【word】 两株益生菌的抑菌性及其合生元对试验小鼠肠道菌群作用研究

【word】 两株益生菌的抑菌性及其合生元对试验小鼠肠道菌群作用研究 两株益生菌的抑菌性及其合生元对试验小 鼠肠道菌群作用研究 齐鲁药事QiluPharmaceuticalAffairs2010Vo1.29No._4 两株益生菌的抑菌性及其合生元对试验小鼠肠道菌群作用研究 程秀芳,刘虹,张志焱,谷巍 (山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安271000) 摘要:目的探讨益生茵嗜酸乳杆菌Lactobaeillusacidophilus和嗜热链球茵Streptococcusthermophiluss对致病性金黄 色葡萄球菌和致病性大肠埃希菌()8的抑茵性及其合生元制剂对试验小鼠肠道菌群作用效果.方法用杯碟法试验两株益 生茼对金黄色葡萄球菌和致病性大肠埃希茵().是否有透明押茵圈;用舍两株茵的合生元对试验小鼠灌胃14d,取其直肠粪便 检测粪便中乳杆菌,肠杆茵,肠球菌数量变化.结果嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌对致病性金黄色葡萄球茵和致病性大肠埃希 茵0.有明显的抑茵圈,其合生元能够显着提高小鼠肠道乳杆菌的茵数,肠杆菌,肠球菌数量增加不明显.结论合生元对肠 道致病茼有抑制作用和较好的调节作用. 关键词:肠道致病菌茵嗜酸乳杆菌嗜热链球菌合生元 中圈分类号:Q936文献标识码:A文章编号:1672—7738(2010)04—0234—03 AntagonisticpropertyoftwoprobioticsandresearchonregulationonIntestinalFora oftestmiceofthecorrespondingsynbiotics CHENGXiu—fang,LIUHong,ZHANGZhi—yan,GUWei (ShandongBo1y—lelyBiongineeringLimitedCompany,Taian271000) ABSTRACT:0BJECTIVEToprobetheinhibitioneffectonthepathogenicstaphy10coccusaureusandescherichiacoliO78 Oftwoprobiotics,containinglaetobacillusacidophilusandstreptococcusthermophiluss,andeffectofregulationofintedtinalflora oftestmiceofthecorrespondingsybbioties.METHODSWithcylinderplatemethod,testtheantimicrobialeffecttOpathogenic staphyloc0ccusaureusandpathogenicescherichiacoliO78oftwoprobioticswhetherthereisatransparentzoneofinhibition.The experimenta1micewerefedsynbiotiescontainingtwoprobioties14d,removerectalfaeces,anddetectcolonyvolumechangeof laetobacillus,enterobaeterandenterocoecus.RESULTSLaetobaeillusaeidophilusandstreptococcusthermophilushadinhibito- ryeffectonpathogenicstaphy1ococcusaureusandpathogeniceschenchiacoliO78withobviousantibacterialcircle,synbiotics couldsignificantlyincreasethenumberoflaetobaeillusinthemouseintentina1.butenterobacteriaceae,enterocoecihadasmall increaseinvolume.CONCLUSIONSynbioticscouldinhibitthegrowthofint estina1bacteriaandcouldbebettertOregulatein— testinalflora. KEYWORDS:IntestinaIbacteia;lactobaeillusacidophilus;streptococcust hermophiluss;synbiotics 早在2O世纪初,俄国科学家伊力亚?梅契尼科夫发现人们 的健康长寿与乳制品中的乳酸杆菌有关,他认为乳杆菌改善了 肠道菌群平衡,降低了产毒菌株的活性,维持肠道正常菌群的平 衡,调节免疫功能;同时也促进人体对营养物质的吸收.近lO 年来,越来越多的学者认识到肠道菌群对人类健康的重要性,以 及膳食成分对肠道菌群的构成及代谢的有益调节作用.随着微 生态基础理论研究的深入,以及该理论被应用在实践上取得成 效和抗生素产生的耐药性,不良反应,益生菌愈来愈受到医药, 保健食品界的欢迎,益生菌产品得到迅速发展,国内外益生菌市 场也呈现出良好的发展态势. 益生菌是指具有生物活性,摄人适当量时可以对宿主产生 有益作用的微生物[1],益生菌的保健作用体现在:提高免疫力. 维持消化肠道微生态平衡r,预防胃肠道感染,抗肿瘤作.【{{L副 等.人体内的益生菌主要包括乳酸菌属,双歧杆菌属,芽胞杆菌 属及部分丁酸梭菌属的微生物[.嗜酸乳杆菌Lactobaeillusae— idophilus和嗜热链球菌Streptococcusthermophiluss即为国家卫 生部规定可用于保健食品的两株益生菌. 益生元是一类非消化性物质,可作为底物被肠道正常菌 群所利用,能选择性刺激结肠内一种或几种细菌生长和(或) 提高其活性.大多数益生元很少直接被机体利用.常用的益 生元如低聚果糖,地聚异麦芽糖,大豆低聚糖,低聚木糖等. 合生元为益生菌与益生元的混合制品.很多文献对益生菌 的菌株筛选,生产工艺等进行了大量的研究,但就益生菌菌 株的抑菌性及动物试验报道的较少.本文主要是对益生菌嗜 酸乳杆菌,嗜热链球菌对致病性菌金黄色葡萄球菌,致病性 菌大肠埃希菌()s的体外抑菌性研究与合生元制剂(嗜酸乳 杆菌和嗜热链球菌加低聚术糖)对试验小鼠肠道菌群的影响 做了研究报道,以供参考. 齐鲁药事?Qil.Phal—maceuticalAffairs2010Vo1.29.No.4 1材料与方法 1.1菌株嗜酸乳杆菌Lactobacillusacidophilus和嗜热链球 菌Streptococcusthermophiluss(购于中国普通微生物菌种 保藏中心). 指示菌株:致病性金黄色葡萄球菌Staphy1oco1ccusau— reus和致病性大肠埃希菌O%Escherichiacoli(购于山东农 业大学). 1.2试剂葡萄糖,蛋白胨,牛肉膏,酵母膏,磷酸二氢钾,畦 温一8O,乙酸钠,硫酸镁,硫酸锰,磷酸氢二钾,碳酸钙(中国 . 天津巴斯夫化工有限公司),酪蛋白胨(青岛高科园海博生 物技术有限公司),琼脂(4301EvalleyBlodLosAngeles CA,USA) 1.3培养基乳酸菌发酵培养基及培养条件:MRS培养基, 37”(2静止培养36h,计数,备用. 指示菌培养基及培养条件:葡萄糖0.2,蛋白胨1,NaC1 0.5,牛肉膏0.5%,pH7.0,37?,180rpm摇床振荡培养24h. 将菌液稀释,使活菌数约10.,lOcfu?mL,,备用. 固态培养基:葡萄糖0.2.蛋白胨1,NaC10.5,酵母膏 0.5%,pH7.0.底层加1.5的琼脂,上层加1.O的琼脂. 计数培养基:MRS培养基(嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌计 数). 伊红美蓝琼脂(肠杆菌计数),叠氮钠一结晶紫,七叶苷 琼脂(肠球菌计数),Lbs琼脂(乳杆菌计数),购于青岛高科 园海博生物技术有限公司. 1.4合生元制剂嗜酸乳杆菌不少于0.5×10cfu?mL一, 嗜热链球菌不少于l×lOcfu-mL一,(由本公司菌液车间 生产),低聚木糖(山东龙力生物科技有限公司)含量不少于 35. 1.5试验动物选用体重18,22g昆明种健康小鼠,每组lO , l2只[购于济宁抗生素厂,生产许可证号SCXK(鲁)2008 一 oooz]. 1.6试验方法 1.6.1体外抑菌试验(杯碟法):吸取20mL底层培养基倒人 灭菌培养皿中,使其在平皿底部均匀摊布,在水平台上凝周, 作为底层,吸取指示菌液适量加入到50?左右的上层培养 基中,使活菌数约lO,10cfu?mL(能得到清晰的抑菌 圈为佳)混匀后吸取5mL,倒人底层培养基已凝固的培养皿 中摇匀,作为菌层.在每个平板上放置灭菌过的牛津杯4个 (外径8ram,内径6mm,高10ram),稍微下压,使其与平板培 养基无缝隙,杯间距离要相等.取制备好的平板,用移液器 分别吸取1.0mL嗜酸乳杆菌和嗜热量球菌菌悬液和空白培 养基注入牛津杯中,静止5,10mln,换陶瓷盖,37?培养箱 中培养16,18h,用游标.g-尺量取抑菌圈的大小. 1.6.2小鼠动物试验: 1.6.2.1剂量设计与分组:选用体重18,22g昆明种小鼠, 实验设3个剂量组和1个空白组,每组lO,12只小鼠,用受 试样品灌胃14d.空白对照灌服生理盐水.三个剂量组分 别为人体服用量(剂量1组),人体服用量的10倍(剂量2 ?235? 组),人体服用量的3O倍(剂量3组)人的日服量为20mL. 1.6.2.2试验步骤:在给予受试样品之前,无菌采取小鼠粪 便0.1g,10倍系列稀释,选择合适的稀释度分别接种在选择 性培养基上,分别是伊红美蓝琼脂(肠杆菌),叠氮钠一结晶 紫一七叶苷琼脂(肠球菌),Lbs琼脂(乳杆菌),37?培养 24h,数菌落数,计算出每克湿便中的菌数.最后一次给予受 试样品之后24h,与实验前同样方法取直肠粪便,分别计肠 杆菌,肠球菌,乳杆菌活菌数,称体重. 1.7小鼠试验数据统计用SPSSI1.5软件对试验原始数据 进行方差齐性检验,满足方差齐要求的数据资料用两样本均 数比较的t检验进行统计处理;对方差不齐的数据资料用t 检验进行统计处理. 2结果与分析 2.1抑菌性试验结果嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌对致病菌 金黄色葡萄球菌和肠道致病菌0s的抑菌性见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf l. 表1嗜酸乳杆菌,嗜热链球菌对金黄色葡萄球菌 和08的抑菌圈大小(单位:mm) 嗜酸乳杆菌 嗜热链球菌 空白培养基 18.5/l8.0 14.0/14.5 17.0/16.8 l3.0/12.8 由表1可以看出:空白培养基对金黄色葡萄球菌和大肠 杆菌()s没有透明抑菌圈,而两株菌的菌液均有较好较大的 透明抑菌圈,嗜酸乳杆菌比嗜热链球菌的抑菌圈大,说明嗜 酸乳杆菌和嗜热链球菌对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌(). 都有抑菌作用,且嗜酸乳杆菌的抑菌效果更好. 2.2动物试验结果与分析小鼠分组后试验前后体重的变 化,结果见表2. 表2合生元对试验小鼠体重的影响(j?SD) 由表2可以看出:小鼠实验组的初体重和终体重与其相 对应的对照组比较均无统计学意义.(P>0.05).由此可说 明在试验期间,嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌对试验小鼠体重无 影响. 将试验前后小鼠直肠粪便中的乳杆菌,肠杆菌,肠球菌 计数结果取对数,结果见图1. i.’O ..OO .... 0 T?1)0 b. 短5.? 烬 4.O ,00h骶圆空白对旦毫帮奄!扦l量2荆量3试验孵试蕞组搠 图1小鼠肠道试验前后菌群变化图 ? 236? 由图1数据结果通过SPSS分析,试验组3个剂量组乳 杆菌活菌数与空白对照组,试验前的活菌数相比明显增高且 差异显着(P<O.05). 试验组中剂量组和高剂量组肠杆菌活菌数与空白对照 组无显着性差异,低剂量组肠杆菌活菌数比空白对照组有所 降低且差异显着(P<O.05). 试验组低剂量组和中剂量组与空白对照组相比无显着 性差异,高剂量组的活菌数与空白对照组相比有所降低且差 异显着(P<O.05). 综上所述:肠道乳杆菌活菌数与空白对照组和试验前有 明显增高,肠杆菌和肠球菌对试验前和空白对照组没有明显 增高,根据《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》(卫 生部2003,5)调节肠道菌群功能试验检验方法判定结果,双 歧杆菌/乳杆菌有明显升高,肠杆菌/肠球菌无明显变化,说 明本试验样品对试验小鼠有调节肠道菌群的作用. 3讨论 体外抑菌试验结果显示,嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌对致 病性大肠埃希菌和致病性金黄色葡萄球菌有很好的抑制作 用,用含两株菌的合生元产品对试验小鼠14天的灌胃试验 结果表明:适量补充合生元制剂能够提高肠道中有益菌的数 齐鲁药事QiluPharmaceuticalAffairs2010Vo1.29,No.4 量,拮抗肠道病原微生物定植及繁殖生长,从而可有效减少 由于细菌感染导致胃肠道功能紊乱而腹泻[.其主要原因 是肠道有益菌的酸性代谢产物(乙酸,乳酸,短链脂肪酸等) 降低肠道局部pH.代谢产物细菌素,有过氧化氢等可有效抑 制腐败菌繁殖.补充益生菌和益生元对人体的保健作用已 被大家所公认,试验还表明:大剂量的补充益生菌制剂,肠道 菌群中的益生菌并未呈上升趋势,究竟补充多少益生菌或者 合生元制剂对人体肠道能起到很好的调理作用呢?这还有 待于进一步深人的研究. 参考文献 [1]李琛,李充璧.益生菌的生理作用及特性.内蒙古医学杂志, 2009,41(6):706,708. [2]王坚镪,汤瑾,蒋燕群.益生菌对大鼠肠道菌群紊乱和细菌易位 后的影响.上海交通大学(医学版),2006,26(2):l63,165. [3]李秀真,朱万孚.乳酸杆菌抗肿瘤作用研究进展.国外医学:肿 瘤学分册,2004,31(4):252254. [4]毕晋明,王永军.动物肠道益生菌的生理功能及其在动物生产中 的应用.畜禽养殖,2006,II:40~42. [5]方景泉,迟涛,李慕扬.功能性菌种及其健康益处.中国乳品 业,2008,36(6):48,50. 骨伤灵胶囊药效学试验研究 柴龙龙,郑晖,安佰平 (淄博市药品检验所,山东淄博255086) 摘要:目的研究骨伤灵胶囊对大鼠骨折愈合的影响.方法采用大鼠机械性骨折,观察骨伤灵胶囊的接骨作用及对血 液流变学的影响;采用小鼠耳肿胀模型,观察了骨伤灵胶囊的抗炎作用;采用小鼠醋酸扭体试验,观察了骨伤灵胶囊的镇痛作 用.结果骨伤灵胶囊对闭合性骨折大鼠骨痂生长有促进作用,加快骨折愈合,并可降低全血粘度,改善血液循环,降低骨折 大鼠碱性磷酸酯酶含量,对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀有明显抑制作用,对0.6醋酸所致小鼠疼痛有明显镇痛作用.结论 骨伤灵胶囊能促进大鼠骨折的愈合,具有明显的抗炎和镇痛作用. 关键词:骨伤灵胶囊药效学骨折愈合抗炎 中圈分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1672—7738(201O)04—0236—03 PharmacodynamicsstudyoilGushanglingCapsule CHAILong—long,ZHENGHui,ANBai—ping (ZiboInstituteforDrugContro1,Zibo255086) A联RACT:0B?0c.I1EToreaearchtheeffectoftheGushanglingCapsuleonfracturehealingofra ts_METHODSUsingmeehani— ealfractureinrats,observebone-knittingofGushanglingCapsuleanditseffectsonhemorheology;Usingmiceearswellingmodel,ob~.a’ve thedfectofthegush,anglingcapsuleonanti-inflammatory;Usingwrithingtestinmice,observetheeffectofthegushanglingcapsuleonan— algesie.R? TheGushanglingCapsulehaveeffectsOilpromotingthegrowthofthecallusofclosedfracturerats.reducingthewhole bloodviscosity,improvingbloodcirculation,reducingthealkalinephosphataselevelinfracturedrats,inhibitingthemiceearswellingcau~l byxylene,andreducingobviouslythemicepaininducedby0.6aceticacid.CONCLUSIONThegushanglingcapsulecanpromotefrac— turehealingofrats.wi出significantanti-inflammatoryandanalgesiceffect. KEYWORDS:GushanglingCapsule;pharmacodynamics;fracturehealing;anti—inflammatory