【精品】实验八 可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析85
实验八 可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析 一、实验目的:
? 解反相色谱的原理和应用
? 握
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
曲线定量法
二、实验原理:
咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因1.2%,1.8,，茶叶约含2.0%,4.7,。可乐、APC药片中均含有咖啡因。其分子式为CHON，结构式: 81024
O
NCH3CHN3
NNO
CH3
样品在碱性条件下，用氯仿定量提取，采用反相液相色谱柱进行分离，以紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度作工作曲线，再根据样品中的咖啡因面积，由工作曲线算出浓度。
三、实验仪器与药品
?仪器
LC-10A液相色谱仪 C-R6A数据处理机 色谱柱(EconosphereC) 平头微量进样18器
?药品
? 甲醇(色谱纯) 双蒸水 氯仿(A.R) 1mol/LNaOH;NaCl(A.R.) NaSO(A.R.) 24咖啡因(A.R.) 可口可乐(1.25L瓶装) 雀巢咖啡 茶叶
?1000mg/L咖啡因储备液 将咖啡因在110?下烘干1小时，准确称取0.1000g咖啡因，用氯仿溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度。
四、实验步骤:
? 色谱条件:
柱温:室温
流动相:甲醇,水,60:40
流量:1.0mL/min
检测波长:275nm
? 咖啡因标准系列溶液配制:分别用吸量管吸取0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40mL咖啡因储备液于六只容量瓶中，用氯仿定容至刻度，浓度分别为40、60、80、100、120、140mg/L
? 样品处理:
?将100mL可口可乐置于250mL烧杯中，剧烈搅拌30min或用超声波脱气5min，以赶净二氧化碳。
?准确称取咖啡0.25g，用水溶解定容至100mL。
?准确称取茶叶0.3g,加蒸馏水30mL煮沸10min，冷却后将清液转移至100mL容量瓶，并按此操作重复两次，定容至刻度。将3份样品溶液分别进行干过滤，弃去前过滤液，取后面的过滤液。
?分别取上述三份样品溶液25.0mL于125mL分液漏斗中，加饱和氯化钠溶液，溶液，
然后用氯仿分三次萃取。将氯仿提取液分离后经装有无水硫酸钠小漏斗，过滤至容量瓶中，最后用少量氯仿多次洗涤小漏斗，定容至刻度。
?绘制工作曲线:待液相色谱仪基线平直后，分别注入咖啡因标准系列溶液10μl，重复两次，要求两次所得的咖啡因色谱峰面积基本一致，记下峰面积与保留时间。
?样品测定:分别注入样品溶液10μl，根据保留时间确定样品中咖啡因色谱峰的位置，重复两次，记下咖啡因色谱峰峰面积。
五、结果处理:
?根据咖啡因标准系列溶液的色谱图，绘制咖啡因峰面积与其浓度的关系曲线。
?根据样品中咖啡因色谱峰的峰面积，由工作曲线计算可口可乐、咖啡、茶叶中咖啡因含量(分别用mg/L、mg/g和mg/g
表
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示)
六、注意事项:
?液体样品必须经过萃取处理，不能直接进样，虽然操作简单，但会影响色谱柱的寿命。
?不同牌号的茶叶、咖啡中咖啡因含量不大相同，称取样品可酌量增减。
?若样品和标准溶液需要保存，应置于冰箱。
?样品和标准的进样量要严格保持一致。
七、思考题:
?用标准曲线法的优点是什么,
?根据结构式，咖啡因能用离子交换色谱法分析吗,
?若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图，能给出准确结果吗,与本实验的标准曲线相比何者优越,为什么,
?在样品干过滤时、为什么要弃去前过滤液,这样做会不会影响实验结果,为什么,
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