干粉引物溶解稀释方法:
干粉引物溶解稀释方法:
收到引物后,在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重复性要求较高,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融。引物一般配制成10-100pmol/ul(umol/l)。 三博远志的引物在出厂时都标有1OD 相当于多少umol 的计算结果,进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算:
稀释成100pmol/ul 1OD 需加水量(ul)=1OD相当于umol 数×10000
例如,您拿到的引物DNA合成
报告
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单上标有1OD?0.0035umol ,包装量是1OD/管,如果您希望将引物浓度定为100umol/L,那么只需用35ul无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可。
?液体引物再稀释可用下列公式:
稀释引物要达到的浓度(pmol/ul),母液浓度(pmol/ul)×汲取母液的体积(ul)?(汲取母液的体积(ul),加水量(ul))
( Oligo DNA是以OD260单位来计算的,这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中,260nm波1
长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位,根据此定义,1 OD260单位相当于33μg的Oligo DNA,您可以根据此数据和您的Oligo DNA分子量,计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。
2( 引物序列的分子量计算公式如下:
MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61
A=1 C=3 G=11 T=6 例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG
MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=6541
3( Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法计算:Oligo DNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条Oligo DNA的分子量=碱基数×324.5。
例:您得到一管标为5 OD260的20 mer Oligo DNA
分子量=20×324.5=6490
质量数=5×33=165μg
摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol
若加灭菌双蒸水400μl溶解,则浓度为25nmol/400μl=62.5μM
4( 装有引物的eppendorf管一般保存于-20?,临用前稀释。
5( 由于Oligo DNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开管子前请先离心10,000rpm,1min,然后再慢慢打开管盖。
6( 在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水,盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟,再次离心10,000rpm,1min。
7( 计算原引物管primer的浓度(必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确)。 8( 计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。
9( 标明原引物管、应用引物管、稀释方法,置-20?保存。