引物设计的注意事项引物设计的注意事项引物设计:GC含量一般为40—60%大小:荧光定量PCR一般大小为300个碱基之内Tm:一般为58到62度之间，且一般Tm值比退火温度高5?C引物是待扩增片段的一部分，上游引物的序列是基因序列的一部分，下游序列与基因反向互补。1、择合适的靶序列:设计引物之前，必须分析待测靶序列的性质，选择高度保守、碱基分布均匀的区域进行引物设计。2、长度:一般来说，寡核苷酸引物长度为15,30bp。3、Tm值:引物的Tm值一般控制在55,60?，尽可能保证上下游引物的Tm值一致，一般不超过2?。若引物...
引物设计的注意事项引物设计:GC含量一般为40—60%大小:荧光定量PCR一般大小为300个碱基之内Tm:一般为58到62度之间，且一般Tm值比退火温度高5?C引物是待扩增片段的一部分，上游引物的序列是基因序列的一部分，下游序列与基因反向互补。1、择合适的靶序列:设计引物之前，必须分析待测靶序列的性质，选择高度保守、碱基分布均匀的区域进行引物设计。2、长度:一般来说，寡核苷酸引物长度为15,30bp。3、Tm值:引物的Tm值一般控制在55,60?，尽可能保证上下游引物的Tm值一致，一般不超过2?。若引物中的G+C含量相对偏低，则可以使引物长度稍长，而保证一定的退火温度。4、(G+C)含量:有效引物中(G+C)的比例一般为40,60,。5、碱基的随机分布:引物中四种碱基的分布最好是随机的，不存在聚嘌呤和聚嘧啶，尤其在引物的3’端不应超过3个连续的G或C。6、引物自身:引物自身不存在连续4个碱基以上的互补序列，如回文结构，发夹结构等，否则会影响到引物与模板之间的复性结合，尤其避免3’末端的互补。
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