体系的吸光度值明显降低。这可能与以下两 维普资讯 http://www.cqvip.com 方面因素有关。首先 ，磷酸盐和铝酸盐生成磷 钼酸盐 的反应必需在酸性介质中进行 ：；其 次 ．Vc水溶液在偏酸性介质中稳定，不发生 降解反应，而在碱性溶液中则很容易降解损 失- 。因此，本文选用酸性介质进行显色反 应 。 三、磷酸盐用量对显色反应的影响 反应体系中磷酸盐数量是影响体系吸光 度值大小的重要因素之一。实验证明，对于 800p6 Vc，在过量铝酸盐存在下，磷酸盐用量 大于 1．Oral时，体系吸光值最大且恒定不变 (图 3)。故本文选用 2．Oral 图 3． 磷酸盐用量试验 四、铝酸盐用量对吸光度值的影晌 由于钼酸盐的加入量影响反应体 系中磷 酸盐的生成量，因而影响钼蓝的生成量 。 图 4． 钼酸盐用量试验 由图 4可见 ，对于 8001．*g Vc，在本文试验 条件下 ，钼酸盐用量大于 1．Oml时，体系吸光 度值最大且稳定不变。故本文选用 2．Oral。 五、反应速度及体系吸光度稳定性 按 “工作曲线绘制 所提供 的方法 ，加入 500~gVc，在不同时间内测定溶液的吸光度， 考察显色反应速度及体系吸光度稳定性 由图 5可见 ，显色反应约在 15min内进 行完全，此时溶液的吸光度值达到最大，而且 在以后 5h内稳定不变 。 图 5． 反应速度及体系吸光度稳定性 六、工作曲线及线性范围 按照本文实验条件下的测定结栗绘制工 作曲线(如图6)。 Vc浓度在 0～l500ug／25ml范围内服从 比耳定律，线性相关系数 r=O．9994。 围6． 工作曲线 七、回收试验 按“工作曲线绘制”所提供的方法对加入 的 Vc标准样进行 回收试验 ，结果见表 1，回 收率在 99．1～l 01．4 之问。 呲 。 维普资讯 http://www.cqvip.com 八、测定方法的精密度试验 按照 样品中还原型 Vc测 定”所提供 的 方法分别测定韭菜、桔子晶等样品中的还原 型 Vc含量 ，结果见表 2。五次平行测定值 的 相对标准偏差在 2．0～2+6之间 衰 1． 回 收 试 验 标准 vc加入量( g) 实测量( B) 回收率( ) 90 89．2 99．1 280 278．4 99．4 550 557．7 1 01．4 850 857．6 1 00．9 11O0 1ll1．0 101．O 衰 2． 精 密 度 试 验 样 品 五次平行测定值(mg／l OOg) 平均值(rag／1008) 标准差(m8／l OOg) 变异系数( ) 萝 10．78 11．15 11．34 10．89 11．22 l1．08 0．23 2．O 韭 菜 38．61 37．28 38．83 37．1 4 38．46 38．10 0．79 2．1 土 且 I5．23 i6．02 i5．62 I5．83 I6．I8 l5．78 0．37 2．2 香 菜 41．98 40．03 41．64 41．83 40．63 41．22 0．83 2．1 桔子晶 14．72 13．89 13．94 14．28 l4．64 l4 29 0．38 2．6 九、与 2，6-二氯靛酚法比较 按本文方法测定了韭菜等样品中的还原 型 Vc。同时按文献 的方法，用 2，6-二氯靛 酚滴定法测定了相同样品的 vc含量 ，比较两 种方法的测定结果，基本一致(表 3)。 衰 3．两种方法测定结果比较 。 测定值(n'~／lOOg) 相对偏砉 样 品 比色法 滴定法 ( ) 韭 菜 38．10 37．64 1．2l 香 菜 ， 41．22 40．84 0．93 桔子晶 14．29 1 4．42 0．91 *5次测定的平均值 结 论 本文通过试验，确定了钼蓝比色法测定 食品中还原型 Vc的最佳条件，从而建立了一 种简便快速测定食 品中还原型 Vc的新方法 。 本方法 同样适用于其它食品中的还 原型 Vc 的测定。 参 考 文 献 [1]《中国药典》，二部．1985．495～497 E2q刘福岭等I《食品物理与化学分析方法》，轻工 业出版社，北京 ,1987 [3]束小清等I食品科学，1988，9 E43马赢昌等 1分析化学+1991，2，182～184 E53谢志海等1分析化学．1988．9，809~811 [831占文等1分析化学，1991．3，357～36l E73方果征等l食品工业科技，1987，5 E83黄梅丽 等；《食品化学 》，中国人 民大学 出版 社，北京 ．1986 Determination of Vitamin C in Food by M olybdenum Blue Spectrophotometry Xu MaojUEI Ma W eixing Hua Shichuan (Department of Food and Chemi~l Engineering，Huaihai Institute of Technology，Lian yungang) A BSTRA CT In this paper the effect of some factors on the developing i~eaction has been studied．It i冬shown that the reaction of Vc and molybdophosphate is quickly and the 0．D value of th妇 system is stable in acid agent．Beer s law is obyed in the range of 0～ 1500 Pg per 25ml for reduction type Vc． Key words：Vitam in C，M olybdenum blue me~ ed ·41’ 维普资讯 http://www.cqvip.com