几种溶液(PBS、TBS、Citrate buffer、Trypsin、Pepsin、AEC、Blotto A)的配制
方法
1、PBS:
取ZLI-9061 PBS 溶于1000ml 的蒸馏水中,混匀,测pH 值应在7.2~7.4 之间,若偏离此范围,请用0.1N 的HCL 或NaOH 调整。
2、TBS:
2.1 Tris 缓冲液配方:(0.5 M pH7.6)
Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g
1N HCL 约420ml
双蒸水加至1000ml
Tris 缓冲液配制方法:
先以少量双蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl 后,用HCl(1N)或NaOH (1N)
将pH 调至7.6,最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液,4℃冰箱中保存。
2.2 TBS 配方:
Tris-HCI 缓冲液(0.5M pH7.6)100ml
NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)
双蒸水加至1000ml
TBS 配制方法:
先以少量双蒸水溶解NaCl,再加入Tris-HCl 缓冲液,最后加双蒸水至
1000ml,充分摇匀。
3、枸橼酸盐缓冲液(Citrate buffer):
3.1 储存液:
A. 0.1M 枸橼酸溶液:称取21.01g 枸橼酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml 蒸馏水中。
B. 0.1M 枸橼酸钠溶液:称取29.41g 枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml 蒸馏水中。
3.2 工作液:
取9ml A 液和41ml B 液加入450ml 蒸馏水中,溶液pH 值应为6.0±0.1 4、胰酶(Trypsin):
4.1 ZLI-9011 胰蛋白酶消化液:
常用浓度为0.125%,即使用前将一滴试剂 1 胰酶溶液和三滴试剂 2 胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释),则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从0.05%(1:10 稀释)至0.25%(1:1 稀释)。
4.2 ZLI-9010 胰蛋白酶:
取0.05g 或0.1g 胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8 的无水氯化钙水溶液中,溶解即可。
5、胃酶(Pepsin):
4%胃蛋白酶,用0.1mol/L HCL 配制。
6、DAB:6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit:
使用前只需将试剂盒提供的A、B、C 三种试剂各一滴加至1ml 双蒸水中,即可获得1ml DAB工作液,简单易用。
6.1 ZLI-9030 DAB:
6mgDAB 溶于10mlTBS(0.05M pH7.6),再加入0.1ml 浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物,即可。
7、AEC:
4mg AEC 溶于1ml 二甲基甲酰胺中,加入14ml 浓度为0.1M 的醋酸缓冲液(pH5.2),然后加入0.15ml 3%H2O2,过滤掉沉淀物。
8、RIPA:
1×PBS,1%NP 40,0.5 sodium deoxycholate,0.1% SDS(此液体可长期保存)。以下抑制剂以储存液方式保存,临用前加入RIPA 中。
8.1 10mg/ml PMSF 异丙醇溶液(用量为10m l/ml)
8.2 Aprotinin(Sigma 产品,用量为30m l/ml)
8.3 1000mM sodium orthovanadate 冷冻液
(用量为10m l/ml)
9、Blotto A:
常规使用1×PBS,5% milk,0.05% Tween 20。
10、Blotto B:
与Phosphotyrosine 抗体共用,1×PBS,1% milk,0.05% Tween 20。部分实验中milk 可完全去除,但可能引起背景增高。
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